Ultimate 3000型高效液相色谱仪的培训资料

1、Ultimate 3000型高效液相色谱仪的培训资料一、仪器原理：流动相被高压泵打入系统，样品经进样器进入流动相，然后被流动相载入色谱柱。由于样品各组分在两相中具有不同的分配系数，因此在两相中作相对运动，经过吸附、解吸的分配过程，依次从色谱柱内流出通过检测器，转换成电信号。以峰面积形式表现出来。正相色谱：采用极性固定相和相对非极性流动相。一般可用于分离极性化合物。正相色谱住一般采用极性强的硅胶等填料，洗脱顺序由弱到强。一般流动相用正己烷、氯仿、二氯甲烷等。反相色谱：采用相对非极性固定相和极性流动相。一般可用于分离非极性化合物或弱极性化合物。反相色谱柱的填料一般以硅胶为基质，表面健合极性相对弱的

2、官能团的健合相。如 C18C8C4等。流动相一般用极性强的水、缓冲液、甲醇、乙腈等。洗脱顺序由强到弱。二、硬件介绍：1、试剂架2、泵3、自动进样器4、柱温箱5、紫外检测器三、其他：1、流动相、清洗液存量和配置时间。有机相，把滤头堵了，可把滤头泡在有机相里超声清洗）流动相超声脱气：超声10到 20分钟。超声机水位尽量高于流动相水位，效果更好。时间不宜过长。2、溶剂滤头：溶剂充足，压力低于下限报警，或者脱气机前管道频繁出现大量气泡。超声处理后无效更换新的滤片。34、滤片冒白沫或长绿毛就要用 3%或 5%稀硝酸超声 10min，再换纯水超声。四、LPG-3400泵内部构造（低压四元泵，最高耐压 62

3、0bar流动相从储液瓶出来，经过真空脱气机，到时间比例阀，经过泵头，到毛细管混合器，再到静态混合器，最后进入自动进样器，然后把样品环里的样品送入色谱柱，再到检测器。泵工作原理：注意：绝对不允许泵在无液体的情况下运行，会损坏柱塞杆或柱塞密封垫。连接毛细管道时，保证接头部件无污染。操作完成后，及时清洗。在将系统从缓冲盐溶剂变到有机溶剂时，必须用去离子水作为过滤溶剂进行替换。1h）时，及时关闭与泵相连的任何检测器的灯，避免检测池中溶剂蒸发。每个通道需要设置 100%单独清洗来排气泡，不能通过设置一定比例让多通道同时快速清洗，容易损坏比例阀。切记，要在系统压力为 0的情况打开或者关闭清洗阀。为了避免溶

4、剂在溶剂瓶里产生气泡，溶剂瓶高度应与泵同高或更高。蠕动泵：作用：1、清洗柱塞杆2、检测泵是否漏液清洗液用 10%甲醇水。如用浓度高的甲醇水，会因为不导电而导致系统报错“你的清 10%异丙醇，会腐蚀密封圈，把柱塞杆抱死，不能工作。真空脱气机：一般的泵标配都是反相的密封圈，所以要做正相的时候要把脱气机关掉，不脱气。还要更换成正相密封圈。反相密封圈和废液管都不耐正相试剂。标明“SDN”的泵则可以做正相。五、自动进样器：包括：进样针、样品环、进样阀、注射器和注射器阀、清洗口、转盘传送、托盘、针驱动。六通阀：端口 1 连接注射器 / 缓冲环端口 2 连接注射器出口毛细管端口 3 连接针口毛细管端口 4

5、连接柱毛细管端口 5 连接泵毛细管端口 6 连接针/样品环清洗针外壁有进样前清洗和吸取样品后清洗。六、柱温箱：开启柱温箱的门时要小心。柱温最好比室温高 5。七、紫外检测器：包括：泄露传感器、流通池、灯、泄露排泄口。没有液体经过流通池的时候，不要打开紫外灯，以避免流通池中溶剂挥发。开泵稳定 5分钟后再开灯，避免流通池里有气泡，漂移过大无法通过自检和校正。不要经常开关灯，每开关一次灯的寿命会损失几十小时。连续两次开关灯之间至少隔 15分钟。否则灯过热易导致烧坏。各部分电源关机后再开间隔时间至少 15秒。关了灯后 5分钟再关检测器电源。八、一些常见故障：1、基线漂移可能的原因：（1） 柱污染（2）

6、系统没充分平衡（3） 溶剂级别低（4） 环境不稳定（5） 检测器不能达到操作温度（6） 溶剂循环使用（7） 流通池脏了（8） 灯太旧2、重复性差可能的原因：（1） 有气泡（2） 阀或注射器阀不紧（3） 泵有脉动3、出现鬼峰可能的原因：（1） 脱气通道污染（2） 溶剂级别低或不纯九、色谱柱：拿到一根新的色谱柱要先检查包装、柱身是否损坏、说明书等。按说明书活化、使用柱子。色谱柱的清洗：以 15cmC18柱为例，用过缓冲盐流动相后，关机前正确清洗色谱柱和系统的方法：先用含510有机相的水溶液冲洗60分钟左右，然后逐渐过渡到100%有机相，最终在100有机相继续清洗30分钟。注意不要用50%甲醇冲洗色谱柱，因为此比例粘度系数最大，容易损坏色谱柱。 色谱柱的存放：存放前要除去杂质、盐等，防止细菌生长。若长时间不用，建议用80%有机相保存。两