高二导学案 朱伟强 选修一《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 》（第一课时）

1、 专题二 课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数33胚胎工程的应用及前景（第一课时）第1课时精子和卵子的发生高二生物备课组 主备人：朱伟强 审核人：黄志明学习目标1.明确培养基对微生物进行选择的原理。 2.学会统计微生物数量的方法。3.能进行实验设计与操作，并对实验结果进行分析和评价。知识点一筛选微生物的研究思路【知识梳理】1.菌株筛选(1)自然界中目的菌株的筛选筛选的依据：根据它对 的要求，到相应的环境中去寻找。实例：从热泉中筛选出 。热泉7080 的高温条件淘汰了 ，而使耐热的 脱颖而出。(2)实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、 、 等)，同时 或 其他微生物

2、生长。方法：利用 筛选。(3)选择培养基概念：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。制备原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。制备方法：a在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出 和 ；加入高浓度的食盐可以得到 。b改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离 微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除 的微生物；用含无机碳源的培养基分离 微生物； 作为唯一氮源时，可以分离出能分解尿素的微生物。c改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到耐 的微生物；用普通

3、培养基在无氧条件下分离 和 微生物。(4)分离分解尿素的细菌的培养基培养基组成提供的营养或作用KH2PO4 1.4 g无机盐Na2HPO4 2.1 gMgSO47H2O 0.2 g葡萄糖10.0 g 尿素1.0 g 、碳源琼脂15.0 g 用蒸馏水定容至1000 mL水从物理性质看此培养基属于 培养基，是由于加入了凝固剂 。从功能上看属于 培养基，此培养基的 只有尿素，只有能合成 的微生物才能分解并利用尿素；缺乏 的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长繁殖，受到抑制，所以，用该培养基能够筛选出 的微生物。2统计菌落数目(1)活菌统计法： 。原理：当样品的 时，培养基表面生长的一个菌落，来

4、源于样品稀释液中的 。通过统计平板上的 ，就能推测出样品中大约含有多少活菌。活菌数计算方法：每克样品中的菌株数(CV)M。C：代表某一稀释度下平板上生长的 ；V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：代表 。统计方法：为了保证结果准确，一般设置 个平板，选择菌落数在 的平板进行计数，并取其 。统计菌落数往往比活菌实际数目低的原因：当 连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(2)总菌计数法： 法。此方法需用特定的 进行计数，此方法不能区分细菌的死活。3设置对照(1)对照实验：除了 的条件以外，其他条件都 的实验。(2)主要目的： 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。如设置 培养基作

5、为对照组，观察培养基是否有杂菌污染。【问题探讨】1.能在选择培养基上生长的一定是目的菌吗？2教材提供的案例中A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原因？提示：方案一：其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A同学操作无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照实验的设置是必不可少的。【典题分析】题型一选择培养基的选择作用例1在缺乏

6、氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出()A乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 B固氮细菌、大肠杆菌、放线菌C固氮细菌、霉菌、放线菌 D固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌【题后归纳】选择培养微生物的两种方法(1)可利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基。(2)可利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质，经培养后，其他微生物生长受抑制，而分离对象却可大量增殖，在数量上占

7、优势。题型二统计菌落数目的方法剖析例2自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将他们分离提纯，然后进行数量测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。对大肠杆菌进行计数，应选用_法接种样品。适宜温度下培养。结果分析：(1)测定大肠杆菌数目时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，与事实更加接近的是_。A一个平板，统计的菌落数是230B两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240C三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D四个平板，统计的

8、菌落数分别是210、260、240和250，取平均值240(2)一同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上菌落数的平均值为212，那么每毫升样品中的菌落数约是(涂布平板时所用的稀释液体积为0.2 mL)_。(3)用这种方法测定菌体密度时，实际活菌数量要比测得的数量_，因为_。(4)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定大肠杆菌的品系被污染了？为什么？_。【题后归纳】两种统计菌落数目方法的比较项目显微镜直接计数法稀释涂布平板法(间接计数法)原理利用特定的血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来

9、源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌主要用具显微镜、血细胞计数板培养基计数依据菌体本身培养基上的菌落优点计数方便、操作简单计数的是活菌缺点死菌、活菌都计算在内操作较复杂，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低(当两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的只是一个菌落)计算公式每毫升原液含菌数40010000每小格平均菌体数稀释倍数每毫升原液含菌数某一稀释度下培养基上平均菌落数涂布平板时所用稀释液的体积稀释倍数注：表中400、10000都是常数。题型三对照实验的设置例3为了判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是()A未接种的选择培养基 B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉