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文档简介
1、共共1页第 页可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存器和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质即使仅有一个基团的差别或是同分异构体都能获得有效分离。分离系统,该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为需要两根连用时,可在二者之间加一连接管)内径为,由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为N粒度的固定相由基质和固定液构成)固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性如硅胶表面的硅酸基
2、因基本已除去、多孔性孔径可达和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍与气相色谱中固定相的制备一样)或者用化学法偶联各种基因如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等或配体的有机化合物。因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数就越大。这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。再者,高效液相色谱的
3、恒温器可使温度从室温调到,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。物理上测得物质的透光率,然后取负对数得到吸收度。大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外或可见光吸收基团,因而有较强的紫外或可见光吸收能力,因此既有较高的灵敏度,也有很广泛的应用范围,是液相色谱中应用最广泛的检测器。为得到高的灵敏度,常选择被测物质能产生最大吸收的波长作检测波长,但为了选择性或其它目的也可适当牺牲灵敏度而选择吸收稍弱的波长,另外,应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相。紫外检测器的波长范围是根据连续光源(氘灯)发出的光,通过狭缝、透镜、光栅、反射镜等光路组件形成单一波长的平行光束。通过光栅的
4、调节可得到不同波长。波长范围应该是根据光源来确定的,不同光源波长范围也不一样。光波根据光的传播频率不一样而划分的。紫外的,常用为(。紫外光的范围一般指。吸收度单位是相当于多少伏的电压,范围的大小应该适中较好,实际工作中一般就需要左右。气相色谱法,学生根据所查资料现场讨论以决定各方法的优劣测定过程一开电源开关检验吸收池的成套性(具体过程在后面内容中操作)选择工作波长(按设定键,以及增加、减小按钮,进行设定)测定过程二选择测量方式(按方式键选择透射比模式与吸光度模式)润洗比色皿,依次装入参比溶液和测量溶液参比溶液于光路中,透射比模式下同时调和在吸光度模式下,测定测量溶液的吸光度荧光检测器的工作原理
5、是用紫外光照射某些化合物时它们可受激发而发出荧光,测定发出的荧光能量即可定量。很多与生命科学有关的物质,如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用,尤其在用荧光衍生剂后,可以检测很微量的氨基酸和肽。荧光检测剂的使用:、将荧1光剂按一定比例加入到系统内,加入荧光剂后向系统内补充适量的冷媒以便把荧光剂安全推入系统内。2、系统运行20分钟以后便可戴上专用眼镜,用检漏仪照射系统的外部,泄漏点呈明亮的黄色。3、如漏点极小,建议你隔一天用紫光灯仔细检查系统管路。4、如果有些地方看不到,你可以用一个反光镜,放在要检查的地方,用紫光灯照射反光镜,就可以看到隐蔽地方是否泄漏,也可以用一块干净的抹布擦一下怀疑泄漏的地方
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