酶免基础知识和血筛产品介绍课件

1、酶联免疫检测技术简介血液筛查试剂特点及发展历程北京万泰生物药业股份有限公司汪 月 才 2012年3月一、酶联免疫检测技术简介什么是ELISA?免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质 。 ELISA是一种免疫测定。基础定义抗原（Antigen）：能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗体（Antibody）：能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。机体被微生物感染后，先产生IgM抗

2、体，然后产生IgG抗体。经过一段时间，IgM抗体量逐渐减少而消失，而IgG抗体可长期存在，在疾病痊愈后可持续数年之久。重要指标灵敏度：能检测到的分析物的最小量，表示检测下限的能力。特异性：鉴别阴性标本的能力。精密度：指对同一个标本进行重复分析，其结果间的符合率。ELISA检测方法 1.夹心法. 2.间接法. 3.竞争法. 4.捕获法.夹心法双抗原夹心：固相(包被)抗原Ag + 样品(抗体Ab) + 酶标抗原Ag* Ag-Ab-Ag* + 底物(TMB)显色双抗体夹心：固相(包被)抗体Ab + 样品(抗原Ag) + 酶标抗体Ab * Ab-Ag-Ab* + 底物(TMB)显色间接法固相(包被)抗

3、原Ag + 样品(抗体Ab) + 酶标二抗Ab* Ag-Ab-抗Ab* + 底物(TMB)显色TMB+H2O2样品酶标二抗底物包被抗原竞争法固相(包被)抗原Ag + 样品(无抗体Ab) + 酶标抗体Ab* Ag-Ab* + 底物(TMB)显色 捕获法固相-抗IgM抗体(抗) + 样品(IgM) 抗-IgM + 酶标抗原Ag* 抗-IgM-Ag* + 底物(TMB)显色 TMB+H2O2样品酶标抗原包被抗IgM底物二、血液筛查试剂特点及发展历程1、人类免疫缺陷病毒诊断试剂第三代检测试剂简介全称：人类免疫缺陷病毒HIV（1+2型）抗体诊断试剂盒方法：双抗原夹心酶联免疫法（第三代）检测对象：血液标本

4、中的HIV总抗体原料：基因重组（万泰和厦大合作研制），包被GP41、GP120、GP36，片段齐全。检测窗口期：20天左右基 因 重 组 多 表 位 嵌 合 抗 原对HIV-2型阳性出色的检测能力试剂盒内设置有HIV 型和型阳性对 照，为国产试剂首创，我们使用美国BBI 血清盘Panel202对万泰试剂进行考核。 对HIV O亚型的检测O亚型血来源于美国BBI超强的抗干扰能力临床研究显示，多种其他疾病潜在干扰因素血清标本均不会影响万泰两步法HIV诊断试剂盒的灵敏度和特异性，适合临床使用国产第四代HIV诊断产品明显缩短窗口期25结 论 HIV Ag/Ab诊断试剂全新第四代 HIV 筛查试剂为使用

5、者提供 :增强检验安全性更可信赖的实验结果简 介1、乙型肝炎HBsAg及HBsAb检测2、乙型肝炎HBeAg及HBeAb检测3、乙型肝炎HBcAb及HBcAb-IgM检测4、乙型肝炎前-S1及前-S2检测（大蛋白）5、乙型肝炎HBcAg及前-S1检测（ Dane颗粒）6、乙型肝炎核酸检测乙肝标志物及临床意义1乙型肝炎病毒（HBV）具有明显的种属及嗜肝特性，可致持续性病毒感染。我国属乙肝感染的高发区，乙肝表面抗原（HBsAg）的携带者超过10%。通常判断HBV感染及其状况的指标为HBV血清血标志物乙肝两对半、HBc-IgM、HBV DNA等。乙肝病毒（HBV）又称Dane颗粒（丹颗粒），由外至内

6、可分为包膜蛋白、核壳蛋白、HBV DNA等主要组成。包膜蛋白构成乙肝病毒表面抗原（HBsAg）核壳蛋白构成乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和乙肝病毒e抗原（HBeAg）乙肝标志物及临床意义2乙肝表面抗原（HBsAg） HBsAg于1963年在澳大利亚土著人血中发现，故也称为澳大利亚抗原（简称“澳抗”），具有免疫原性，可刺激机体产生相应的抗体，是机体感染HBV后最早出现的血清血指标。 HBsAg分为4个亚型：adr、adw、ayw和ayr。不同亚型的HBsAg刺激机体产生的HBsAb不同。乙肝标志物及临床意义3乙肝表面抗体（HBsAb） HBsAg刺激机体产生的特异性抗体，能中和体液中的HBV，感

7、染乙肝病毒后6-23周出现。见于乙肝恢复期、HBV既往感染和乙肝疫苗免疫后。HBsAb滴度10mIU表示具有保护性，可抵御同一亚型的再感染。乙肝标志物及临床意义4乙肝病毒核心抗原（HBcAg） HBV核心颗粒外表面具有HBcAg活性，但外周血中没有游离的HBcAg。HBcAg阳性表示有Dane颗粒存在，有传染性。乙肝标志物及临床意义5乙肝核心抗体（HBcAb） HBcAb是乙肝核心抗原的总抗体。感染HBV后最早出现的抗体是HBc-IgM抗体，它是乙肝病毒急性感染的重要指标，慢性肝炎的炎症活动期也呈阳性。核心抗体不是中和抗体，HBc-IgG抗体可持续多年不消退，是既往感染的指标。乙肝标志物及临床

8、意义6乙肝e抗原（HBeAg） HBV核心颗粒内表面具有HBeAg活性，也可以由HBcAg经蛋白酶降解后产生，在乙肝潜伏期后期出现，略晚于HBsAg。HBeAg阳性表示HBV在体内复制，有很强的传染性。 进入恢复期后，HBeAg随着HBsAg的消失而消失，其消失前后出现HBeAb。乙肝标志物及临床意义7乙肝e抗体（HBeAb） HBeAb的出现预示HBV复制减弱或中止，疾病可能向好的方向转化。HBeAg逐渐消失HBeAb逐渐产生的时期称为血清转换期，即由复制期转为非复制期。在这一时期可能出现eAg、eAb同阳的现象。HBeAb也不是保护性抗体。乙肝标志物产生的先后顺序HBsAg(HBcAg)H

9、BcAbHBeAgHBeAb 乙肝两对半模式常见模式（出现率140%） 模式sAgsAbeAgeAbcAb出现率临床意义13040%a、急、慢性肝炎b、提示HBV复制21015%a、急性HBV复制b、慢性HBsAg携带者c、传染性弱 3510%a、急性HBV趋向恢复b、慢性HBsAg携带者c、长期持续容易癌变4130%未感染过HBV5515%a、既往感染，仍有免疫力b、非典型恢复型，急性HBV感染模式sAgsAbeAgeAbcAb出现率临床意义6210%a、既往感染过HBVb、急性HBV感染恢复c、少数标本仍有传染性7510%a、既往感染过HBVb、急性HBV感染窗口期816%a、被动或主动免

10、疫后b、HBV感染后已经康复9 -0.55%a、既往感染过HBVb、急性HBV感染后已经康复常见模式（出现率140%） 少见模式（出现率14%）模式sAgsAbeAgeAbcAb临床意义10a、慢性HBsAg携带者，传染性弱b、急性HBV感染11a、慢性HBsAg携带者易转阳易发生基因整合b、急性HBV感染趋向恢复12早期HBV感染或慢性携带者，传染力强13a、急性HBV感染，趋向恢复b、慢性HBsAg携带者14a、亚临床型HBV感染早期b、不同亚型HBV二次感染15模式sAgsAbeAgeAbcAb临床意义16亚临床型或非典型感染1718亚临床型或非典型感染早期19a、非典型性急性感染b、提

11、示NANBH20非典型性急性感染少见模式（出现率14%）少见模式（出现率14%）模式sAgsAbeAgeAbcAb临床意义 21急性HBV感染中期22HBV感染后已经康复23亚临床型或非典型感染2425HBV感染后趋向康复3、丙型肝炎诊断试剂抗-HCV检测中HCV的抗原5UTR C E1 E2 NS2 NS3 NS4 NS5 3UTR 结构区 非结构区第一代 c100 第二代 C22 C33c c100第三代 C22 C33c c100 NS5简介全称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒方法：间接酶联免疫法（第三代）检测对象：血液标本中的HCV IgG 抗体原料：基因重组，包被NS3、NS4、NS5、

12、CORE，片段齐全。窗口期检测针对HCV四种抗原的抗体第二代试剂在感染后平均10周左右可以检出第三代试剂感染后平均7-8周为阳性在极少数病例中，如免疫抑制、肾功能衰竭等，抗-HCV可以保持阴性检定所考评市场流通的HCV抗体检测试剂发展方向1、双抗原夹心法代表生产企业：北京万泰目前进度：完成临床考核，等待批准文号2、抗原抗体联合检测方法代表生产企业：美国伯乐目前进度：2009年在欧洲上市，2012年下半年引入中国4、TP简 介全称：梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒方法：双抗原夹心酶联免疫法检测对象：血液标本中的梅毒总抗体原料：基因重组原料包被P15、P17、P47。常用梅毒检测方法的比较TP EIA 与

13、TPPA的比较病人血清数量梅毒检测阳性梅毒检测阴性类风湿10010乙肝20020红斑狼疮606 标本：类风湿病人血清10份，乙肝病人血清20份，红斑狼疮病人血清6份。来源于解放军301医院。 结论：在被检测的36份血清中，未发现假阳性反应。万泰TP试剂对特殊标本的检测 检测单位：北医第一医院皮肤科、新疆HIV检测中心结论：万泰梅毒EIA灵敏度较TPPA好部分临床考核数据6、胶体金系列试纸条的结构及制造工艺WT1234567881. 塑料底衬2. 黏合剂3. 硝酸纤维素膜4. 对照线5. 检测线6. 交联垫（样品垫）7. 吸水纸8. 保护膜试纸条图解试纸条工作原理 在硝酸纤维素膜的检测线上包被有

14、特异性抗体，对照线上包被有兔抗抗体，另一个特异性抗体在标记胶体金后干燥于硝酸纤维素膜下端的玻璃纤维上。 当样品由于层析原理流动时，首先溶解干燥的金标sAb单抗，特异性HBsAg抗原与其反应，在流过检测线时再和另一个单抗结合形成免疫复合物。由于包被单抗被固定在硝酸纤维素膜上，免疫复合物就被留下，逐渐形成肉眼可见的红紫色条带，此时该样品为阳性。继续流动到对照线时，金标sAb单抗和羊抗兔IgG结合显色，出现对照带。 当样品中不含HBsAg特异性抗原时，标记胶体金的单抗流过对照线时也可和该处的羊抗兔抗体结合也可形成红紫色条带，导致对照线显色。WT胶体金试纸条的优缺点： （1）优点:(a)灵敏度适中； (b)使用方便，适于快速诊断； (c)易于存放，效期长。 （2）缺点:(a) 应用时间短，范围小； (b)部分项目灵敏度较低； (c) 价格较贵。三、新版药典对血筛试剂改进及意义2010版中国药典新要求2010版中国药