人类辅助生殖技术应用概述

1、人类辅助生殖技术应用概述中山大学从属第一医院徐艳文人类辅助生殖技术应用概述第1页人工授精夫精人工授精赠精人工授精常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）常规体外受精单精子卵胞质内注射（intracytoplasmic sperm injection, ICSI）射出精睾丸/附睾精植入前遗传学诊疗（preimplantation genetic diagnsosi, PGD）人类辅助生殖技术人类辅助生殖技术应用概述第2页适应证男方原因宫颈原因免疫原因女方排卵障碍不明原因性不孕步骤夫精人工授精临床妊娠率10-15%人类辅

2、助生殖技术应用概述第3页-5-15中山大学从属第一医院促排卵治疗诱发排卵有排卵障碍情况下以诱发单个卵泡或少数卵泡发育为目标超排卵在可控制范围内诱发多卵泡发育和成熟为ART奠定基础治疗对象很多本身有正常排卵功效人类辅助生殖技术应用概述第4页-5-15中山大学从属第一医院IUI中促排卵作用授精时间更准确纠正排卵障碍提供更多可用卵子人类辅助生殖技术应用概述第5页适应证输卵管盆腔原因子宫内膜异位症排卵障碍经促排卵治疗无效严重少弱畸精症无精症重复IUI失败免疫性不孕常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）人类辅助生殖技术应用概

3、述第6页步骤药品促排卵经阴道穿刺取卵体外授精胚胎培养胚胎移植胚胎冷冻新鲜周期失败后解冻胚胎移植常规体外受精-胚胎移植in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET人类辅助生殖技术应用概述第7页GnRH激动剂：达必佳，达菲林GnRH拮抗剂：加尼瑞克，思则凯Gn：重组FSH：果纳芬，普丽康尿源性FSH：丽申宝，福特蒙尿源性FSH和LH：贺美奇，HMG主要药品人类辅助生殖技术应用概述第8页促排卵方案-短效长方案GnRH-a 0.1mg qd月经第二十天黄体中期GnRH-a 0.05mg qdGn14-21天垂体达降调整标准主导卵泡达18mm时注射HCG，

4、36hr后取卵人类辅助生殖技术应用概述第9页促排卵方案-长期有效长方案月经第二十天黄体中期GnRH-a 1.3mg单次注射Gn14-21天垂体达降调整标准主导卵泡达18mm时注射HCG，36hr后取卵人类辅助生殖技术应用概述第10页促排卵方案-拮抗剂方案Gn主导卵泡达18mm时注射HCG，36hr后取卵月经第2-3天开启促排5-6天加拮抗剂人类辅助生殖技术应用概述第11页ART临床治疗风险 穿刺并发症 血栓栓塞 妊娠相关并发症 其它风险人类辅助生殖技术应用概述第12页经阴道穿刺取卵术并发症严重并发症（0.5%-1.5%）阴道出血100ml 0.8%盆腔感染 0.6%盆腔脓肿卵巢扭转盆腔出血卵巢

5、过分刺激综合征人类辅助生殖技术应用概述第13页取卵术后卵巢改变非常脆轻易撕裂经过测定Hb和Hct改变，推测通常取卵术后平均出血量232130 mL防止在卵巢内横向摆动人类辅助生殖技术应用概述第14页卵巢过分刺激综合征（ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS） -促排卵最严重医源性并发症 -正常妊娠中罕见 *发生率: - 轻度： 8 23% - 重度： 3.5-8% COH - 轻中度：7.3% - 重度： 4.2% 人类辅助生殖技术应用概述第15页病理及临床表现体液外渗毛细血管通透性增加胸水、腹水、心包积液、全身水肿低血容量血液浓缩高凝状态肾灌注降低少尿

6、、无尿电解质紊乱血栓形成氮质血症腹胀、恶心、呕吐咳嗽、气促人类辅助生殖技术应用概述第16页卵巢过分刺激综合征（ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS）临床表现卵巢体积显著增大血液浓缩，腹腔积液，胸腔积液少尿电解质紊乱血栓形成、ARDS及多器官功效衰竭 人类辅助生殖技术应用概述第17页OHSS分度分类卵巢大小症状轻度5-10cm1级：腹胀不适 2级：1级症状+恶心、呕吐及/或腹泻 中度10cm3级：2级症状+超声确定腹水4级：3级症状+腹水、胸水临床表现和呼吸困难 重度12cm5级：4级症状+血液浓缩，血粘度增加、低血容量，肾灌注降低及少尿 人类辅助生殖技

7、术应用概述第18页OHSS分度依据OHSS发生时间，又分为早发型OHSS和晚发型OHSS早发型发生在HCG后37天，其发生与卵巢对促性腺激素反应性相关，而且被外源性HCG激发晚发型HCG后1217天，多伴有多胎妊娠，系内源性HCG所致晚发型OHSS程度往往比早发型严重 人类辅助生殖技术应用概述第19页体外授精-胚胎移植试验室步骤人类辅助生殖技术应用概述第20页试验室仪器设备试验室质控体外授精胚胎培养胚胎移植胚胎冷冻胚胎解冻体外授精-胚胎移植试验室步骤人类辅助生殖技术应用概述第21页A、显微操作系统B、程序冷冻仪及液氮罐C、CO2浓度测试仪和温度测试仪D、电子天平，超纯水仪和渗透压仪E、冰箱F、

8、空气净化设备G、CO2和N2，混合气体气瓶试验室仪器和设备人类辅助生殖技术应用概述第22页1、显微镜A、相差显微镜B、体视镜C、倒置显微镜D、荧光显微镜试验室仪器和设备人类辅助生殖技术应用概述第23页IVF工作站试验室仪器和设备人类辅助生殖技术应用概述第24页CO2培养箱：试验室仪器和设备ThermoK-system G-185Cook MINC Benchtop Incubator人类辅助生殖技术应用概述第25页1、质量控制：温度：233 湿度：30 60%气压： 10Pa尘埃：百级（配子操作区），万级（胚胎试验室），十万级（更衣室，取精室）可挥发有机物（VOC）： 0.5ppm振动，光照及

9、噪音：胚胎培养试验室质量控制和管理人类辅助生殖技术应用概述第26页2、管理：A、按功效和清洁度分区B、试验室禁止吃，喝，抽烟以及使用化装品C、培养箱和温台监测D、冰箱监测E、液氮罐监测胚胎培养环境质量控制和管理人类辅助生殖技术应用概述第27页试验室禁止使用酒精等可挥发性有机物和紫外照射可用蒸馏水擦拭台面可用专用洗涤剂擦拭可能会被污染台面或者区域可使用吸尘器吸走灰尘培养箱清洁和消毒试验室清洁人类辅助生殖技术应用概述第28页1、温度和湿度：37.00.1，90%2、pH：7.1 pHi 7.2， 7.2 pHe 7.43、气体：CO2和O24、渗透压：270 290mOsm/kg胚胎培养系统人类辅

10、助生殖技术应用概述第29页培养基基本组成水：99%无机盐：维持培养基渗透压和酸碱度碳水化合物：提供胚胎发育能量氨基酸：促进胚胎体内外发育维生素：调控细胞代谢激素和生长因子：促进胚胎发育大分子物质：维持胶体渗透压，中和毒素抗氧化剂：降低氧自由基对胚胎损伤螯合剂：螯合重金属离子抗生素：预防污染胚胎培养系统人类辅助生殖技术应用概述第30页培养液配制和平衡胚胎培养系统人类辅助生殖技术应用概述第31页人类辅助生殖技术应用概述第32页单气培养：CO2(5-6%)，O2(21%) 和N2(74%)三气培养：CO2(5-6%)，O2(5%) 和N2(90%)优势：更靠近生理状态（2-8% O2）单气培养和三气

11、培养人类辅助生殖技术应用概述第33页1、精子形态结构精子和卵子精子形态精子变态示意图人类辅助生殖技术应用概述第34页2、卵子形态结构卵母细胞颗粒细胞复合体GV 期MI 期MII 期人类辅助生殖技术应用概述第35页异常卵母细胞人类辅助生殖技术应用概述第36页1、常规体外授精体外授精精卵混合精卵结合人类辅助生殖技术应用概述第37页2、卵胞质内单精子注射（ICSI）人类辅助生殖技术应用概述第38页人胚胎体外发育人类辅助生殖技术应用概述第39页异常受精单原核多原核三原核无原核人类辅助生殖技术应用概述第40页胚胎发育阶段：卵裂球数目胚胎形态学评分：胚胎碎片评分：卵裂期评分标准8-1-18-2-18-2-

12、3人类辅助生殖技术应用概述第41页1期：囊胚腔小于胚胎体积二分之一2期：囊胚腔大于胚胎体积二分之一3期：完全囊胚，囊胚腔与胚胎体积相等囊胚发育阶段1期2期3期人类辅助生殖技术应用概述第42页4期5期6期4期：扩张囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明带变薄5期：孵化囊胚，胚胎部分孵出6期：完全孵化囊胚人类辅助生殖技术应用概述第43页胚胎移植数目：35岁以下第一周期：2个35岁以上或者第二周期以上：3个单胚胎移植：胚胎移植人类辅助生殖技术应用概述第44页胚胎移植管装载胚胎移植管空气空气胚胎培养基人类辅助生殖技术应用概述第45页1、精子冷冻：2、卵子冷冻：3、胚胎冷冻：4、生殖组织冷冻：配子和胚胎冷冻及复苏人

13、类辅助生殖技术应用概述第46页程序化冷冻（慢速冷冻）玻璃化冷冻（快速冷冻）冷冻方法人类辅助生殖技术应用概述第47页Slow cooling- 0.3C/min慢速冷冻法将胚胎放入含有一定浓度冷冻保护剂处理后，慢速降温（0.23/min ）,在这个过程中，伴随细胞外温度逐步降低和细胞外冰晶形成，细胞以一个平衡方式逐步脱水。直到温度降至-150 ，至于液氮保留。人类辅助生殖技术应用概述第48页Vitrification- 50.000C/min1 sec.玻璃化冷冻法采取更高浓度冷冻保护剂处理细胞，快速降温，使细胞内外液体均到达玻璃化状态人类辅助生殖技术应用概述第49页玻璃化冷冻过程（两步平衡法）

14、在不一样浓度冷冻液中进行平衡ESVS人类辅助生殖技术应用概述第50页2.装管3. 投入液氮，在液氮罐中保留。人类辅助生殖技术应用概述第51页冷冻前置入冷冻液后0min置入冷冻液后4min置入冷冻液后8min人类辅助生殖技术应用概述第52页囊胚冷冻前人工皱缩皱缩前皱缩后人类辅助生殖技术应用概述第53页控制性超排卵B超监测下取卵体外受精和胚胎培养胚胎活检对活检细胞进行检测选择胚胎移植入宫腔植入前遗传学诊疗(PGD)人类辅助生殖技术应用概述第54页常染色体隐性遗传病-thalassaemiaCystic fibrosisSpinal muscular atrophySickle cell disease常染色体显性遗传病Huntingtons diseaseMyotonic dystrophyCharcot-Marie-Tooth disease性染色体遗传病Fragile X syndromeDMDHaemophiliaPGD适应证-单基因性疾病