阿司匹林调节小鼠移植性肝癌的基因表达2600字

1、阿司匹林调节小鼠移植性肝癌的基因表达2600 字【摘要】目的：观察阿司匹林调节小鼠H22移植性肝癌细胞 血管内皮生长因子(VEGF)和p53的表达，探讨该药抑制肿瘤的作用 机制.方法：昆明种雄性小鼠60只，按随机分组为AF6组；AE 组于前肢右腋皮下接种H22肿瘤细胞悬液皮X1010/L)0. 12mL,24h 后灌胃给药.A、C组分别给予80g/L, 40g/L, 20濯L阿司匹林 1mL, D组予20g/L5?FUlmL,E组予生理盐水1mL,每日1次，连续 用药10d,停药24h,称质量并处死动物，剥取瘤块称质量，计算出肿 瘤生长抑制率，用免疫组化法检测癌细胞中VEGF和p53蛋白的表

2、达.F组予饲料及水分正常饲养.结果：A, B, C, D组均有明显的 抑瘤作用(分别为 49. 84%, 23.89%, 29. 07%, 54. 63%),其中以 A 组和D组的抑瘤作用最明显(与B,C组比较P<；O. 05).造模各组 动物的肝癌细胞中均见VEGF和p53阳性染色，但阳性表达程度不 同，与B, C, E组比较，阿司匹林大剂量(A)组和5?FU(D)组可降 低肝癌细胞中VEGF, p53的阳性表达(P<；0.05).结论:阿司匹 林对小鼠H22移植性肝癌有抑瘤作用，抑制肿瘤生长的机制可能与 下调VEGF和p53的水平有关.【关键词】阿司匹林H22癌肝细胞 血管内皮生长

3、因子类基因p530引言不少学者认为在肿瘤发生、发 展和转移的各阶段，至少有两个或两个以上功能不同异常激活的癌 基因各自发挥不同作用，并在时间和空间上相互配合，突变的p53 基因增强了蛋白激酶C对血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor, VEGF）表达的诱导1.肝 癌是我国常见的恶性肿瘤之一，估计每年新发患者在10万以上，死 亡率高，生存期短，其发病机制尚不完全清楚.因此，研究VEGF,p53 与肝癌发生的关系具有一定的意义2.阿司匹林可调节很多基 因的表达，我们研究了阿司匹林对肝癌细胞内的VEGF, p53表达 的影响.1材料和方法L 1材料昆明种雄性

4、小鼠60只，清洁级，体质 量（202） g,购买于武汉大学实验动物中心.试验药物阿司匹林 和5?FU为医用药物，瘤株H22肝癌细胞系由武汉大学病理学教研 室提供.试剂VEGFmAb,p53mAb均购自晶美生物技术公司.1. 2方法 昆明种雄性小鼠60只，随机分为A6组；F组为正常饲养组,AE 组进行造模.无菌抽取接种H22瘤种8d的小鼠的腹水，调细胞密度 至1X 1010/L,迅速右腋皮下接种0. 12mL. 24h后A组予80g/L阿司 匹林；B组予40g/L阿司匹林；C组予20g/L阿司匹林；D组予 20g/L5?Fu； E组予生理盐水，皆为1mL, 1次/d. 10d停药，24h后称 质

5、量并处死动物，用无菌操作完全剥取瘤块称质量，计算出肿瘤生 长抑制率：抑制率二（阴性对照组平均瘤质量-治疗组平均瘤质 量）/阴性对照组平均瘤质量X100%.生理盐水冲洗瘤块后，制成 石蜡切片.未造模的10只为正常饲养组（F组），不作任何处理，予以 上5组饲以正常饲料及水分，在实验结束时取肝组织，制成石蜡切 片观察VEGF和p53表达.VEGF和p53表达按免疫组化说明书进 行，选择切片中4个染色反应最强的视野，在400倍显微镜下，每 例计数至少800个肿瘤细胞，细胞染色呈浅黄色至棕褐色均认为是 阳性染色.计算出阳性染色肿瘤细胞与所计数之肿瘤细胞的百分比, 根据百分比和着色深浅计分.无阳性细胞计为

6、0分，阳性细胞百分 比在0925%之间计为1分，在25%75%之间计为2分，75%计为3 分3.统计学处理：实验结果以x土s表示，多组间比较采用方 差分析，两组间比较采用LSD检验(SPSS10.0),P<；0.05为差异 有统计学意义.2结果2. 11122移植性肝癌的抑瘤效果及VEGF,p53 表达水平由表1可知，A,B,C,D各组瘤质量均低于E组(P<；0. 05) ； A组和D组的瘤质量低于B,C组(P<；0. 05),抑制 率均高于B,C组(P<；0.05)； B组与C组瘤质量、抑制率差异无 统计学意义(P0.05). VEGF积分和p53积分A, B, C, D组均

7、低于E组 (P<；0. 05)； A,D 组低于 B,C 组(P<；0. 05)； A 组与 D 组相比， 差异无统计学意义(P0. 05).表1各组小鼠体质量、肿瘤抑制率的 比较2. 2VEGF和p53表达VEGF仅在正常小鼠肝脏内皮细胞有表达, 而肝细胞未见阳性染色，也未发现P53阳性染色(图1A) 瘤组织 中VEGF肝癌细胞浆染成棕黄色，呈阳性染色(图1B),造模各组均可 见到，但阳性程度不同.造模各组中可见p53为细胞核阳性染色(图1C) . A：肝组织VEGF表达；B：瘤组织VEGF表达；C：瘤组 织p53表达.3讨论VEGF,p53在肿瘤发生、发展和转移的各阶段发 挥着重要

8、作用，目前的研究认为，它们之间的作用不是孤立的，可 能在时间和空间上相互配合，协同促进了细胞的癌变4 .Folkman认为，肿瘤的发生是一个多步骤的过程，而血管生 成是肿瘤发展的限速步骤，在肿瘤进展中血管生成这一表型可能是 原癌基因激活和抑癌基因失活的结果，这一点在Olga的试验中得 到了证实：p53突变使VEGF的表达量升高，p53突变在肿瘤血管生 成开关中起到了重要作用.从本实验结果看，肝癌组织VEGF,p53表 达较正常肝组织有明显差异，说明肝癌的发生与VEGF, p53有一定 关系.阿司匹林对H22移植性肝癌的抑瘤效果显示，接种H22移植 性肿瘤给药10d后,A,B,C,D各组瘤质量均低于E组；A组和E组 的瘤质量均低于B, C组，抑制率均高于B, C组；B组与C组瘤质 量、抑制率，差异无统计学意义.说明阿司匹林和5?FU均能发挥一 定抑瘤作用且阿司匹林抑瘤作用存在着量效关系，剂量越大，抑瘤 效果越明显.免疫组化结果显示VEGF和p53积分A,B,C,D