历年开题报告

1、骨髓间充质干细胞保护小鼠视神经钳夹损伤的机制研究报告人：胡宗莉导师：陈晓明教授年级专业：2007级 临床八年制开题报告2014年8月Contents国内外相关研究现状2 3 研究方案及主要内容4 课题工作计划6 可行性分析5 预期结果7 研究背景1研究目的研究背景青光眼作为全世界第二大致盲因素，RGC凋亡为其重要致盲因素，而凋亡机制中，神经营养因子传递阻断为重要机制。包括脑源性神经营养因子（BDNF）、神经营养因子-3 （NT-3）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）等。国内外相关研究现状国外近年研究：BMSC玻璃体腔内移植，可分泌一定量的神经保护蛋白，从而减少RGC凋亡。在体外培养脑细胞时

2、，GDNF可而上调脑细胞BDNF表达，从而对脑细胞发挥保护作用，且GDNF直接作用于神经元则无此保护作用。国内近年研究：视神经损伤或青光眼模型中，玻璃体腔内注入BDNF或植入BDNF基因修饰的细胞，均可显著减少RGC凋亡。脑出血模型中脑内移植GDNF基因修饰的骨髓间充质干细胞（BMSC），可增加宿主BDNF及其受体表达，具有脑细胞保护作用。提出假设：视神经钳夹损伤 RGC凋亡 玻璃体腔 内注射BMSC GDNF RGC BDNF RGC凋亡 研究目的BMSC玻璃体腔内注射对RGC的保护及其机制：1、确定BMSC是否具有RGC保护作用。2、确定GDNF是否为BMSC保护作用的关键分子。3、确定G

3、DNF通过增加宿主BDNF表达发挥保护作用。前期研究资料在下列各种组织的基因芯片中，BMSC分泌GDNF相对最高视神经损伤后，玻璃体腔内注入BMSC可较稳定上调RGC中BDNF基因表达 研究方案及主要内容一、确定BMSC表达并分泌GDNF、BDNF 研究方案及主要内容二、体外确定GDNF可刺激神经元分泌BDNF，并具有保护作用研究方案及主要内容三、确定终点指标的基线水平，作为空白对照研究方案及主要内容四、确定玻璃体腔内注射BMSC可以通过分泌GDNF，刺激宿主RGC表达BDNF，以达到RGC保护作用实验所涉及技术BMSC细胞分离纯化及培养细胞RNA干扰技术小鼠视神经钳夹模型建立玻璃体腔内微量注

4、射视网膜分离与提取，视网膜平铺片，眼球冰冻切片免疫组化ELISA 视神经钳夹模型暴露外眦部分离并钳夹视神经15s立即注射各组实验液可行性分析1 实验设计基于可靠的理论2 相对成熟的技术手段视神经钳夹模型基因转染BMSC分离纯化及培养玻璃体腔内微量注射、视网膜平铺片、视网膜切片、ELISA、免疫组化染色细胞计数3 拥有完善的实验条件本课题组所在四川大学华西医院神经疾病研究室，在硬件设施上是可行的。课题工作计划2014年10-12月2014年8-9月2014年7月数据整理及文章撰写动物实验阶段细胞及动物准备阶段实验设计2015年1-2月1.BMSC可表达并分泌GDNF、BDNF2.GDNF可促进神

5、经元表达BDNF保护其缺氧损伤3. BMSC可保护RGC，且主要通过分泌GDNF因子，而刺激RGC表达BDNF增加 预期结果参考文献1Stone EM, Fingert JH, Alward WLM, et al. Identification of a gene that causes primary open angle a.Science. 1997;275:668670.2Iwabe S, Moreno-Mendoza NA, Trigo-Tavera F, et al. Retrograde axonal transport obstruction of brain-derived

6、neurotrophic factor (BDNF) and its TrkB receptor in the retina and optic nerve of American Cocker Spaniel dogs with spontaneous a.Vet Ophthalmol.2007;10:1219.3Johnson TV, Martin KR. Cell transplantation approaches to retinal ganglion cell neuroprotection in a. Curr Opin Pharmacol. 2013;13(1):78-82.4

7、Bull ND, Irvine KA, Franklin R, Martin K. Transplanted oligoden-drocyte precursor cells reduce neurodegeneration in a model of a. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2009;50:4244 4253.5Johnson TV1, Bull ND, Hunt DP, et al. Neuroprotective effects of intravitreal mesenchymal stem cell transplantation in exper

8、imental a. Invest Ophthalmol Vis Sci 51(4): 2051-2059.6Wang S, Lu B, Tian C, Girman S, et al. Syngeneic mesenchymal stem cells rescue vision and vascular pathology in a rodent model of retinal degenerationJ. Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 2009. 50.7Bull ND, Johnson TV, Martin KR, et al . Stem cells fo

9、r neuroprotection in a. ProgBrainRes 2008;173:511-519.8Johnson TV, DeKorver NW, Levasseur VA et al. Identification of retinal ganglion cell neuroprotection conferred by platelet-derived growth factor through analysis of the mesenchymal stem cell secretome.Brain. 2014; 137(2):503-519.9Harper MM, Groz

10、danic SD, Blits B, et al. Transplantation of BDNF-secreting mesenchymal stem cells provides neuroprotection in chronically hypertensive rat eyes. Invest Ophthalmol Vis Sci 52(7): 4506-4515.10Mead B, Logan A, Berry M, et al. Intravitreally transplanted dental pulp stem cells promote neuroprotection and axon regeneration of retinal ganglion cells after optic nerve injury. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2013; 54(12):7544-7556.11Changgeng P, Liviu A, Rdiger K, et al. Pitx3 Is a Critical Mediator of GDNF-Induced BDNF Expression in Nigrostriatal