《生物技术实验一》课程教学大纲

1、生物技术实验一实验教学大纲课程代码：BIOT1007课程名称：生物技术实验（一）英文名称：Experiments for Biotechnology 实验室名称：基础生物实验教学中心（省级）生物技术实验室课程学时：108实验学时：108一、本课程实验教学目的与要求生物技术实验一是生物技术专业课程的重要实践环节。本课程实验的目的是训练学生理解生物技术的基本内涵，根据实验要求，结合课堂所学的分子生物学、基因工程和细胞工程的专业基本知识，自行设计实验内容和路线，培养学生的独立思考能力和科研素养，并激发学生用于探索创新的精神。通过实验要求学生掌握PCR技术、分子克隆技术、微生物培养的技术、细胞培养技术

2、、利用生物反应器生产生物制剂的技术以及相应检测鉴定等相关实验方法和技术。通过实验帮助学生在实践中提高实验操作技能，以及掌握相关的基本实验和生产技术，从而培养学生分析和解决问题的能力，为学生毕业后从事相关专业工作打下扎实的基础。二、主要仪器设备及现有台套数 高压灭菌锅2 恒温培养箱3恒温空气摇床2 超净工作台2生物安全柜2 烘箱 1恒温水浴锅6 酶标仪1电子天平4 架盘天平 8微量移液器 60 电动移液器 2大容量离心机（5000rpm）3 高速冷冻离心机 2超速离心机1 旋涡混匀器 10蛋白电泳系统2 DNA电泳系统 4凝胶成像仪 2 超微量分光光度计 1紫外分光光度计2 可见光分光光度计 6

3、荧光显微镜 1 倒置显微镜 1Zeiss滤过装置 1 细胞培养箱 1超纯水系统 1 液氮罐 1普通冰箱 2 超低温冰箱 2三、实验课程内容和学时分配序号实验项目名称目的、要求实验内容学时分配实验类型每组人数必开、选开1设计引物掌握引物设计的方法和原理；熟练使用Primer Premier 5.0软件。使用Primer Premier 5.0软件设计所需的引物9设计性3必开2扩增特异的DNA片段掌握cDNA文库的基本知识；掌握从cDNA文库中钓取基因的方法。利用PCR的方法从相应的cDNA文库中扩增出特异的DNA片段9综合性3必开3构建原核表达载体掌握原核载体构建的原理和方法；熟悉多种常用的原核

4、表达载体的特性。运用相应限制性内切酶双酶切指定载体和PCR产物，纯化并定量，T4连接酶连接12设计性3必开4载体转化感受态细菌（一）学习感受态菌株的基本知识；掌握感受态菌株的制备方法。DH5感受态菌株的制备BL21感受态菌株的制备9综合性3必开5载体转化感受态细菌（二）掌握转化的基本原理；掌握连接产物转化感受态菌株的方法。连接产物转化DH5感受态菌株6综合性3必开6载体转化感受态细菌（三）掌握筛选阳性克隆的方法和原理。煮菌验证，抗性筛选阳性克隆9综合性3必开7抽质粒鉴定（一）掌握抽提质粒的原理和方法。挑阳性克隆接菌，摇菌；采用质粒抽提试剂盒抽质粒9综合性3必开8抽质粒鉴定（二）掌握质粒鉴定的原

5、理和方法。了解DNA测序的基本原理和方法。酶切鉴定，运用相应限制性内切酶双酶切质粒；DNA测序验证9设计性3必开9细胞的培养掌握细胞工程的基本实验技术和原理。熟悉细胞培养技术的操作规范。细胞的复苏、传代及冻存12综合性5必开10目的基因与真核表达载体的连接及转染掌握真核表达载体的基本知识；掌握多种常用细胞转染方法的原理和操作。连接目的基因与真核表达载体，将连接好的质粒采用指定转染技术转染相应细胞12综合性5必开11转染效率的鉴定掌握多种常用报告基因的检测方法。运用荧光显微镜、western boltting方法检测基因表达情况，确定转染效率12综合性5必开12特异性组织表达谱分析研究特定基因在

6、各组织中的表达分布情况。取小鼠各组织，抽提RNA，反转录cDNA，采用RT-PCR技术鉴定各组织中相关基因的表达分布情况。36创新性6选开13GMO的检测学习检测食品中转基因成分的方法和原理。取多种待测食品，采用相应方法提取基因组，运用qPCR的方法检测GMO的含量。36创新性6选开14基因诊断学习相应分子病的基因诊断技术的原理和方法。根据给出的疾病，自主设计实验路线和方法，并对提供的正常人和病人的样本进行检测，得出定性和定量的分析报告。36创新性6选开四、考核方式1、实验报告：内容包括实验目的和要求、实验原理和方法、实验操作步骤、实验结果、计算与分析以及实验结果的分析与讨论，其中实验结果与讨

7、论最为关键，讨论内容可包括实验原理、结果分析、注意事项以及成功经验和失败教训等。实验报告要求数据具有真实性、科学性和原创性。2、考核方式（1）实验技能操作的考核和实验基本原理的理论考核。（2）对实验过程中学生的动手能力，实验态度，专业技术素质，科学态度，实验报告和实验结果进行评定，得出实验课成绩。（3）创新性实验将组织专家考核组来进行考核，学生以答辩的形式汇报实验成果，由考核组考核学生的综合素质，得出实验课成绩。五、实验教材、参考书1、教材：生物技术实验一 陆挺、成中芹、王金志、编，2010年。2、参考书：（1）分子克隆实验指南。美J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔 著 黄培堂等译，科学出版社，2002年，第三版。（2）生物化学与分子生物学实验常用数据手册。吴冠芸 潘华珍