华北理工药物分析教案第4章-1药物的含量测定方法与验证

1、 课程名称：药物分析 第 5 周，第 10 讲次摘 要授课题目（章、节）第四章 药物的含量测定方法与验证 第一节 定量分析方法的分类与特点 【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握药物的含量测定方法，滴定度与含量计算，系统适用性试验内容与要求【重 点】滴定度与含量计算。【难 点】滴定度与含量计算。内 容【本讲课程的引入】评价药物质量的重要指标有哪些？板书“含量测定”。【本讲课程的内容】第一节 定量分析方法的分类与特点一、容量分析法1.定义：也称滴定法，将已知浓度滴定液滴加至被测药物溶液中,至滴定终点,根据滴 定液的浓度,体积和滴定度,计算含量 特点： (1) 方法简便易行 (2) 方法耐用性高 (

2、3) 测定结果准确 (4) 方法专属性差3.适用范围：适用于原料药含量测定4.相关计算: 滴定度：每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量, mg 含量测定： 1)直接滴定法: 注意掌握滴定反应的原理, 药物与滴定剂在反应中的摩尔比正确计算滴定度和百分含量 2) 生成物滴定法: 药物与A作用生成B, 用滴定液滴定B 百分含量计算方法与直接滴定法相同 注意摩尔比的替换 3) 剩余量滴定法(回滴法):加入定过量滴定液A, 用滴定液B滴定剩余的A 无空白 进行空白校正 注意: 滴定度为滴定液A的滴定度 滴定液A与滴定液B浓度是相当的 滴定液A与滴定液B经浓度校正后的消耗体积(V=VF)是相当的

3、二、光谱分析法 1.定义:利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法 2.分类: 1）UV-Vis 2）Fluor 3）AA 4）IR 3.紫外-可见分光光度法：基于对紫外光区(200400nm)和可见光区(400760nm)单色 光吸收特性的分析方法 （1）原理: （2）特点： 1) 方法简便易行 2) 方法灵敏度高 3) 结果准确度较高 4) 方法专属性较差 （3）适用范围：制剂含量测定与定量检查 （4）仪器校正和检定： 1) 波长 2) 吸光度的准确度 3) 杂散光 （5）测定法： 1）对照品比较法： 溶液浓度： 原料药： 制剂： 2) 吸收系数法 溶液浓度： 原料药： 制剂： 3)

4、标准曲线法 作标准曲线，测出Ax，求Cx 求回归方程，y=aX+b，代入Ax，计算Cx 4.荧光分析法 （1）定义：物质受UV或Vis照射激发后能发射出比激发光波长长的荧光; 激发光停止照射, 荧光随之消失; 激发和发射光谱用于定性, 荧光强度用于定量 （2）特点： 1) 高灵敏度 2) 荧光自熄灭 3) 易受干扰 4) 线性范围窄：(RXRXb)/(RrRrb)=0.52 （3）消除干扰： 1) 溶剂:空白对照 2) 溶液:稀,净,充氮,pH 3) 器皿:洁净,无机清洁液 （4）测定法: 对照品比较色谱分析法 1.特点： 1) 高灵敏度:ng-g/ml 2) 高专属性:选择性检测 3) 高效

5、能与高速度 2.应用：复方制剂含量测定的首选方法 3.分类： 1）依据分离原理：吸附;分配;离子交换;分子排阻色谱法 2）依据分离方式：纸色谱;薄层色谱;柱色谱;气相色谱;高效液相色谱法 4.高效液相色谱法：HPLC （1）不得改变：固定相种类、流动相组分、检测器类型 （2）可以改变：色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组 分的比例柱温、进样量、检测器的灵敏度 （3）仪器(RP-HPLC)： 1) 色谱柱: ODS最常用; 粒径一般在3-10m; 温度40 2) 检测器: UV(DAD,PDA); Fluor, ELSD, RID, ECD, MS 3) 流动相: 首选甲醇-水

6、(末端波长检测:乙腈-水), 有机相5%; pH2-8 （4）系统适用性试验： 1) 色谱柱的理论板数(n)：用于评价色谱柱的分离效能 n=(tR/)2 = 16(tR/W)2 = 5.54(tR/Wh/2)2 2) 色谱峰的分离度(R)：用于评价组分的分离程度；关键指标 R 1.5 3) 色谱系统的重复性(RSD%)：用于评价连续进样系统响应的重复性能 RSD 2.0 4) 色谱峰的拖尾因子(T)：用于评价色谱峰的对称性 T=0.95-1.05 （5）测定法与计算： 1) 内标法： 2) 外标法：5.气相色谱法：GC （1）色谱柱：常用毛细管柱：熔融石英或玻璃；内径一般为0.25mm、0.3

7、2mm或0.53mm; 柱长560m，内壁或载体经交联或涂渍固定液; 固定液膜厚0.15.0m （2）固定液: 甲基聚硅氧烷, 苯基甲基聚硅氧烷, 聚乙二醇 （3）检测器：常用FID （4）进样方式： 1) 溶液直接进样: 不超过数微升(l); 毛细管柱分流 2) 顶空进样: 供试液于密闭小瓶中, 加热至待测组分达到液-气平衡, 进样器自动吸取一定体积的顶空气进样 （5）系统适用性试验：同HPLC（6) 测定法与计算： 1) 内标法：同HPLC 2) 外标法：同HPLC 3) 标准溶液加入法:对照品溶液适量, 精密加入到供试品溶液中, 测定含量, 扣除加入的对照品溶液含量即得 【本讲课程的小结

8、】今天我们主要讲了药物的含量测定方法，滴定度与含量计算，系统适用性试验内容与要求。希望同学们重点学习滴定度与含量计算。【本讲课程的作业】取异戊巴比妥钠0.2052克，精密称定，依法用硝酸银滴定液（0.1010 mol/L）滴定，用去该滴定液8.10ml，已知每1ml的硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于24.38mg的C11H18N2NaO3，试计算异戊巴比妥钠的百分含量取维生素B120片，精密称定，20片片重为1.5786g，研细，精密称取细粉（约相当于维生素B125mg）0.4031g，置100mL量瓶中，加盐酸溶液（91000）约70mL，振摇15分钟使溶解，加盐酸溶液（91000）稀

9、释至刻度，摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取续滤液5mL，至另一100mL量瓶中。再加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，在246nm波长处测定吸收度，为0.526，吸收系数E11cm 421，计算维生素B1片含量相当于标示量的百分含量。维生素B1片的标示量为5mg课程名称：药物分析 第 6 周，第 11 讲次摘 要授课题目（章、节）第四章 药物的含量测定方法与验证 第二节 样品分析的前处理方法 第三节 药品质量标准分析方法验证 【目的要求】通过本讲课程,学习样品分析的前处理方法和药品质量标准分析方法验证【重 点】样品分析的前处理方法和药品质量标准分析方法验证【难 点】样品分析的前处理方法内

10、容【本讲课程的引入】样品分析前都需要怎样的前处理？药品质量标准分析方法验证的项目和内容都有哪些？板书“前处理方法和方法验证”。【本讲课程的内容】 第二节、样品分析的前处理方法一、不经有机破坏的方法 1. 水解法： 适用于: 结合不牢固的含金属或含卤素有机药物 （1）酸水解法：水难溶性含金属有机药物与矿酸(盐酸)共热 （2）碱水解法：含卤素有机药物(脂肪碳链)与氢氧化钠溶液回流 有机结合的待测元素原子离解, 转化为无机盐(离子) 还原法： 适用于: 结合牢固的含碘有机药物(直接与芳环连接) 碱性溶液中加锌粉回流, 使碳-碘键还原转化为无机碘化物经有机破坏的方法 适用于: 含金属、卤素、氮、硫、磷

11、等有机药物(待测原子与碳原子结合牢固者)1.湿法破坏：适用于含氮有机药物分析的前处理 硫酸作为分解剂, 氧化剂(硝酸,高氯酸)辅助分解剂 注意：空白校正 通风橱内 （1）硝酸-高氯酸法：适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一般呈高价态 不能用于含氮杂环药物的破坏 （2）硝酸-硫酸法：适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的无机金属离子均为高价态 不能用于含碱土金属有机药物的破坏（3）硫酸-硫酸盐法：往样品中加入浓硫酸作氧化剂，加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失 常用于含砷或锑有机药物的破坏，破坏得到的无机金属离子多为低价

12、态 （4）凯氏定氮法： 1）消解剂与助剂: 硫酸-硫酸钾-硫酸铜 硫酸：消解剂; 硫酸钾：提高沸点;硫酸铜：催化剂; 硼酸：固氮(NH3H3BO3) 2）供试品: 常量法含氮2530mg; 半微量法: 1.02.0mg 3）应用范围: 含有氨基或酰氨(胺)结构 （5）其它湿法 1) 硝酸硫酸高氯酸法 2) 硫酸氧化剂法（过氧化氢法、高锰酸钾法） 破坏后，金属呈高价态干法破坏： 适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物 不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏 （1）高温炽灼法： 含卤素药物的鉴别、含磷药物含量测定 无水碳酸钠,硝酸镁,氢氧化钙,氧化锌等辅助灰

13、化 (2) 氧瓶燃烧法: 1)将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据预测物质的性质，采用适宜的方法进行分析 有机结构: 彻底分解为CO2和H2O 待测元素: 转化为不同价态的氧化物(或无氧酸),被吸收于适当的 吸收液中(多以酸根离子形式存在) 2)适合于含X、S、N、Se等元素的有机药物 3)特点：简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析 4)仪器装置: 燃烧瓶:无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶(石英玻璃) 500、1000或2000ml : 10-20mg:500ml 200mg:1000-2000ml 铂丝: 瓶塞空心，

14、底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状 1mm; 2/3 5）称样用材料： 固体样品：无灰滤纸 液体样品：纸袋 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外 层再用无灰滤纸包裹 6）氧气 7）吸收液： 作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、 硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态 燃烧产物与吸收液 氟：HF 吸收液：水 氯：HCl 吸收液：水-氢氧化钠 溴：Br2+HBr 吸收液：水-氢氧化钠-二氧化硫 碘：I2(+HIO) 吸收液：水-氢氧化钠(二氧化硫) 硫：SO3(+SO2) 吸收液：水-过氧化氢 磷：P2O5H4P2O7,(HPO3)n:

15、 吸收液：水-硝酸(煮沸) 8）注意事项： 根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶 正确选用燃烧瓶的目的：样品能在足够的氧气中燃烧分解完全； 有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中； 防止爆炸的可能性 测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶 铂丝燃烧时起催化作用 应同时做空白试验 燃烧时要注意防爆 燃烧要完全 燃烧产生的烟雾完全被吸收第三节、药品质量标准分析方法验证 一、需验证的项目： 1.鉴别试验 2.杂质检查 3.含量测定 4.防腐剂 5.溶出度,释放度验证的内容 1.准确度（ accuracy） （1）定义：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度 （2）一般用回收率(%)表示：

16、回收率%=（测定平均值空白值）/加入量100% （3）数据要求：9个测定结果 3个不同浓度(80,100,120)，每个浓度各3份 报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。 （4）化学药： 1）原料药：用已知纯度对照品或样品进行测定； 或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。 2）制剂：要考察辅料对回收率的影响。 采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验，计算RSD。 （5）中药：加样回收试验 1） 回收率% =（C-A)/B A为供试品所含被测组分的量；(已准确测定药物含量A的真实样品) B为加入对照品的量； C为实测值 2）取同一浓度供试品，6个测定结果

17、进行评价或同化学药 应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果、 回收率（%）和RSD% 3）一般要求： RSD2% UV和HPLC：回收率可达98%102%； 容量法：回收率可达99.7%100.3% 2. 精密度 （ precision ) （1）定义 ：同一均匀供试品多次取样测定所得结果之间的接近程度 （2）用标准偏差(s,SD)或相对标准偏差(RSD)表示 （3）数据要求同“准确度” （4）分类： 1）重复性：批内精密度或日内精密度 同一分析人员连续测定所得结果的精密度; 2）中间精密度：批间精密度或日间精密度 不同时间不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度 3）重

18、现性：在不同实验室不同人员测定结果之间的精密度 用法定标准采用的分析方法进行专属性( specificity ) （1）定义：在其他成分(杂质,降解产物,辅料等)可能存在下,方法能正确测定出被 测物的特性 （2）应用：鉴别,杂质检查和含量测定方法 1）鉴别反应：空白, 结构相似物或有关物质呈负反应 2）含量与杂质测定：含杂质或降解产物的试样中各峰能获得分离检测限( limit of detection, LOD ）（1）定义：试样中被测物能被检测出的最低浓度或量（2）是一种限度检验效能指标,反映方法灵敏度 (3) 方法： 1）目视法：适用于可用目视法直接评价结果的分析方法, 非仪器分析法 例：

19、鉴别的显色法;杂质检查的TLC 2）信噪比法：适用于能直观显示信号与基线噪声水平的分析方法, 如HPLC 信噪比S/N=3(2)时的相应浓度或量 3）标准偏差法：适用于不能直观比较信噪比的仪器分析方法, 如UV-Vis法 5.定量限：(limit of quantitation, LOQ ) （1）定义：指试样中被测物能被定量测定的最低量 （2）反映方法的灵敏度 （3）测定结果应具有一定准确度和精密度 （4）杂质和降解产物用定量方法研究时, 应确定LOQ （5）LOQ的测定方法与LOD相同相应的系数(倍数)不同, 如信噪比S/N=106.线性（ linearity ） （1）定义：指在设计的“

20、范围”内, 响应值(y)与被测物浓度(x)直接呈正比关系 的程度 y = ax + b （2）系列(n5)供试样品测定,以响应信号作为被测物浓度的函数作图 （3）用最小二乘法进行线性回归; 或经数学转换后再进行线性回归7.范围（ range ） （1）定义：指方法适用的高低限浓度或量的区间在试验研究开始前确定验证的范 围和方法在范围内应能达到一定精密度,准确度和线性 （2）涉及定量测定的项目均需对范围进行验证 如: 含量测定、含量均匀度、溶出度或释放度、特殊元素或特殊杂质的定量检查 原料药/制剂含量测定: 80%120% 制剂含量均匀度检查: 70%130% 溶出度或释放度检查: 下限-20%上限+20% 特殊元素含量测定: 下限-20%上限+20% 杂质测定： 限度20% 若杂质检查与含量测定同时进行, 杂质限度-20含量上限+20% 8.耐用性（ ruggedness ） （1）定义：指在测定条件有小的变动时, 测定结果不受影响的承受程度;