免疫荧光试剂盒临床应用课件

1、免疫荧光试剂盒在生殖道感染病原体检测中的临床应用深圳市迈科龙生物技术有限公司免疫荧光技术 免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是标记免疫技术的一种，是在免疫学、生物化学和显微镜技术基础上建立起来的一项技术。 经过不断改进发展，免疫荧光技术已成为微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中准确又快速的一种免疫学实验方法。1 免疫荧光原理 将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与样本中的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 基本反应原理为抗原抗体间的反应2 免疫荧光特点 特异性强、敏感性高、检测速度快（单个样本处理时间约4

2、0分钟，批量样本报告时间以半天或隔天最佳） 直接免疫荧光法（DFA） 将标记的特异荧光抗体直接加在抗原标本上，经一定温度和时间的染色，在荧光显微镜下便可观察到被检抗原与荧光抗体形成的特异性结合物所发出的荧光。直接免疫荧光示意图免疫荧光技术的应用 免疫荧光技术应用范围极其广泛，可以应用于生物学的各个领域。 尤其适用病原微生物的快速鉴定检测，具有形态学和免疫学的双重优点。 临床实验室改进组织(CLIA)指出直接免疫荧光法最适合用于日常临床和参考实验室检测。迈科龙免疫荧光法生殖道病原体检测试剂盒免疫荧光试剂盒注册证号适用范围沙眼衣原体 C.T.国食药监械（准）字2010第3401154号宫颈感染、尿

3、路感染、产前筛查、不孕不育奈瑟氏淋球菌 N.G.国食药监械（准）字2010第3401157号宫颈感染、尿路感染、产前筛查、不孕不育阴道加德纳菌 G.V.国食药监械（准）字2010第3401155号BV、复发性BV、产前筛查、不孕不育白色念珠菌 C.A.国食药监械（准）字2010第3401153号霉菌性阴道病单纯疱疹病毒II型 HSV-II国食药监械（准）字2010第3401156号生殖器疱疹阴道毛滴虫 T.V.国食药监械（准）字2010第3401158号滴虫性阴道病造成非淋菌性尿道炎的重要病原体，其感染已超过淋球菌感染而位居性传播疾病之首可致尿道炎、宫颈炎、子宫内膜炎及盆腔炎对怀孕可致早产、流

4、产、胎膜早破、胚胎停育等严重妊娠并发症产道感染可致婴儿急性结膜炎母婴传播可致新生儿眼炎或肺炎引起不孕不育沙眼衣原体1.临床意义沙眼衣原体临床检验方法临床检验方法灵敏性（%）特异性（%）优缺点胶体金法52.78差98.86方法简便、快捷，适于短时内大批量标本的测定，特异性低，灵敏度不高，易造成假阴性，阳性检出率5%，临床实际检出率多仅1-2%漏检率太高，不适用于妇产等低感染人群筛查免疫荧光法92.7297.89操作简便，检测时间短，可检出标本中存在的原体和包涵体。具有专一性好、特异性强、灵敏度高等特点，在衣原体感染早期就可被发现，对衣原体感染的早期诊断具有特殊意义。沙眼衣原体检测“金标准”沙眼衣

5、原体阳性图片治疗方案初发病例多西环素100mg，口服，2次/日，连服710天阿奇霉素1g，一次顿服，饭前1小时或饭后2小时服用红霉素500mg，口服，4次/日，连服7天琥乙红霉素800mg，口服，4次/日，连服7天氧氟沙星300mg，口服，2次/日，连服7天米诺环素100mg，口服，2次/日，连服10天3.临床检验方法临床检验方法灵敏性（%）特异性（%）优缺点快速BV试验758895敏感性高、但其他细菌、滴虫等都能对检测产生干扰，导致假阳性。代谢产物，间接指标，重复性差革兰染色47.3794.77598简便、快速；背景复杂、易漏检，需要实验者具备丰富的实践经验寻找足够数量的线索细胞不具备特异性

6、阴道加德纳菌免疫荧光法94.5397.51操作简便，检测时间短，可直接检测出主要致病菌，标本需要量少、特异性强、结果判断直观、灵敏度高等优点直接检测病原微生物，检测意义清晰阴道加德纳菌阳性图片治疗方案非孕期推荐方案甲硝唑500 mg，口服，2次/d，共7d0.75%甲硝唑膏(5g) ，阴道上药，2次/d，共5d2%克林霉素膏(5g)，阴道上药，1次/晚，共7d替代方案克林霉素300mg，口服，2次/d, 共7d克林霉素栓300g, 阴道上药，1次/晚，共3d妊娠期甲硝唑500mg，口服，2次/d，共7d甲硝唑250mg，口服，3次/d，共7d氯洁霉素300mg，口服，2次/d，共7d哺乳期选择

7、局部用药，尽量避免全身用药2.2.2 女性淋病合并症淋菌性盆腔炎: 包括淋球菌性子宫内膜炎、输卵管炎、输卵管卵巢脓肿、腹膜炎等，好发于育龄妇女。多数病人有白带增多，且为脓性或血性。双下腹痛，伴有畏寒、发热、头痛、厌食、恶心、呕吐等淋菌性前庭大腺炎：出现前庭大腺红肿、疼痛，腺体开口处有脓性分泌物，大阴唇下1/2肿胀明显，还可伴有全身症状和腹股沟淋巴结肿大。3. 临床检验方法临床检验方法灵敏性（%）特异性（%）优缺点革兰染色法男性：95%；女性：75%/操作简便，对男性急性样本准确率较高。对于慢性样本及女性样本，由于杂菌较多，背景复杂，易漏检。不适用女性患者，尤其是慢性女性患者 培养法859510

8、0受标本的采集、运输、保存以及病人的病情等因素影响较大，测定所需时间较长，不利于快速诊断与及时治疗，并且易受抗生素影响，出现假阴性。阳性检出率偏低，报告时间长免疫荧光法93.2898.17操作简便，检测时间短，不受标本的运输、保存及菌体活力影响，灵敏度高、特异性强，适用于临床各期患者。快速、准确、操作简单卫生部淋病诊断标准（WS268-2007）指出，免疫荧光法可用于奈瑟氏淋球菌培养样本鉴定。奈瑟氏淋球菌阳性图片治疗方案推荐方案头孢曲松125mg，单次肌注头孢克肟400mg，单次顿服环丙沙星500mg，单次顿服氧氟沙星400mg， 单次顿服左氧氟沙星250mg，单次顿服白色念珠菌阴道正常菌群之

9、一，在各种致病因素影响之下，念珠菌优势繁殖引起外阴阴道念珠菌病(VVC)VVC是仅次于细菌性阴道病的阴道感染性疾病，75%的育龄妇女一生至少有一次发病白色念珠菌是阴道感染念珠菌的主要病原体，占80%-90%孕期感染未治疗或治疗不彻底可能因产时阴道操作引起产道感染，导致子宫复旧不良或伤口感染等妊娠合并念珠菌性阴道病患者的胎儿多数在通过产道后感染，新生儿心、肺、脑组织等均存在念珠菌病灶1.临床意义 包括女性阴道炎及龟头包皮炎。阴道炎：阴道分泌物粘稠、色黄或奶酪样斑片，在阴道壁上可见灰白色假膜样斑片，有瘙痒或灼热感。龟头包皮炎：较少见，可见包皮及龟头潮红、干燥光滑，包皮内侧及冠状沟可见覆有假膜的斑片

10、。2.临床表现：白色念珠菌临床检验方法临床检验方法灵敏性（%）特异性（%）优缺点湿片法75检出率偏低，其检出率为30%-50%，背景复杂、易漏检革兰染色8895背景复杂、易漏检免疫荧光法94.197.23操作简便，检测时间短，灵敏度高、特异性强，不易受样本中杂菌的影响。白色念珠菌阳性图片单纯疱疹病毒II型生殖器溃疡最常见的原因之一，引起生殖器疱疹侵犯生殖器皮肤、粘膜引起红斑、水痘、糜烂及溃疡性损害生殖器感染与宫颈癌有关增高对人类免疫缺陷病毒（HIV）的易感性生殖器溃疡促进HIV异性间传播生殖器感染具有反复发作性早期诊断和治疗对促进患者皮损愈合，降低其传染性及危害性有重要意义1.临床意义原发性生

11、殖器疱疹外生殖器或肛门周围有群簇或散在的小水疱，24天后破溃形成糜烂或溃疡，自觉疼痛腹股沟淋巴结常肿大，有压痛常伴有发热、头痛、乏力等全身症状 复发性生殖器疱疹起疹前局部有烧灼感，针刺感或感觉异常外生殖器或肛门周围群簇小水疱，很快破溃形成糜烂或浅溃疡，自觉症状较轻。 2.临床表现3. 临床检验方法临床检验方法灵敏性（%）特异性（%）优缺点PCR法9410095.7检测HSV DNA，实验条件要求高，多在专科医院应用，难以普及推广免疫荧光法95.297.59操作简便，检测时间短，不受皮疹部位及其病毒量影响，灵敏度高、特异性强开展方便单纯疱疹病毒II型阳性图片治疗方案生殖器疱疹首次发作推荐方案无环

12、鸟苷400mg，3次/d，口服，710d无环鸟苷200mg，5次/d，口服， 710d泛昔洛韦250mg，3次/d，口服，710d伐昔洛韦1g，2次/d，口服，710d 如果未完全治愈, 治疗疗程可超过10 d 间歇治疗：即发作时给予抗病毒药物，推荐在出现前驱症状或皮损出现24h内开始用药，可选择的方案包括：口服阿昔洛韦200mg每日5 次，共5 天阿昔洛韦400mg 每日3 次，共5 天伐昔洛韦500mg每日2 次，共5 天伐昔洛韦300mg每日2 次，共7 天泛昔洛韦250mg每日3 次共5 天 对于初发性生殖器疱疹，剂量不变，疗程延长至10 天 长期抑制治疗：对于发作频繁的患者，可推荐长

13、期抑制疗法，可选择的方案包括：阿昔洛韦400mg，口服2次/d泛昔洛韦250mg，口服2次/d伐昔洛韦500mg， 口服1次/d伐昔洛韦1.0g，口服1次/d特殊人群的治疗：新生儿疱疹：早期静脉给子抗病毒治疗，如阿昔洛韦（每次5mg/kg）每8小时l次，症状控制后，可考虑口服治疗维持。妊娠疱疹：初发者，口服阿昔洛韦400mg每天3次，有严重并发症者应静脉滴注阿昔洛韦。频繁复发或新近感染的孕妇，可在妊娠最后4周给予连续口服阿昔洛韦。合并HIV感染者：与普通人群感染治疗策略相同，对发作次数频繁者更主张长期抑制疗法，但应关注耐药性。试剂盒选择 国家规定临床检验室必须使用有注册证的产品，并定期进行试剂

14、盒有效性检测试剂盒评价根据该试剂临床试验报告，了解其质量水平；询问试剂的组成，如原料来源等判断试剂的优劣；参考室间质评的评价结果，了解试剂的质控成绩；根据权威部门发布的评价结果，了解试剂的质量优劣。 标本的采集和保存临床医生应遵循样本采集原则，采集足够的样本量以反应其真实的样本信息。采样过程中应避免血液污染样本，以免与血清中的抗体结合而导致假阴性结果。取样后如不能及时涂片，样本需放入28冰箱保存。1 涂片 将样本轻缓涂抹在载玻片上，晾干； 避免反复涂抹拭子2 固定使用固定剂固定5到10分钟，自然晾干；常用固定剂：甲醇、丙酮或无水乙醇 操作流程3 加样用微量移液器吸取一定量试剂均匀滴加在玻片涂样处，避免产生气泡；每次加样应更换吸嘴，做到一份样本一吸头，避免发生交叉污染。4 孵育置于37水浴锅孵育，孵育时间20到30分钟。避免试剂在玻