病理技术概述

1、 闽东医院 病理科 张 驰 .12 .04病理检验技术第1页 病理技术病理技术是病理学一个主要分支，是病理学研究中方法学，是病理诊疗基础。常规病理是病理技术最主要部分，任何病理诊疗离不开它。第2页常规病理1、收标本 8、切片2、取材 9、染色3、固定 10、封固4、脱水 11、对片5、透明 12、交诊6、浸蜡 13、诊疗7、包埋 14、发汇报第3页 固 定经过添加固定剂让组织中全部细胞及细胞外成份快速死亡，以免细胞中溶酶体成份破坏作用，保持离体组织细胞与活组织时形态相同，并预防细菌繁殖所致腐败，以保留蛋白质与核酸基本结构。病理标本制作和组织切片都必须先进行固定。第4页 惯用固定液种类4%甲醛

2、95%乙醇 乙醇-甲醛 AF液 AAF液中性缓冲甲醛液第5页 脱 水 用一些溶剂逐步将组织内吸收水分置换出来，以利于透明剂和石蜡渗透，这一过程叫脱水。第6页惯用脱水剂种类酒精丙酮正丁醇叔丁醇异丙醇 酒精：为最惯用脱水剂。高浓度酒精对组织有强烈收缩和脆化缺点，所以组织在水洗后不能马上投入高浓度酒精中。应在不一样浓度酒精里逐步脱水，普通在可从70%酒精开始80%、95%、100%酒精，逐步脱水。第7页组织透明当组织全部为透明剂占有时，光线能够透过，组织可展现不一样程度透明状态，这中现象称为组织透明。 第8页目标：使石蜡能浸入组织块，便于包埋。多数脱水剂不能与石蜡相混合，必须经过透明剂作用长能浸蜡包

3、埋。透明剂种类二甲苯苯和甲苯氯仿苯甲酸甲酯香柏油冬青油松油醇第9页 特征二甲苯: 为最惯用常规透明剂，为无色透明液体，易溶于无水酒精，不溶于水，有毒，易挥发，长久接触对呼吸道粘膜有刺激作用。透明力强，易使组织收缩、变脆，所以组织块在二甲苯中时间不宜过长。小块组织以30分钟为宜,较大组织快可适当延长。第10页注意事项 透明关键是时间,透明时间不够,石蜡不能完全进入组织,影响到包埋 切片 .不过假如透明过分,组织发硬发脆影响切片质量.尤其是肝脾等组织. 透明是制片过程中很主要步骤，若干组织不能透明，其原因普通与组织脱水未尽相关。第11页浸 蜡 组织透明后，在融化石蜡内浸渍过程称浸蜡。目标 组织经过

4、透明后要浸入石蜡内,目标是去除组织中透明剂(二甲苯)而代之以石蜡,并渗透组织内部,把软组织变为有适当硬度,以利切片。 第12页 浸蜡方法普通浸蜡须经过2到3次, 当前惯用脱水机上是2-3个蜡缸。浸蜡时间约需3-4小时。浸蜡时间依据组织种类和大小及温度高低来详细制订。时间不宜过长，不然易造成组织变硬、脆，切片如豆渣样；时间不足，则不易切成完好切片。用于浸蜡石蜡溶点为56-58度。第13页组织包埋 组织块经过透明、浸蜡，用包埋剂包起来过程称包埋。 目标： 包埋后可使组织到达一定硬度和韧度，有利于切成薄片。 第14页第15页 包埋面选择普通情况下以组织块最大面为包埋面。管囊状结构组织以横断面为包埋面

5、。皮肤组织或有被覆上皮组织，包埋面应垂直于上皮面。带有病变特点组织，或对包埋面有尤其要求组织应按预先标识包埋面包埋。第16页注意事项包埋用石蜡有杂质应过滤后再使用。用酒精灯或包埋加热器，预防熔蜡凝固。夹持组织块镊子，不能加热过分，以防烫伤组织。包埋蜡温度与组织块温度应靠近，不然易引发组织块与周围蜡块脱裂。号码、组织应对应，不能遗失。第17页切片质量基本标准组织切面完整，内镜咬检、穿刺标本切面数6个切片薄3-5微米，厚薄均匀切片无刀痕、裂隙、颤痕切片平坦，无皱褶、折叠切片无污染 、无气泡、盖玻片周围无胶液外溢第18页细胞核与细胞质染色对比清楚切片无涣散，裱贴位置适当切片整齐，标签端正粘牢，号码清

6、楚第19页第20页第21页第22页第23页第24页第25页第26页HE染色HE染色法，即是苏木精-伊红染色法。石蜡切片技术里惯用染色法之一 。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内染色质与胞质内核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中成份着红色。易于被碱性或酸性染料着色性质分别称为嗜碱性和嗜酸性；若于两种染料亲和力都不强，则称中性。普通组织改变和组织产物都能够经过这一染色法显示出来。是形态学最惯用染色方法 第27页(一)脱蜡:1.从温箱中取出烤干切片,马上投入二甲苯中脱蜡515min(可在三瓶中进行),脱蜡时间长短取决于蜡是不彻底溶解。气温低可延长时间,气温高可适当缩短时间或在温箱

7、中加速脱蜡。2.移入无水酒精(100%)(二瓶)中,约2min。3.移入95%酒精中(二瓶),约2min。4.移入80%酒精中(一瓶),约2min。5.移入水中,洗去酒精,约23min。6.移入蒸馏水中,约2min。第28页(二)染色: 1.移入苏木素中,浸染215min,普通以稍深染为宜。2.移入水中,洗去苏木素，洗至清水无色。3.移入分化液(1%盐酸酒精)中,分化几秒至30秒钟, 使切片褪色至淡兰红色即可。分化作用,可使细胞浆兰色脱去,而细胞核愈加清楚,艳丽,分化不足时,胞浆带兰,胞核过染,分化过分时,胞核太淡,难以辩认,可再退回苏木素染液, 延长一定时间。第29页4.移入流水中,洗涤3060min,使组织呈鲜兰色或天兰色(兰化)。5.移入伊红液中,浸染25min,如着染迟缓 , 可在伊红液中加入冰醋酸 (100ml伊红液加12滴冰醋酸)以助染。6.移入水中,洗去伊红浮液,并用纱布擦净玻片上多出染料。第30页(三)脱水:1.去玻片上水分后多入80%酒精中脱水,约12min, 如在酒精中褪色很快时,可快速移入95%酒精或返回伊红液中复染。2.移入95%酒精中(二瓶)脱水,约24min。3.移入无水酒精(100%酒精)彻底脱水,约48min。第31页(四