艾滋病病毒hiv抗体检测解读

1、HIV抗体检测第1页HIV介绍HIV是HIV感染及艾滋病（AIDS）病原体，主要经过性接触和体液传输，HIV主要侵犯和破坏辅助性T淋巴细胞（CD4+T淋巴细胞），使机体细胞免疫功效受损，最终并发各种严重机会性感染和肿瘤。HIV可分为HIV-1和HIV-2两个型，均为单链RNA病毒。前者分布广泛，后者主要局限于非洲一些国家和地域。第2页HIV介绍人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出现。几周后出现IgM抗体并很快消失，今后IgG抗体出现并一直存在。HIV感染试验室诊疗以抗体检测为主，病毒及相关抗原检测为辅，后者要求高，仅限于一些研究试验室中进行。第3页HIV

2、介绍HIV-抗体检测分为筛查试验和确认试验两种，筛查试验为阳性血清必须深入确认，确认为阳性方可汇报HIV感染阳性。筛查试验要求是敏感性高，理论上要求到达100%（97%-99%），尽可能防止遗漏可能阳性对象，相对来说，对特异性（99%）要求不是太高，允许有少许假阳性，这些假阳性能够经过重复检测和确认试验排除。第4页HIV抗体检测适用范围适合用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS病人诊疗、汇报和处理试验室依据。第5页 HIV抗体检测试验室 应符合全国艾滋病检测工作规范（1997年版）中对检测试验室人员、建筑设施和设备等条件要

3、求。应符合试验室 生物安全通用要求（GB 19489-）对II级生物安全试验室（BSL-2）各项要求。试验室质量确保和试验室安全防护按全国艾滋病检测技术规范要求执行。第6页 HIV抗体检测目标 HIV抗体检测可用于监测、诊疗、血液筛查。以监测为目标检测是为了解不一样人群HIV感染率及其改变趋势而进行检测，检测人群包含各类高危人群和普通人群。以诊疗为目标检测是为了确定个体HIV感染情况而进行检测，包含临床检测和自愿咨询检测、术前检测、依据特殊需要进行体检等。以血液筛查为目标检测是为了预防输血传输HIV而进行检测，包含献血员筛查和原料血浆筛查。第7页HIV抗体检测关键点筛查试验阳性不能出阳性汇报。

4、严格恪守试验室标准操作程序（SOP）。严格按照试剂盒说明书操作。注意预防样品间交叉污染。第8页常规HIV抗体检测方法 HIV抗体检测分为筛查试验（包含初筛和复检）和确认试验。HIV抗体检测筛查试验筛查试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注册同意、批批检合格、在使用期内试剂。推荐使用经临床质量评定敏感性和特异性高试剂。筛查方法：惯用筛查方法是酶联免疫试验（ELISA）。当前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法）试剂，第四代ELISA HIV抗原抗体联合测定试剂已在有些国家和地域用于血源筛查，同时检测抗原抗体，可将检出时间提前49.1d，有利于降低血源筛查残余危险度。 第9页其它简便快速HIV检测方

5、法 明胶颗粒凝集试验（PA）：PA是HIV血清抗体检测一个简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（普通为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，依据明胶颗粒在孔中凝集情况判读结果。HIV-1和HIV-2抗原共同致敏PA试剂（AFD HIV-1/2 PA），已经我国食品药品监督管理局（SFDA）注册同意。斑点EIA或称斑点ELISA（dot-EIA）：以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内，使用抗原

6、量少。第10页其它简便快速HIV检测方法斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：与斑点EIA相同，也是以硝酸纤维膜为载体。区分在于不用酶标识抗体，而代之以红色胶体金（或胶体硒）A蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定，可室温长久保留。试验时不需任何设备，快速、简便、特异性很好，敏感性约相当于中度敏感ELISA，适合用于应急检测、门诊急诊个体检测。当前已经有在国内被SFDA同意注册国外进口试剂和国内产品。普通可在1030min内判读结果。第11页其它简便快速HIV检测方法艾滋病唾液检测卡：在硝酸纤维膜上包被人工合成HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同时检测含在唾液中HIV-1/HIV-2抗体，原理为

7、酶免疫间接法。主要检测唾液中HIV IgA与IgG抗体，敏感性特异性与ELISA相近，可防止静脉穿刺。第12页几个常规HIV抗体检测方法比较第三代ELISA第四代ELISAPA胶体硒WB 检测是总抗体，第四代ELISA可同时检测P24抗原主要包含IgM、 IgG抗体IgG抗体P24抗原消失、抗体产生时敏感性高感染早期P24抗原出现时敏感性高操作方便易行，敏感性特异性均可敏感性低于第三代、第四代ELISA和PAIgG抗体出现时特异性高第13页几个常规HIV抗体检测方法比较在感染早期，IgM抗体出现时第三代、第四代ELISA、PA、胶体硒方法优于WB，而在方法学上，硒标敏感性要低于第三代、第四代E

8、LISA和PA。所以，当两种筛查试验均阳性或一阴一阳而WB阴性时，不能轻易汇报阴性，要同WB不确定反应一样，最少随访6个月，以防漏检。提议将WB和胶体硒法检测“窗口期”最少定为6个月。第14页 样 品初筛检测 筛查试剂 阳性反应 阴性反应 重复检测 原有试剂加另外一个筛查试剂 一阴一阳 均阴性反应均阳性反应送确认试验室确认 汇报阴性 HIV抗体筛查检测流程 第15页 HIV抗体初筛试验 试验准备：将试剂和样品放置在室温(20)平衡, 按试验室SOP做好试剂准备。试验操作 ：按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。试验结果 ：NC、PC符合试剂盒试验成立条件，Cut off值 = 阴性

9、对照均值 + C，小于Cut off为阴性，大于或等于Cut off为阳性。汇报：对呈阴性反应样品，可由实施检测试验室出具HIV抗体阴性汇报；对呈阳性反应样品，须进行复检，不能出阳性汇报。第16页HIV抗体复检试验 对初筛呈阳性反应样品用原有试剂和另外一个不一样原理或不一样厂家筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则汇报HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认试验室进行确认 （蛋白印迹试验）。对HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”汇报；对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性汇报，可出具“HIV抗体待复查”汇报。初筛试验呈阳性反应样品转送时需填写“HIV抗

10、体复测送检单” 。 对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。 第17页HIV抗体确认试验结果汇报HIV抗体阴性：无HIV抗体特异带出现。排除因“窗口期”而出现假阴性结果，提议高危行为后3个月时再做抗体检测。也可进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测，作为辅助诊疗。HIV抗体不确定（）： 出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性，在备注中应注明“3个月后复检”。随访复检：每3个月随访复检1次，连续2次，共6个月。假如检测时暴露时间已超出3个月，则在3个月后随访1次即可。必要时可做HIV-1 P24抗原或HIV核酸测定，但检测结果只能作为辅助诊疗依据，确认汇报要依据血清学随访结果。第18页HIV

11、阳性结果判定HIV-1抗体阳性（+）：最少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现,或最少1条env带和p24带同时出现。HIV-2抗体血清学阳性（+）：同时符合试剂盒提供阳性判定标准和WHO阳性判定标准，即出现最少2条env带(gp36和gp140/gp105)。第19页WB确认试验中HIV抗体特异带HIV-1抗体特异带：env带:gp160/gp120、 gp41；gag带:p55、p24、p17(或p18)；pol带:p66(或p65)、p51、p31。HIV-2抗体特异带：env带:gp140/gp105、gp36（也可为gp125/gp80、gp36）；gag带:p56

12、、p26、p16；pol带:p68、p53、p34。第20页HIV抗体检测替换策略 第21页 送检样品 用两种不一样原理或不一样厂家试剂复测（其中包含进口第三代ELISA试剂 进口第三代ELISA试剂复测S/CO比值6.0 进口第三代ELISA试剂复测S/CO比值1.05.9 确认试验 判定阳性，上报疫情 两种均阳性 两种均阴性 一阴一阳 阳性反应 阴性反应 选取筛查试剂 阳性 阴性不确定，随访 判定阴性替换策略（HIV感染疫情汇报检测策略）检测流程 第22页替换策略（高危人群VCT检测策略）检测流程第23页替换策略（普通人群VCT策略）检测及结果汇报流程图第24页HIV抗体检测情况季报流程

13、艾滋病筛查中心试验室艾滋病确认中心试验室省卫生行政部门同级卫生行政部门未设置艾滋病筛查中心试验室地域艾滋病筛查试验室和艾滋病检测点 每季首月5日前汇报上季检测情况 每季首月10日前汇报上季检测情况 每季首月5日前汇报上季检测情况 艾滋病确认试验室每季首月15日前汇报上季检测情况每季首月10日前汇报上季检测情况 中国CDC性艾中心艾滋病参比试验室 第25页HIV核酸定性检测 要求了核酸检测、核酸序列测定试验室条件、检测方法及结果判定标准 结果汇报 ： HIV核酸检测阴性:只可汇报此次试验结果阴性。 HIV核酸检测阳性:可作为诊疗HIV感染辅助指标，不单独用于HIV感染诊疗。严格试验室管理制度（分

14、区、仪器和材料专用、单向流向、废弃物处理） 第26页HIV RNA定量测定（病毒载量测定） 试验室条件 试验室功效分区 （试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区 ） 人员 (含有艾滋病试验室上岗资格并接收省级以上艾滋病试验室安全及试验操作技术培训) 设施和设备 （区域性专用 ）方法 惯用HIV RNA定量测定方法有逆转录PCR试验（RT-PCR）、核酸序列扩增试验（NASBA）、分支DNA杂交试验（bDNA）。 第27页不一样病毒载量检测方法比较第28页HIV核酸定量检测意义辅助诊疗：当RNA测定出现较高拷贝数阳性结果时（3，000c/ml），感染发生可能性非常大。应综合其它检测数据和样品背景情况进行综合判断。 早期诊疗 ：HIV感染孕妇所生婴儿 、残余危险度 病程监控 ：确定疾病发展阶段，以确定对应治疗方案。 指导治疗方案及疗效判定 ：通常在治疗前后病毒水平降低0.5 log以上才被认为临床有效。 预测疾病进程 第29页适用范围：HIV-1抗体不确定或窗口期辅助诊疗； HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期辅助判别诊疗；第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV-1抗体确认阴性者辅助诊疗；监测病程进展和抗病毒治疗