正交实验法优选鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的提取工艺

1、正交实验法优选鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的提取工艺【摘要】目的研究鱼腥草中胰蛋白酶抑制剂活性成分的最正确提取条件。方法以提取液对胰蛋白酶的抑制率为指标，采用正交试验法对提取温度(A)、溶剂用量(B)、pH值()、提取时间(D)4个因素进展优选研究，并以优选出的提取方案进展验证实验。结果因素B对提取效果有极显著的影响，因素A、均有显著的影响，因素D影响不显著。结论鱼腥草中胰蛋白酶抑制活性成分有效部位的最正确提取工艺为A1B23D2。【关键词】鱼腥草胰蛋白酶抑制剂正交实验Abstrat:bjetiveTptiizetheextratinpredurefrtrypsininhibitrfrHuttuyni

2、ardataThunb.ethdsTheinhibitinrateftrypsinativityasusedassreeningparaeter,eeplyedtherthgnaldesignethdttesttheeffetsffurfatrs,inludingteperaturefextratinslutin(A),vluefextratinslutin(B),pHvaluefextratinslutin()andtiefextratin(D),ntheextratinftrypsininhibitr.ResultsFatrBperfredthestsignifianteffetnthee

3、xtratin,andfatrsAandaethenextandfatrDthelast.nlusinTheptiuextratintehnlgyisA1B23D2hentheinhibitinratiftrypsinativityisnsideredaspreferentialparaeter.Keyrds:HuttuyniardataThunb.;Trypsininhibitr;rthgnaldesign蛋白酶抑制剂prtEinaseinhibitr,PI是一类可以抑制蛋白水解酶活性的物质，广泛存在于动植物和微生物中1。其中胰蛋白酶抑制剂Trypsininhibitr,TI具有重要的药用价

4、值,对急性胰腺炎、肺气肿、抗休克、防治脑水肿和脑缺血等都有很好的临床治疗效果，还有研究说明对HIV和肿瘤的治疗也有重要意义2。因此，从传统中药中挑选具有TI活性的材料有很广阔的应用前景和市场价值。鱼腥草为三白草科植物蕺菜HuttuyniardataThunb.的地上局部，具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋之成效，是临床应用极其广泛的中药之一3。本实验根据前期挑选的结果，利用鱼腥草为材料对从鱼腥草中提取TI的工艺进展优化，找出最正确的提取条件，为今后的工业化消费TI提供根底性数据。1仪器与试剂1.1试剂胰蛋白酶(北京麒麟宏伟公司)、大豆蛋白酶抑制剂国药集团化学试剂、苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺BA

5、PNA上海三杰生物技术、三-羟甲基-氨基甲烷、无水氯化钙、盐酸、三氯乙酸、氢氧化钠等为国产分析纯；鱼腥草。1.2仪器可见光分光光度计(7202B)、离心机LD-4、精细pH计、水浴锅、精细电子天平FA2022N。2方法2.1鱼腥草中胰蛋白酶抑制活性成分提取的正交实验设计根据文献46及预实验结果，本实验采用双蒸水作为提取TI的溶剂。称取枯燥的鱼腥草全草5g，粉碎，在平行操作条件下，选用L9(34)正交实验表进展提取实验，以胰蛋白酶活性大小为指标，进展9次实验，每次实验重复3次正交因素程度见表1，然后过滤并搜集滤液，减压浓缩到100l。表1因素程度略2.2鱼腥草中胰蛋白酶抑制活性成分对胰蛋白酶的抑

6、制率测定方法采用苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺BAPNA法7：取胰蛋白酶液1l，加药材提取液1l在37水浴保温5in，参加BAPNA溶液5l，37水浴保温10in后，立即加1l三氯乙酸30%终止反响，用分光光度法在410n条件下测定吸光度。按以下公式计算样品提取液的抑制百分率：i=(Ar-Abr)-(As-Abs)(Ar-Abr)100%式中：i抑制百分率；Ar标准溶液的吸光度；Abr含标准溶液的空白对照液的吸光度；As样品溶液的吸光度；Abs含样品溶液的空白对照液的吸光度。3结果与方差分析结果见表2，表3。由方差分析可知，各因素对提取效果的影响程度依次为BAD，其中因素B为高度显著，因素A，影

7、响显著，因素D没有统计学意义，对试验结果的影响很校由R值可知,各因素对试验结果的重要次序为BAD。考虑到规模化消费中经济、效率等因素,本文优选工艺A1B23D2,即在60，用30倍量水,pH值为9，3h/次为最正确提取工艺。按照此工艺条件进展3次平行实验，测定提取液对胰蛋白酶的抑制率，结果平均抑制率为58.27%，说明本实验确定的工艺道路稳定可靠。表2L9(34)正交实验结果略表3正交实验的方差分析略4讨论因素A对实验结果有显著的影响，60时提取活性最高，随着温度的上升抑制率有下降的趋势，说明随着温度的上升对TI有失活的作用。因素B对实验有高度显著的影响，在所有因素中影响最显著，说明随着溶剂量

8、的增加会进步TI的提取效率，但从变化趋势看当30倍量时继续增加溶剂量，TI的提取率增幅不是很明显，因此考虑消费本钱和效益用30倍量是最好的。因素对实验结果也有显著影响，随着pH值的增加，提取活性成分的提取率增加，这说明在碱性条件下提取效率升高。本实验通过正交实验法对提取工艺条件进展了优化,并按最正确工艺进展了验证试验,结果证明用该工艺作为鱼腥草中TI的有效部位的粗提取，具有工艺简单、提取率高、操作控制容易、稳定性好的特点。【参考文献】1PandyaJ,SithDA,YardA,etal.pleteainaidsequenesftinhibitrsfrbukheatseedJ.Phytheistry,1997,43:327.2文方德，傅家瑞.植物种子的蛋白酶抑制剂及其生理功能J.植物生理学通讯，1997，331：1.3刘喜纲，刘翠哲.鱼腥草的药理作用研究进展J.中华中西医学杂志，2022，92：13.4屈红丽，可钰，尹鹏，等.冬凌草中总黄酮提取工艺研究与含量测定J.时珍国医国药，2022，1710：1929.5游见明.大孔树脂别离鱼腥草总黄酮的研究J.现代食品科技，2022，212：66.6刘永刚，陈玉娟，刘倩，等.中乌头次碱制备工艺的研究J.时珍国医国药，2022，