大黄蒽醌致泻作用及其机理的初步研究

1、大黄蒽醌致泻作用及其机理的初步研究【摘要】目的比拟大黄结合蒽醌、游离蒽醌致泻作用的强度并讨论其相关机制。方法通过灌服高浓度的奶粉溶液以营造高营养性环境，在此根底上考察了大黄结合蒽醌及游离蒽醌对小鼠的致泻作用；并运用析因设计分析了奶粉在这些致泻作用中的作用，同时还考察了大黄结合蒽醌及其游离蒽醌体外对胃蛋白酶活性的影响。结果大黄游离蒽醌500，1000g/kg均可使小鼠胃内容物和小肠内容物显著增加；大黄结合蒽醌500，1000g/kg也可显著增加小鼠小肠内容的重量，但对小鼠胃内容重量的影响作用较弱；各药物组均可显著增加小鼠各肠段内的蛋白质浓度。析因设计的实验结果显示，无论是大黄游离蒽醌或是结合蒽醌

2、均可显著增加正常小鼠未加用奶粉的胃、小肠及全胃肠道的内容物及蛋白质的含量，并可显著降低小鼠小肠、结肠l-浓度和升高小鼠结肠K+浓度；奶粉本身也具有与大黄蒽醌类似的作用，与之合用可增强大黄蒽醌的作用。体外实验结果显示，无论是大黄游离蒽醌或是结合型蒽醌对胃蛋白酶的活性均无明显影响。结论大黄游离蒽醌和结合蒽醌均具有显著的致泻作用；其机理可能是通过刺激胃肠道分泌、增加胃肠道内蛋白质浓度而产生容积性导泻。【关键词】大黄结合蒽醌大黄游离蒽醌胃小肠结肠TheInduingDiarrheaEffetsanditsehanissfAnthraquinnfrRheupalatuL.1.SihuanInstitut

3、efhineseateriaedia,hengdu610041，hina；2.YunnanDalillege,Yunnan671000，hinaAbstrat：bjetiveTparetheeffiienyandehanissfdiarrheainduedbyanthraquinnandglysidesfanthraquinnefrRheuPalatuL.inie.ethdsThelapatieffetsfanthraquinnandglysidesfanthraquinnefrRheuPalatuL.erestudiedintheiehiheregivenhighnentratinfpder

4、edilkslutintinduedsupernutritin,andtheeffetsfthesedrugsntheativityfpepsinereeasuredinvitr.Theeffetfilknthelapatiatinfanthraquinnandglysidesfanthraquinneereanalyzedusingthefatrialdesign.ResultsTheanthraquinnefRheupalatuL.500，1000g/kgsignifiantlyinreasedtherenantinthegastriandsallintestineinie,andtheg

5、lysidesfanthraquinnefrRheuPalatuL.500，1000g/kgalssignifiantlyinreasedrenantinsallintestineinie.Allthesedrugsuldinreasethenentratinfprteininthegutinie.TheresultsfthefatrialdesignshedthattheanthraquinnerglysidesfanthraquinnefRheupalatuL.ereabletrearkablyinreasetherenantandprteinnentratininstah,sallint

6、estineandallfgastrintestinaltrat,reduethenentratinfl-insallintestineandln,inreasethenentratinfK+inlninnralie.ilkhadthesiilareffetanduldenhanetheatinfanthraquinnefRheupalatuL.Invitr,anthraquinnerglysidesfanthraquinnefrRheupalatuL.hadnatinntheativityfpepsin.nlusinTheseresultsindiatedthatantharquinnerg

7、lysidesfanthraquinnefrRheupalatuL.aninduediarrheainie.Theseatinsayduetthatanthraquinneaninreasetheseretinfprteiningut.Keyrds：AnthraquinnefrRheuPalatuL.(ARP);GlysidesfanthraquinnefrRheuPalatuL.(GARP);Stah;Sallintestine;ln大黄为蓼科植物掌叶大黄RheupalatuL.药用大黄RheuffinaleBaill.和唐古特大黄Rheutanggutiuaxi.exBalf.的根和根茎。

8、味苦，性寒。归脾、胃、大肠、肝、胆经。具泻下攻积、调中化食、平肝降气、利胆退黄、清热解毒、泻火凉血、止血活血、利水消肿等成效。现代广泛应用于消化系统疾并急慢性肾功能衰竭、出血性疾并急性感染、急性中毒抢救以及糖尿病肾病的防治等1，显示大黄在临床中的用处广泛。以往认为大黄的致泻成分主要是其结合型蒽醌，其作用部位主要在大肠，认为其作用机理与结合型蒽醌刺激大肠黏膜下及肠壁肌层内的神经丛显著促进横结肠和降结肠蠕动有关2。我们在前期的研究中发现大黄游离蒽醌在体外对豚鼠结肠的作用明显强于结合型蒽醌，同时也有文献报道认为大黄及其有效成分蒽醌类物质可显著抑制胰蛋白酶和胰脂肪酶等3，那么大黄的泻下作用是否与其抑制

9、肠道内的蛋白酶及脂肪酶活性，减少脂肪及蛋白质的吸收，在肠道中产生高渗性环境有关？而起主要作用的是结合型蒽醌还是游离型蒽醌？为讨论这些问题，我们通过灌服高浓度的奶粉溶液以营造高营养性环境，在此根底上讨论了大黄结合蒽醌及游离蒽醌的致泻作用及其机理。1材料和方法1.1药物大黄结合蒽醌GlysidesfAnthraquinnefrRheupalatuL.，以下简称GARP：大黄经水煮提取后再用大孔树脂进展别离纯化，其大黄蒽醌主要为结合型，其纯度为36.5%；大黄游离蒽醌AnthraquinnefrRheupalatuL.，以下简称ARP,其游离蒽醌含量为85.6%药,以上实验用药均由四川省中药研究所药

10、化室易进海博士提供。临用前用蒸馏水或40%奶粉溶液配制成所需浓度的混悬液备用。通便灵胶囊，0.25g/粒，通化白山制药五厂消费，批号20020601-0249，临用前用蒸馏水配成所需浓度备用。伊利全脂甜奶粉，内蒙古伊利实业集团股份，批号8712880。临用前用蒸馏水配成所需浓度备用。1.2试剂总蛋白TP检测试剂盒，批号0106091；甘油三酯TG检测试剂盒，批号0106061，均由四川省迈克科技股份提供。H-988A标准液，批号20220227；H-988B标准液，批号20221129，均由深圳市航创医疗设备提供。Pepsin,1：3000，Siga产品。1.3动物SPF级昆明种小鼠，雌雄各半

11、，消费合格证号为SXK川2022-19，四川省中药研究所实验动物中心提供。1.4仪器比色计，UV-730半自动生化分析仪，日本岛津产；电解质分析仪H9883，深圳市航创医疗设备产。1.5方法1.5.1结合蒽醌和游离蒽醌对小鼠致泻作用根据文献3略有改动，取2022g小鼠68只，雌雄各半，禁食不禁水24h后，将动物随机分为6组，即奶粉组、奶粉+结合蒽醌500g/kg、奶粉+结合蒽醌1000g/kg，奶粉+游离蒽醌500g/kg、奶粉+游离蒽醌1000g/kg及奶粉+阳性药物组，实验当天分别灌服药物或等容量40%奶粉液1.0l/只，药后50in处死小鼠，取胃、小肠和结肠称取全重，再分别用2l生理盐水

12、洗净胃、小肠和结肠的内容物，用滤纸吸去水分后称重各器官净重，各器官的全重减各器官的净重即为内容物重。搜集洗出的内容物，离心，取上清液分别测定其总蛋白及小肠内容物中的TG含量。1.5.2析因设计讨论奶粉对大黄结合蒽醌及游离蒽醌致泻作用的影响取2025g小鼠60只，雌雄各半，禁食不禁水24h后，将动物随机分为6组，即正常对照组(蒸馏水)、奶粉组、结合蒽醌1000g/kg、游离蒽醌1000g/kg，奶粉+结合蒽醌1000g/kg及奶粉+游离蒽醌1000g/kg、实验当天分别灌服药物或等容量40%奶粉液或等容量蒸馏水1.0l/只，药后30in处死小鼠，取出胃、小肠和结肠称取全重，再分别用2l生理盐水洗

13、净胃、小肠和结肠的内容物，用滤纸吸去水分后称重各器官净重，全重减净重即为内容物重。搜集洗出的内容物，离心，取上清夜分别测定总蛋白，测定小肠内容物中和结肠内容物中的K+,Na+，l-含量及小肠内容物中TG含量。1.5.3结合蒽醌和游离蒽醌体外对胃蛋白酶的影响采用ett法4制备蛋白管，即将内径12粗细均匀的毛细管截成5长，用鸡蛋1枚，取出蛋清，充分摇匀后用纱布过滤，将上述毛细管利用虹吸作用灌满蛋清内无气泡，然后放在85热水中使蛋白凝固，待冷却后，取出毛细管用蜡将蛋白管两端封闭，储冰箱中备用。实验时取2%胃蛋白酶0.1l/L盐酸溶液5l，放入一次性试管中，各药物组分别参加各受试药液100l二甲基亚砜

14、配制，正常组参加二甲基亚砜100l，摇匀后，放进上述蛋白毛细管两根先折去固封的蜡端，密封，37孵育24h，测定毛细管两端透明局部的长度,将两端的长度相加即为被消化的蛋白量。1.6统计分析计量资料采用s表示，采用方差分析和t检验。分析协同作用时采用方差分析。2结果2.1大黄结合蒽醌和游离蒽醌对小鼠致泻作用从表1可见，大黄游离蒽醌500，1000g/kg及通便灵1000g/kg均可使小鼠胃内容物和小肠内容物显著增加，与奶粉对照组比拟有统计学差异P0.05或P0.01；大黄结合蒽醌500，1000g/kg可显著增加小鼠小肠内容的重量，与对照组比拟有统计学差异P0.05；但对小鼠胃内容重量的影响作用较

15、弱，与对照组比拟无统计学差异。2.2大黄结合蒽醌和游离蒽醌对小鼠胃、小肠及结肠内容物总蛋白含量的影响从表2可见，大黄游离蒽醌、结合蒽醌及通便灵均可使小鼠胃、小肠及结肠中的蛋白质含量显著增加，与奶粉对照组比拟有统计学差异P0.05或P0.01；且大黄游离蒽醌的作用显著强于大黄结合蒽醌。表1大黄结合蒽醌和游离蒽醌对小鼠各段胃肠道内容物重的影响略表2大黄结合蒽醌和游离蒽醌对小鼠胃、小肠及结肠内容物总蛋白含量的影响略2.3灌服奶粉对大黄结合蒽醌和游离蒽醌增加小鼠各段胃肠道内容物重量的影响从表3可见，奶粉组、大黄结合蒽醌1000g/kg及大黄游离蒽醌1000g/kg均可显著增加小鼠胃内容物、小肠内容物及

16、所有胃肠道的内容物重量，与对照组比拟有统计学差异P0.01；大黄游离蒽醌1000g/kg还可显著增加小鼠结肠内容物重量，与对照组比拟有统计学差异P0.01；大黄结合蒽醌1000g/kg或大黄游离蒽醌1000g/kg与奶粉合用均可显著增加小鼠小肠内容物、结肠内容物重量及所有胃肠道的内容物重量P0.01，与奶粉组比拟有统计学差异P0.05或P0.01。表3灌服奶粉对大黄结合蒽醌和游离蒽醌增加小鼠各段胃肠道内容物重量的影响略2.4灌服奶粉对大黄结合蒽醌和游离蒽醌增加小鼠各段胃肠道蛋白质浓度的影响从表4可见，奶粉组、大黄结合蒽醌1000g/kg及大黄游离蒽醌1000g/kg均可显著增加小鼠胃、小肠、结

17、肠及全胃肠道内蛋白质程度，与对照组比拟有统计学差异P0.01；大黄结合蒽醌1000g/kg或大黄游离蒽醌1000g/kg与奶粉合用均可显著增加小鼠胃、小肠及结肠及全胃肠道内蛋白质程度，与奶粉组比拟有统计学差异P0.01。表4灌服奶粉对大黄结合蒽醌和游离蒽醌增加小鼠各段胃肠道蛋白质浓度的影响略2.5灌服奶粉对大黄结合蒽醌和游离蒽醌调控小鼠小肠TG及K+，Na+，l-浓度的影响从表5可见，奶粉组、大黄结合蒽醌1000g/kg及大黄游离蒽醌1000g/kg均可显著降低小鼠小肠内氯离子程度，与对照组比拟有统计学差异P0.01；大黄结合蒽醌1000g/kg或大黄游离蒽醌1000g/kg与奶粉合用均可显著

18、降低小鼠小肠内氯离子程度，与奶粉组比拟有统计学差异P0.01。但各药物或奶粉均对小鼠小肠内的钾离子程度无明显影响。表5灌服奶粉对大黄结合蒽醌和游离蒽醌调控小鼠小肠TG及K+，Na+，l-浓度的影响略2.6灌服奶粉对结合蒽醌和游离蒽醌调控小鼠结肠K+，Na+，l-含量的影响从表6可见，奶粉组、大黄结合蒽醌1000g/kg及大黄游离蒽醌1000g/kg均可显著降低小鼠结肠内氯离子程度，增加小鼠结肠内钾离子程度，与对照组比拟有统计学差异P0.01；大黄结合蒽醌1000g/kg与奶粉合用可进一步降低小鼠结肠内氯离子程度，增加小鼠结肠内钾离子程度，与奶粉组比拟有统计学差异P0.01。表6灌服奶粉对结合蒽

19、醌和游离蒽醌调控小鼠结肠K+，Na+、I-含量的影响略2.7大黄结合蒽醌和游离蒽醌对胃蛋白酶活性的影响从表7可见，大黄结合蒽醌和游离蒽醌体外对胃蛋白酶均无明显影响。表7大黄结合蒽醌和游离蒽醌对胃蛋白酶活性的影响略3讨论大黄含有约1.01%5.19%蒽醌衍生物,其中以结合型为主,主要有番泻苷(sennside)A，B，D，E，F等，也含有少许游离蒽醌，如大黄酸、大黄素及大黄酚等1。以往认为大黄的致泻成分为番泻苷，其次为芦荟大黄素和大黄酸。大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的致泻作用很弱。番泻苷须经肠道细菌代谢为大黄酸蒽酮后才发挥泻下作用，主要是其结合型蒽醌，其作用部位主要在大肠，认为其作用机理是：大黄口

20、服后，通过小肠时结合型的蒽醌大局部未经吸收直接抵达大肠，在大肠经细菌酶作用切去糖的局部生成苷元，在酶的作用下，复原成活性成分大黄酸蒽酮或大黄酸蒽酮-8-葡萄糖苷，刺激大肠黏膜下及肠壁肌层内的神经丛，显著促进横结肠和降结肠蠕动，给予氯霉素后，大黄酸蒽酮的生成被抑制，泻下作用减弱5，6。但是，本研究发现，无论是大黄结合蒽醌或是大黄游离蒽醌既可增加小鼠胃内容物、又可显著增加其小肠和结肠的内容物，显然大黄结合蒽醌或大黄游离蒽醌的作用点主要在小肠和胃，其次为结肠，可见大黄蒽醌并不需要在大肠中进展转化就可以直接起作用。在研究中还发现，伴随胃、肠腔内容物的增加是其蛋白质显著增加和电解质发生显著改变，可见其胃肠内容物增加主要是由于肠道内蛋