奶牛布鲁氏杆菌病的血清学检查

1、畜业技术疫病防治奶牛布鲁氏杆菌病的血清学检查张金峰邵云龙王晓磴(黑龙江省龙江县畜牧水产局161100)琥红抗原、标准阳性血淸、阴性血淸（黑龙江省生物-厂购买）、干净玻腐板1块、移液器、移液头、受检血清.牙签。2.2操作在玻鸦板上滴加0.03ml琥红抗原、抗原旁边滴滴等於待检血淸，并设阴阳性血淸对照，充分混合血淸和抗原，在室温20七条件下观察结果。如果环境温度低.可用酒带灯加热。2.3结果別定在阴阳性血淸对照成立条件下，在4分钟内受检血淸与抗原出现肉眼可见的凝集现線判为阳性，否则判为阴性）3试管凝集试验3材料准备抗原由黑龙江省生物制-厂购买，使用前应摇匀，使用前按1：20倍晞释即hnl抗原加19

2、ml稀释液,过期或出现结块的抗原不能使用。阳性血淸.阴性血淸由黑龙江省生物-厂购买。稀释液为0.5%石碳酸生理盐水，配制方法即0.5g石碳酸加生理盐水至100ml,调pH值7274.121七高压灭菌20分钟受检血淸可快速离心制取，2000转/分，离心10分钟即可收集血淸，也可将装全血试管倾斜45。角放置环境温度在20七左右23小时即可出血淸：此外需玻璃试管.移液枪.移液头、试管架等。3.2操作方法毎份受检血淸准备4个玻璃试管.分别按1：50、1：100、1：200、1：400四个稀释度桶释。即第1管加1.2ml稀释液，第24管各加入0.5ml桶释液,然后用移液器吸取0.05ml血淸加入到第1个

3、试管中，反复吹打3次吸dl0.25ml弃之.再吸0.5ml混合液加入到第2个试管中，反复吹打3次.吸取第2试管混合液0.5ml放人第3试管中，直至借比稀释第4试管，反复吹打3次后从第4试管弃去混合液05ml这样14试管血清的稀释度分别为1：25、1：50、1：100、1：200,14试管毎管分别加人1：20倍稀释的抗原0.5ml,嫌动揺匀，这样受检血清最终幡释度为1：50、1：100.1:200、1：400o将混合液连同阴阳性对照浊管对照和抗原对照吉37七温箱中培养48h.见表1。毎次试验都应设阴性血淸对照.阳性血淸对照和抗原对照：阴性血淸对照方法步驟与受检血淸试验方法相同。阳性血淸对照应稀释

4、到原冇的滴度，加抗原方法与受检血淸相同。抗原对照，1：20倍稀释的抗原加0.5ml碳酸生理盐水，看是否冇自凝现象：3.3比浊管配制每次试验都应配制比浊管作为判定凝集反应程度的依据.按表2配制3.4结果判定参照比浊管液的淸亮程度来判断受检血清各管的清亮程度并以+、试管号12340.瓏饌战牛艸盐水1.200.50.50.5被检血淸0.050.50.50.5第次血淸饰鏗度1：251：501：1001X2001：20倍怖禅抗腹0.50.50.50.5被检血淸址终怖祥度1：501：1001：2001:400条2配制比浊管作为判定凝集反应的程度nV1：20的抗原硕酿牛理盎水(nl)淋:瞰（*）标记10.0

5、1.010020.250.7575+30.500.5050i0750.25255LO0.00-表1试管凝集反应操作表每医师，黑龙江龙江甚人，冬科丈化，1997年参加工作，从亭畜枚每医生产技术推广工作奶牛布鲁氏杆茵病是由布鲁氏杆菌引起的种人畜共患的传染病.人类感染该病后，病程长，反复发作.氏期不愈.家畜感染则出现流产和不育严蛋危害畜牧业生产和人类健康：因此.做好检验检疫.对防治奶牛布鲁氏杆菌病致关虫要，而血淸学检査则是检验检疫奶牛布鲁氏杆菌病的垂要方法。1血清学检查的主要方法血淸学检查通常使用平板凝集试脸和试管凝集试验两种方法.平板凝集试验用于牛群粗筛,端出的阳性牛血清样品再用试管凝集试脸做最后

6、确诊。2平板擬集试验2.1材料准备作考简介：张金第，男，1976年1（）月出生,98E1国固禽固业|20W.9畜业技术疫病防治仔猪繁殖与呼吸综合症的诊断与防治乔俊平(陕西省旬邑县湫坡头镇畜牧业服务站711300)仔猎繁殖一呼吸综合症也叫蓝耳病，或称神秘痛，是由繁殖一呼吸综合症病毒所引起仔猪的种急性、鬲度接触性传染病发病的特征为：仔猪呼吸困难.耳尖、耳根发纟甘呈蓝紫色，体温升高，腹泻.消瘦。妊娠母猪流产、死胎、木乃伊。1诊断根据临床经验总结得出的简易诊斯方法：20%以上的胎儿死产.80%以上母猪流产断奶前冇26%以上的仔猪死亡，三项中冇两项符合即可得出初步诊斯或另一指标作初步诊断：发病14天内死

7、亡数在20%仔猪出生后第1周发病死亡率大于25%,母猪流产或早产率大于8%0另根据急性病猪在临床显现期和濒死期出现五大病理变化作为初诊依据：(1)急性败血症；(2)全身性的巨噬细胞和血管内皮细胞肿大、活化或增生;(3)间质性肺炎；(4)广泛性的澈循环障碍；(5)非化脓性脑炎。确诊需进行实验室诊断：(1)病命分离与鉴定，病毒分离是诊断猪繁殖与呼吸综合症最确切的种方法.般采用易感细胞分离法。目前用于分离猪繁殖与呼吸综合症病应的细胞主要冇猪原代肺泡巨噬细胞(PAM)、CL-2621细胞、M.A104细胞系的克隆株Marc-145采集病猪的血淸和肺组织分离成功率皿高。将猪的肺、死胎儿的肠和腹水、胎儿的

8、血淸、母猪血液.昴轼子和粪便等进行病毒分离。病料经处理后，再经045nm淀膜过海，取滤液接种猪肺泡巨噬细胞熔养，培养5天后，用免疫过氣化物關法染色，检査肺泡巨噬细胞中猪繁殖与呼吸综合症病能抗原。(2)间接騎联免疫吸附试验(ELISA),用ELISA可检测猪繁殖与呼吸综合症病恋抗体，方法是用猪繁殖与呼吸综合症病带接种PAM培养作已知阳性抗原，并用相同方法制备模拟抗原，当阳性抗原孔的OD值与模拟抗原孔的01)值之比大于15时，即可判样品为阳性。(3)间接荧光抗体试验(IFA)，检测猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原，血淸抗休滴度工1：20时判为阳性，血清抗体滴度Ml：64作为猪繁殖与呼吸综合症病廊活动性感

9、染标志。2防治(1)控制本病的主要描施是切断传播途径。对发病猪场要严密封锁，禁止猪只调运：对于核心猪群，应实施全而的、严格的执行粹医卫生描施.如搞好舍内外淸洁卫生，对地面用具.车辆.工作服等全面定期消孫。(2)严禁从发病国家和地区引进猪只。对于新购入的猪只应隔离检疫8周以上确证无病才能入群。(3)对于母猪群和种公猪进行血清学检测，淘汰阳性猪，培育淸净的健康猪样认A执行防疫制度.定期注射疫苗控制賭群的饲养密度.要消灭猪场内的鼠类和防止野鸟入内。(4)免疫预防。猪繁殖呼吸综合症灭活疫苗。用法及用fit：仔猪出生后20(|,毎只皮下或肌肉注射2mLc母猪在配种前57(1,首免毎只皮下或肌肉注射4mL

10、，间隔20(|以同样剂於加強免疫1次，以肩6个月注射1次。应注意的是注射此苗时个别猪会出现局部肿胀.可在短时间内消失。对于育肥猪在屠宰前3周不得注射此苗。(5)治疗本病目前尚无有效的治疗方法，只冇采取对症治疗描施。为防止细菌继发感染.可用抗茵索和碳胺类药物进行治疗：也可用安乃近或安痛定解热铠痛。同时注射荷樹糰生理盐水及维生素等可滅轻病猪的病情。3小结由于猪繁殖与呼吸综合症是免疫抑制性疾病，不仅造成猪发病与死亡.还造成免疫抑制，导致猪瘟等其他疾病的免疫失败，所以做好猪紧殖与呼吸综合症的防治，能够冇效地防止其他疫病的发生。目前国内已冇正规的批准文号的灭活疫苗，但術无冇效的治疗药物.给该病的防治带来定的在此悄况下，使用抗生素、广谱抗病強药及中草药.各种营养补充剂、免疫増强剂对症及早治疗冇定的疗效卄+、+、+、来记录各管反应结果。、+“：100%菌体完全凝集.液体完全透明，与比浊管对比呈100%淸亮.管底出现大片的伞状沉淀；“+75%IS体凝集，液体几乎透明,与比浊管对比呈75%淸亮.管底冇明显的伞状沉淀；50%的茵休凝集，液体中等混浊，与比浊管对比呈50%清亮,管底呈中等fit的伞状沉淀;*25%的菌体凝集,液体透明度不明显，与比浊管对比