临床免疫检验实验课件：循环免疫复合物的检测

1、 循环免疫复合物的检测前言免疫复合物：抗原与其相应的抗体结合形成的复合物 -组织中固定的免疫复合物（局部免疫复合物） -血液中的循环免疫复合物（circulating immune complex，CIC） 根据形成免疫复合物的Ag-Ab是已知或未知的将CIC分为两大类：特异性免疫复合物：如HBsAg-抗HBsAg，甲状腺球蛋白-抗甲状腺球蛋白形成的免疫复合物；非特异性免疫复合物。 循环免疫复合物的检测技术分为抗原特异性和非抗原特异性两类。大多数情况下，免疫复合物抗原性质不清或太复杂了，所以前者不常用；后者检测的是血清中CIC的总量，不考虑形成CIC的抗原特异性。 类别 原理 方法 敏感性 备

2、注 物理法 分子大小 1.超速离心 适于研究2.分子超滤 适于研究3.凝胶过滤30g 适于研究溶解度 1.PEG沉淀20g 粗定量,易推广2.冷沉淀 定性,临床应用补体法 固定补体,结合C1q 抗补体试验0.1g 常用,特异性差1.C1q凝胶沉淀试验100g 定性,不易普及2.C1q偏离试验4g 不易普及3.液相法10g 不易普及4.固相法1g 不易普及胶固素 胶固素结合试验3g 敏感,稳定抗Ig法 结合RF 1.RF凝胶沉淀试验100G 定性,不敏感2.mRF固相抑制试验120g 不易普及3.PRF凝集抑制试验110g 不易普及结合Ig 抗抗体法23g 不易普及细胞法 Fc受体 1.血小板凝

3、集试验14g 需新鲜制备2.ADCC抑制试验510g 细胞活性质控难3.M吞噬抑制试验0.03g 细胞活性质控难补体受体 1.Raji细胞法6g 需维持细胞株2.花环抑制试验10g 影响因素多实验原理PEG比浊法PEG（聚乙二醇）是非离子型水溶性聚合物，有很强的亲水性，可以破坏溶液中蛋白质表面的水化层，使蛋白质沉淀，即使浓度很高也不会引起蛋白质变性。不同浓度的PEG能选择性沉淀不同的蛋白质。用终浓度为3040g/L的PEG 6000能选择性沉淀CIC。循环免疫复合物与聚乙二醇作用，以浊度变化表现出来，可根据浊度的大小来反映免疫复合物的多少。浊度的大小用分光光度计测定。 主要试剂与器材待测血清（

4、已1：3稀释） 0.1mol/L pH8.4硼酸缓冲液（BBS）、41g/L PEG溶液 分光光度计、0.5cm比色杯、试管 实验步骤按照表格加样，此时PEG最终浓度为37.3g/L。加样后，充分混匀，置4 1h，置室温10min。用分光光度计在波长495nm下测两管的A值，以BBS调零。结果记录和判断记录对照管和测定管的A值待测血清A值测定管A值对照管A值正常血清CIC的A值为0.0430.02（XSD）。大于正常人A值两个标准差或更高者为CIC阳性。 注意事项不同浓度的PEG可沉淀不同分子量的免疫复合物。20g/L PEG 可沉淀较大的CIC，40g/L PEG 则沉淀较小的CIC，但浓度大于50g/L PEG选择性沉淀CIC的特性即消失，可能导致假阳性。温度变化对结果影响较大。4时CIC沉淀最佳，室温每升高1，A值下降0.2。低密度脂蛋白、高球蛋白血症或脂肪含量过高均可使浊度增加，故应空腹采血。样本陈旧或反复冻融等均可影响检测结果，故待测血清一定要新鲜，防止血清污染及聚合IgG形成。通常4冰箱保存不能超过3天，-20保存时间可适当延长。应用与评价CIC的检测对免疫复合物病（如血清病、SLE）是一种辅助诊断指标，对判断疾病活动和疗效有一定意义。PEG比浊法检测CIC快速、简便，敏感度达20mg/L，但不能区分免疫复合物的大小，且重复性和特异性较差，一般可以