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文档简介

1、实验三淋巴细胞分离技术（1）细胞免疫 主要是由T细胞介导。这种细胞在血液中占淋巴细胞总数的8090。受抗原刺激后活化发挥直接杀伤、分泌细胞因子等效应。 2）体液免疫 主要是通过B细胞介导。受到抗原刺激形成浆细胞后，产生并分泌抗体即免疫球蛋白，发挥中和作用、激活补体及调理作用等。 淋巴细胞为白细胞中体积最小的一种，直径6-8微米;在人体约占白细胞的20-30%，圆形细胞核，细胞质很少。淋巴细胞一、实验目的掌握淋巴细胞分离技术，熟悉免疫细胞的检查和功能二、实验原理脾脏是机体最大的外周免疫器官， 含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞。本实验以小鼠脾为例，通过离心及红细胞裂解液等分离脾细胞悬液，得到较高浓度的

2、淋巴细胞。 滤孔直径与滤网目数的对应关系滤孔直径（mm） 目数（目） 0.771 20 0.420 40 0.180 80 0.152 100 0.125 120 0.105 150 0.089 180 0.074 200 0.053 270 0.044 325扒开内脏，可看到如图所示的长约3-4厘米呈长条状的深红色组织，即为脾脏三、试剂及器材小鼠，解剖剪，培养皿，研磨棒，尼龙网，离心机，显微镜，计数板；RPMI 1640培养液， 红细胞裂解液（Tris-NH4Cl）， 0.05锥兰PBS溶液。四、实验步骤1. 颈椎脱臼处死小鼠，浸入75%的乙醇中浸泡1-2分钟；2. 在超净台中小心剪开小鼠的

3、腹部外皮，用大头针固定，再剪开小鼠的腹腔，用镊子取出小鼠脾脏放入200目尼龙网上,注意无菌操作；3.加入2mL的1640培养液, 然后用注射器活塞轻轻研磨小鼠脾脏；4. 加入2mL的1640培养液，冲洗尼龙网上残余细胞；5. 将全部液体收集到离心管中，1500rpm离心10分钟,去上清；6.加入2mL的1640培养液，1500rpm离心10分钟,去上清；7. 加Tris 氯化铵2ml，1分钟消化红细胞，加入1640培养液6ml, 1500rpm离心10分钟；8 .去上清液，加入1 mL的1640培养液重悬细胞，计数板细胞计数。五、实验结果细胞浓度计算公式： 4个大方格内的细胞总数个/ml = 104稀释倍数 4细胞活力检测：死的细胞可被染成蓝色

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