实验二 高效液相色谱法检测饮料中甜味剂

1、实验二高效液相色谱法检测饮料中甜味剂一、实验目的学习高效液相色谱仪的基本操作，分析测定汽水、可乐型饮料、果汁、果茶 等食品中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的色谱条件选择。二、实验原理试样中乙酰磺胺酸钾、糖精钠经高效液相反相C18柱分离后，根据保留时间 定性，外标峰高或峰面积定量。三、实验器材1、试剂1.1甲醇：色谱纯。1.2乙腈：色谱纯。0.02 mol/L硫酸铵溶液，称取硫酸铵2.642 g，加水溶解至1000mL。10%硫酸溶液。1.5中性氧化铝层析用，100目200目。1.6乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准储备液：精密称取乙酰磺胺酸钾、糖精钠各 0.1000g，用流动相溶解后移入100mL容量瓶中，并用流

2、动相稀释至刻度，即含 乙酰磺胺酸钾、糖精钠各1mg/mL的溶液。3.7乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准使用溶液：吸取乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准储 备液2mL于50mL容量瓶，加流动相至刻度，然后分别吸取此液1mL、2mL、 3mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，各加流动相至刻度，即得各含乙酰磺胺酸 钾、糖精钠 4pg/mL、8pg/mL、12pg/mL、16pg/mL、20pg/mL 的混合标准液系列。3.8 流动相：0.02mol/L硫酸铵（740800）+甲醇（170150）+乙腈（9050） +10%硫酸（1mL）。2、仪器高效液相色谱仪（配有紫外检测器）；超声清洗仪（溶剂脱气用）；离心机；

3、抽滤瓶；G3耐酸漏斗；微孔滤膜0.45m；层析柱，可用10ml注射器筒代替， 内装3cm高的中性氧化铝。四、实验步骤1、试样处理1.1汽水：将试样温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气。吸取试样2.5mL于25mL 容量瓶中。加流动相至刻度，摇匀后，溶液通过微孔滤膜过滤，滤液作HPLC分 析用。1.2可乐型饮料：将试样温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，吸取已除去二氧 化碳的试样2.5mL，通过中性氧化铝柱，待试样液流至柱表面时，用流动相洗脱， 收集25mL洗脱液，摇匀后超声脱气，此液作HPLC分析用。1.3果茶、果汁类食品：吸取2.5mL试样，加水约20mL混匀后，离心15min (4000r/mi

4、n)，上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至柱表面时，用流动相洗脱。收集洗脱液25mL，混匀后，超声脱气，此液作HPLC分析用。2、色谱测定2.1 HPLC参考条件分析柱：Spherisorb C18、4.6mmx150mm。粒度 5pm。流动相：0.02mol/L 硫酸铵(740mL800mL)+甲醇(170mL150mL)+乙 腈(90mL50mL)+10% H2SO4(1mL)。波长：214nm。流速：0.7mL/min。2.2标准曲线：分别进样含乙酰磺胺酸钾、糖精钠4pg/mL、8pg/mL、12pg/mL、 16瞄/mL、20pg/mL混合标准溶液各10pL，进行HPLC分析，然后

5、以峰面积为 纵坐标，以乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量为横坐标，绘制标准曲线。2.3试样测定：吸取处理后的试样溶液10皿进行HPLC分析，测定其峰面积， 从标准曲线查得测定液中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量。HPLC色谱图见图1：JUlAI1乙酰礴胺我押；-就精钠1咖咋因*天门冬眺蒸丙氯酸甲随，图13、结果计算试样中乙酰磺胺酸钾的含量按下式计算：v V 1000X cm 1000式中：X一试样中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量，单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg 或 mg/L）；C由标准曲线上查得进样液中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的量，单位为微克 每毫升（四g/mL）；V一试样稀释液总体积，单位为毫升（mL）；m一试样质量，单位为克或毫升（g或mL）。计算结果保留两位有效数字。4、精密度在重复性条件下获得的两次独立