X8月季的花药培养讲解

1、专题三 植物的组织培养技术课题2 月季的花药培养第一页，共二十三页。秋水仙素处理花药离体培养单倍体育种AABBaabbPAaBbF1AAbbABAbaBab单倍体植株AABBAAbbaaBBaabb原理：细胞的全能性植株矮小，高度不育第二页，共二十三页。月季(Rosa chinensisJacq.)玫瑰(Rosa rugosaThunb.)一年多生，花朵较大，花茎光滑、茎上刺少而粗，香味寡淡，果实圆形。一年一生，花朵较小，花茎有刚毛、茎上刺多而小，香味浓郁，果实扁圆形。第三页，共二十三页。被子植物：种子有果皮和种皮包被的植物。被子植物和裸子植物裸子植物：种子没有果皮，但有种皮包被的植物。实例：

2、向日葵、梨、月季等开花并结果的植物。实例：松、杉、柏等。第四页，共二十三页。花的结构第五页，共二十三页。花丝：输送营养花药：囊状结构，内有很多花粉(细胞2、花粉母细胞(小孢子母细胞) 花粉(未成熟) 即：单倍体的生殖细胞3、发育阶段：四分体时期、单核期、双核期一被子植物的花粉发育1、雄蕊根底知识减数分裂第六页，共二十三页。花粉管细胞核生殖细胞核花粉发育过程图小孢子母细胞花粉母细胞4个小孢子减数分裂 小孢子四分体时期单核居中期单核靠边期双核期有丝分裂2个精子有丝分裂营养细胞单核期生殖细胞第七页，共二十三页。1花粉母细胞2n4个小孢子(小孢子四分体)n减分有分1个花粉管细胞核n1个生殖细胞核n有分

3、2个精子单核居中期n单核靠边期n即4个单倍体细胞双核期单核期花粉发育过程基因型相同第八页，共二十三页。雌蕊的结构第九页，共二十三页。二产生花粉植株(单倍体植株)的两种途径花粉花粉胚状体愈伤组织丛芽生根移栽脱分化分化再分化诱导脱分化说明：两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度的配比。根底知识第十页，共二十三页。花粉花粉胚状体愈伤组织丛芽生根移栽脱分化分化再分化诱导脱分化根底知识胚状体(体细胞胚或花粉胚组织培养过程中，某些离体的体细胞或花粉细胞转变成的与胚非常相似的结构。(也具有胚芽、胚根、胚轴等结构胚状体的发育过程和正常胚类似。二产生花粉植株(单倍体植株)的两种途径第

4、十一页，共二十三页。三影响花药培养的因素 1、材料的选择 此外，亲本生长条件、材料低温预处理、接种密度等 2、培养基的组成 从花药所处时期看： 从花粉发育时期看： 从花蕾开放程度看：初花期(花期早期)的花药单核期(单核靠边期)的花粉完全未开放的花蕾第十二页，共二十三页。为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？想一想为什么选择完全未开放的花蕾作花药离体培养的材料？花瓣松动，微生物可能侵入到花药，给消毒带来困难。2、含菌少、易消毒1、可挑选到单核期的花药第十三页，共二十三页。实验操作1、材料的选取2、材料的消毒3、接种和培养4、鉴定和筛选第十四页，共二十三页。1、材料选取通过镜检确定花粉是否处于适宜

5、的发育期： 最常用的方法：醋酸洋红法(将细胞核染成红色 某些植物的花粉细胞核不易着色：焙花青-铬矾法， 将花粉细胞核染成蓝黑色。 从花药的时期看： 从花粉发育期看： 从花蕾开程度看：选择适宜的月季花药初花期的花药单核期的花粉完全未开放的花蕾第十五页，共二十三页。2、材料的消毒花蕾70酒精约30s无菌水清洗无菌吸水纸 吸干水分0.1氯化汞溶液无菌水冲洗提示： 用于培养花药的花蕾，外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态，所以只需将整个花蕾消毒即可。思考：月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比，二者有何不同？ 在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗。 第十六页，共二十三页。在无菌

6、条件下除去花蕾的萼片和花瓣，取出花药b、要彻底去除花丝取出花药后立即接种于培养基上，每瓶接种花药7-10个。剥取花药a、尽量不损伤花药接种注意：3、接种和培养温度控制在25左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 培养第十七页，共二十三页。培养20-30天后，花药分裂形成愈伤组织或胚状体假设形成胚状体：一个花药会产生大量幼小植株，必须尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上。 假设形成愈伤组织：应及时将愈伤组织转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株第十八页，共二十三页。在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，染色体组的数目常常会发生改变。主要原因是营养核和生殖核融合造成的4

7、、鉴定和筛选第十九页，共二十三页。菊花组织培养与月季花药离体培养的比较比较项目菊花组织培养月季花药离体培养原理植物激素染色体倍性的鉴定材料培养结果 细胞的全能性体细胞花药(花粉正常植株单倍体植株不必添加需要添加不需要需要第二十页，共二十三页。Thanks!第二十一页，共二十三页。提示：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。精子在花粉管中形成三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞再进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。第二十二页，共二十三页。内容总结专题三 植物的组织培养技术。实例：向日葵、梨、月季等开花并结果的植物。4个小孢子(小孢子四分体)n。二产生花粉植株(单倍体植株)的两种途径。说明：两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激