同济医院检验科ISO15189体系文件01微生物检验标本采集验收(拒收)及保存

1、同济大学附属同济医院检验科微生物组项目操作指导书TJYYJYKWSW/XMZ101第2版标题：微生物检验标本采集验收(拒收)及保存第1章 第01号第 PAGE 6 页 共 NUMPAGES 6 页1 目的：保证所采集的标本符合微生物检验要求，保证标本的质量。2 适用范围：微生物室现行所有检测项目。3 患者准备及标本采集3.1 血液 3.1.1 收集血液做培养时，因皮肤表面固有微生物包括表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、类白喉杆菌等多为污染菌，应该尽量避免污染样本。病人体温高峰或有严重感染的任何时候抽血2-3次, 每次间隔0.51小时（仅抽血一次的分离率为80%，二次为90%，三次为99%）。3.1.

2、2 先以肥皂洗去皮肤污垢后（如需要），将穿刺静脉上的皮肤周围、血液培养瓶口及抽血者的手指以酒精（70%）碘酒（2%）作用1-2分钟酒精（70），三道手续加以消毒。3.1.3 系上止血带，无菌抽取患者静脉血注入BACTEC-9050全自动血培养仪配套血培养瓶中， 迅速轻摇混匀，以防血液凝固。抽血最适量为8-10ml，允许范围3-10ml,小儿瓶1-3ml。3.1.4 常规血培养应每次抽两个血瓶（灰色盖嗜氧瓶和黄色盖厌氧瓶）；婴儿或小孩则将血液放入PedPlus血液瓶内（粉红色瓶盖）。3.1.5 疑似分枝杆菌感染或霉菌感染之病人则抽取血液5ml，注人MYCo/FLYTIC培养瓶中（红色瓶盖），并上

3、下摇动数次。3.1.6 注意事项3.1.6.1 每一发烧病人抽血次数以每天三次为原则，且至少要抽两套，其中间隔至少30分钟。如果患者情况危急，同时亦可采集身体不同部位血液做两套培养。但是不可由血管导管抽取血液样本。3.1.6.2 抽取血液后，无须要更换针头及可注入血瓶中，以避免针扎及污染率提高。3.1.6.3 抽血前，确认血瓶贴有条码（检验信息）并核对患者信息，但不可覆盖血液培养瓶原有的条码（产品条码）。3.1.6.4 若不能立刻送至微生物检验室，应置于35温箱或室温，绝不可置于冰箱。3.2 尿液3.2.1 中段尿采集法：将患者外阴部消毒、清洗后，让患者排尿，弃去前半部尿液，收集中段尿约10m

4、l左右，置无菌容器中立即送检。3.2.2 导尿法：采用导尿术取尿液10ml左右，置无菌容器立即送检。3.2.3 左、右肾盂采集法：由泌尿外科医师采集，注明左、右部位，立即送检。3.3 痰液3.3.1 所采取的痰样本，必须真正能代表肺部之分泌物者，通常清晨时痰液最多，且可能含较多量病原菌，如肺结核分枝杆菌。3.3.2 以清水或牙刷清洁口腔及牙齿，不可用牙膏。指导患者用力自气管深部咳出痰液，置无菌容器内送检。应尽可能防止唾液及鼻咽部分泌物混入样品。3.3.2 孩童常将痰吞入胃中，可抽取其胃容物送检，而且最好在清晨未进任何食物或水以前进行。3.3.2 在收集支气管分泌物时，可用支气管镜（Bronch

5、oscope）取得。3.4 化脓及创伤感染标本：对于已破溃的化脓灶或开放性创伤部位，先用无菌生理盐水擦净表面污染杂菌，然后用棉拭子采集深部脓液分泌物。对未破溃的脓肿，可采用无菌穿刺取样。3.5 脑脊液3.5.1 脑脊液通常取自腰椎穿刺，由医师以如下方法操作：以70%酒精或20碘酊消毒背部下方，先行麻醉，然后以一特制的通管针（stylet），轻轻地由第三与第四节腰椎间的中线部位穿刺入脊髓蜘蛛膜，整个过程需以最严格的无菌操作技术进行。3.5.2 若病患为婴儿或孩童，则将其头手摆放于折叠的床罩、毛毯上，或将枕头垫于其腹部下，如此可使医师易于做腰椎穿刺。3.5.3 抽取出之脑脊髓液分置于三根无菌试管内

6、，第一或第二管迅速送至微生物室；病毒、霉菌、分枝杆菌培养样本可置于4保存待送。3.6 生殖道标本3.6.1 生殖道样本应取两支无菌棉花拭子，分两次收集，一支用来作直接抹片，另一支作培养。3.6.2 发育期或成年妇女，分别由尿道口、子宫颈或直肠（如怀疑此部份有淋病双球菌时为之）采样。3.6.3 若怀疑年幼女童有淋病性阴道炎时，则样本由阴道外围部位取得。3.6.4 男性疑有急性淋病时，则由尿道取分泌物样本作涂片及培养，若怀疑有慢性淋病，样本可由医师采自前列腺或精囊。3.6.5 以棉花拭子采集的样本，可直接接种于适当的培养基，如MTM平板。3.7 粪便与直肠拭子样本3.7.1 微生物检查的粪便，由病

7、人排出后，取约碗豆大小含有黏液、脓、血液或组织碎片的部份的粪便，直接装入无菌容器送检。 3.7.2 粪便样本，亦可从直肠指诊时，于手套上取得。3.7.3 欲采集直肠样本时，须以肥皂，水和70%酒精，将肛门周围洗净，然后用一根浸过无菌生理食盐水或液体携送培养基之棉花拭子，插入肛门约5cm处，轻轻旋转，以便使之与直肠钻膜之表层接触，然后取出置于运送培养管，并立刻送至检验室，如果无法马上送出，则置于4冰箱保存待送。3.7.4 医师发现怀疑腹泻病原菌弯曲菌、艰难梭菌、耶尔森菌、弧菌和大肠埃希菌（0157:H7）等的病例，送检前请与微生物联系，并于申请检验单上特别注明，以便提高此菌的分离率。3.7.5

8、粪便与直肠拭子样本作微生物检查时，要特别注意携送与接种的迅速性。如有拖延，可能会有一些非病原性的肠内细菌，生长速度超过病原菌，影向病原菌的分离。3.8 鼻腔及咽喉样本3.8.1 若从鼻腔采样本作培养，可用一支无菌棉花拭子（其尖端之棉花必须紧密）直接插入鼻腔，应避免用大而疏松的棉花拭子，因其可能滑落，甚至陷于病人鼻腔中。3.8.2 若从咽喉采集样本作培养，须在光线充足下，采集两根拭子，分二次收集，收集完立即送检，或置于运送培养基内，以防样本干燥，采集时尽量避免接触舌头唾液。3.9 鼻咽样本3.9.1 所谓鼻咽是指软颚后方咽喉上半部，欲由此处取样本，须用一根细长的拭子，由鼻腔穿入咽喉处，轻轻旋转擦

9、拭，然后取出，再从另一鼻孔穿入鼻咽处。3.9.2 样本收集后，迅速送检，整个采集过程，须避免唾液污染。3.10 脓或伤口标本3.10.1 脓疡与疖中的脓，可由排液法取得，先用70%酒精擦拭患部，干燥之后，再用一无菌刀片将其切开，然后以无菌拭子采取样本，若创伤范围广时，应尽可能将伤口之表面部位割除，只取深层部位之样本。否则所取得的样本，可能受到表层微生物污染，取得样本后，拭子立即置于运送管内送检。3.10.2 如作厌氧培养，最好以针筒直接抽取，以无菌塞子塞住针头，迅速送至检验室，避免样本在运送过程中，暴露在有氧环境中，而使厌氧菌死亡3.11 体液样本3.11 包括胸腔液、腹腔液、心包液或关节腔液

10、，通常由医师以无菌技术采集，即以一根套管腔针或特殊设计的针，插入欲采集的部位，抽取液体5ml左右，注入无菌含抗凝剂的管内混匀送检.3.11 体液标本均需作厌氧培养，可直接注入厌氧血培养瓶送检。3.12 血管导管3.12.1 标准方法是先作周围的消毒，以无菌剪刀取下约5cm长度，置于无菌容器送检。3.12.2 实验室将导管于培养基上滚动数次后进行培养，如果菌落数大于15 CFU以上，则认为血流感染可能与导管有关。3.13 眼结膜样本 可用一根浸过无菌生理食盐水的拭子采集。采集时须小心地避免感染蔓延至眼部邻近区域，采集后拭子及时送检，以防样本干燥。4 微生物检验标本采集原则4.1 采集真正病灶处的

11、标本，避免邻近区域微生物的污染。4.2 盛标本的容器须先经灭菌，但不得用消毒剂或酸类处理。4.3 在病患感染的急性期、使用抗生素或伤口局部治疗前收集样本。4.4 采集好的标本，容器上应贴有信息条码或检验申请单上撕下的联号，加注病人姓名床号。4.5 标本采集完毕应尽快送检，搁置时间长会影响检验结果。如不能立即送检。通常放冰箱暂存（血培养除外），某些标本如淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌，在送检过程中应注意保温。4.6 注意采集的时机和部位，如伤寒沙门菌的阳性检出率，发病的第一周采集血液，第二周采集粪便，第三周采集尿液，阳性检出率较高。4.7 由于病人标本很可能含有大量致病菌，故在采集、包装和送检时都必须

12、注意安全，防止污染，传播和自身感染。同时，标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须盖紧包好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。4.8 采取适当的解剖位置、技术与容器收集足量的样本，尽量不要以棉花拭子收集样本(咽喉及生殖道除外)。4.9 样本中不可添加防腐剂，以避免干扰病原菌分离。4.10 样本收集、运送及保存过程中，须避免他人被感染。5 标本的验收及拒收： 5.1 标本验收：核对被检者姓名、年龄、性别、临床诊断、标本种类、申请检测的项目、标本采集时间、标本数量及质量等。对不符合微生物检验要求的标本，实行拒收，或核准后进行检验,参见表5。5.2 拒收条件：5.2.1 申请单填写：项目与标本不符，如申请

13、单上为血培养，送检的标本为痰等; 未注明标本来源及培养项目;姓名、科别、床号与标本的标签不符；项目填写不符合要求或无医师签字。5.2.2 送检标本：标本已有明显的污染迹象，如开塞、非无菌送检的体液等；在同一日，同一病人送检多次相同标本（抗酸菌、血标本除外）如：尿、粪便、痰、咽拭、拭子等；标本量过少或已有明显干燥；厌氧菌培养未放入在选定的厌氧转运液内或标本已接触空气；送标本的时间已明显拖延；拭子标本要求作厌氧培养（除非置于厌氧标本运送管内）；痰液标本采集不当（如唾液）；干燥拭子。5.2.3 下列标本作厌氧培养：痰、中段尿、褥疮溃疡、导管、咽喉、 阴道分泌物、鼻、前列腺分泌物、皮肤、粪便、口腔、环境标本、 回结肠手术标本、胃洗液、支器管洗液、脓瘘。5.2.4 血培养要求做革兰染色，TB培养等。5.2.5 24h尿或痰作TB或霉菌培养。5.2.6 尿液标本室温超过2h。， 5.2.7 一支拭子做细菌、TB及霉菌培养。5.2.8 其他: 送检标本不符合操作规程中的有关条款。6 标本的保存6.1 样本在尚未进行检验或未能立即送检时，必须储存在适当的环境下，以防止病原菌