正交实验法优选参芪补血颗粒的提取工艺

1、正交实验法优选参芪补血颗粒的提取工艺【关键词】参芪补血颗粒；,正交实验；,高效液相色谱法；,黄芪甲苷摘要：目的研究参芪补血颗粒剂的最正确提取工艺。方法选用L934正交表设计实验，并以黄芪甲苷(41H6814)和干膏得率作为考察指标，考察乙醇浓度、乙醇用量、提取次数、提取时间对提取效果的影响。结果参芪补血颗粒的最正确提取工艺为用65%的乙醇8倍量，回流提取3次，1.5h/次。结论采取正交设计挑选出最正确提取方法较好，操作简单，重现性好，有效成分提取率高，工艺可行。关键词：参芪补血颗粒；正交实验；高效液相色谱法；黄芪甲苷Abstrat：bjetiveTdevelptheptialextrative

2、tehniquesfShenqibuxueGranules.ethdsL934rthgnalexperientasappliedtnedevelpentsinextrativetehniques.Theyieldfastragalside(41H6814)anddryextratnditinedextratingrudedrugsfralhl.never,inthelightfntentindexes,furfatrsustbetakenintnsideratin:thefrequenyandtiefextrating,thequantityandnentratinfalhl.ResultsT

3、heptialextrativetehniqueserethenadvaned.8fldsf65%alhlererefluxedfr3ties,eahtiefr1.5h.nlusinTheprpsedethdsresultingdreprduibilityasellashighyieldfativenstituents.Thus,itisfeasibletflltheptialextrativetehniques.Keyrds：ShenqibuxueGranules;rthgnalexperient;HPL;Astragalside参芪补血颗粒是由黄芪、当归、制首乌、党参等6味中药组成的中药复

4、方制剂。主要用于治疗贫血和放射、化疗时引起的白细胞、血小板减少等血虚症。黄芪系方中君药，黄芪甲苷为其活性成分之一，对药物和放射所致白细胞和淋巴细胞降低具有明显的改善作用1，并且其稳定性好。因此，测定提取液中黄芪甲苷的含量可作为评价本制剂质量的客观指标之一，浸膏提取量也可作为有效成分提取率的指标。故为了发挥药物的最正确疗效，优化制备工艺，本文以黄芪甲苷含量为指标、结合浸膏得率，用正交实验法优选本制剂的最正确提取工艺，为工业化消费提供根据。1仪器与试剂DINEXSuit680高效液相色谱仪(美国)：DINEXP680HPLPUP，TherstattedlunpartetT-100，Allteh20

5、00ES型ELSD、DINEXhrenlenhratgraphyanageentSyste；SK250LH型超声波清洗器上海科导超声仪器；ZRBAXExtend184.6150，5美国安捷伦科技色谱柱。黄芪甲苷对照品0781202211中国药品生物制品检定所；参芪补血颗粒由第四军医大学药物研究所和化学教研室研制；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。2方法与结果2.1高效液相色谱方法的建立2.1.1色谱条件流动相乙腈水3268；流速：1.0lin-1；柱温：25；Allteh2000ES型ELSD；飘移管温度：100.6；气体流速：2.7Lin-1；进样量：20l；理论塔板数以黄芪甲苷峰

6、计算大于5000。色谱图见图1。a-对照品b-供试品图1色谱图略2.1.2标准曲线的制备精细称取黄芪甲苷对照品12.5g置于25l容量瓶中，参加无水甲醇定容至25l，配制为0.5gl-1的黄芪甲苷对照品储藏溶液。用移液管分别精细移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0l黄芪甲苷对照品储藏溶液置10l容量瓶中，加甲醇定容，分别得到浓度为0.05，0.10，0.15，0.20，0.25,0.30gl-1的标准品溶液，用0.45微孔滤膜滤过，进样20l在给定色谱条件下进展测定。以进样量的常用对数值x为横坐标，蒸发光峰面积的常用对数值y为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：y=0.957+1

7、.635x，r=0.9992，黄芪甲苷在1.06.0g的范围内呈良好的线性关系。2.2提取方法的选择2.2.1醇提正交实验根据文献研究及预实验，设计提取工艺的正交实验因素程度，结果见表1。表1因素程度表略根据因素程度表，选用L934正交实验表进展实验见表2。每份称取参芪补血颗粒原药材36g，按正交表实验方案进展提取，提取液减压浓缩并用双蒸水定容到200l的容量瓶中，超声溶解，以供测定两个检测指标的含量。转贴于论文联盟.ll.2.2.2提取液中黄芪甲苷和干浸膏得率的测定提取液中黄芪：甲苷含量测定用移液管精细移取2.2.1项下定容到200l的提取液50l到250l圆底烧瓶中，于旋转蒸发仪上旋转蒸干

8、，残渣加水20l超声溶解后，转移至分液漏斗，以水饱和的正丁醇萃取4次，30l/次，合并正丁醇萃取液，用氨试液40l浓氨水加水配成100l充分洗涤2次，30l/次，弃去氨液，将正丁醇层在旋转蒸发仪上减压回收至干，用甲醇超声溶解并定容至10l，摇匀，用0.45微孔滤膜滤过，得供试品溶液2。在选定的色谱条件下测定，进样量20l，记录色谱峰面积，根据回归方程计算提取液中黄芪甲苷的含量，结果见表2。干浸膏得率测定：用移液管精细移取2.2.1项下定容到200l的提取液50l置于已枯燥至恒重的蒸发皿中，先于水浴上挥干，然后按2022年版中国药典一部附录H烘干法进展测定，即将盛有样品溶液的蒸发皿置于烘箱中，在

9、100105下枯燥5h，然后移置于枯燥器中冷却30in，精细称定重量，再在上述温度枯燥1h，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5g为止。根据所得的干膏重量计算药材干浸膏的得率。结果见表2。表2正交实验黄芪甲苷得率测定结果略2.3提取工艺的优化利用直观分析和方差分析对表2中的试验结果进展数据分析，直观分析结果见表2，方差分析结果见表34。通过黄芪甲苷含量、干膏率双指标进展考察，两者在醇的用量上存在差异，但通过方差分析可以看出醇的用量对黄芪甲苷含量、干膏率两者的测定结果并无显著性影响，故从节约本钱的角度考虑，优选出最正确工艺为A1B23D2，即用65%的乙醇8倍量，回流提取3次，1.5h/次，

10、所得样品上述成分提取率最高。2.4最正确工艺验证为验证所优选工艺的可靠性和重复性，我们按最正确工艺平行制备3份样品，测定黄芪甲苷得率平均为0.107%，干膏平均得率为42.76%，均高于正交9份样品的得率，说明本工艺结果可靠，适用于工业消费。表3正交实验黄芪甲苷含量方差分析略表4正交实验干膏得率方差分析略3讨论黄芪系方中君药，在造血功能方面的作用包括：小鼠灌服膜荚黄芪煎煮剂，对失血性贫血以及环磷酰胺所致白细胞和血小板的减少均有促进恢复作用3，对环磷酰胺TX所致小鼠造血功能损伤，灌服黄芪煎剂可使增加骨髓造血干细胞和粒单系造血祖细胞集落数显著增加4等。而黄芪甲苷是黄芪中的主要有效成分，并且其稳定性较好。因此,本试验以黄芪甲苷含量测定作为评价有效成分提取率的客观指标之一。由于黄芪甲苷仅在200n左右有弱的末端吸收，如用紫外检测法进展含量的测定，那么存在着噪音对结果影响较大，灵敏度较低的缺陷。作者曾用甲醇代替乙腈进展实验，发现黄芪甲苷易受到试剂的干扰，因此，本文采用ELSD测定黄芪甲苷的含量。ELSD是一种新型的检测器，适用于不挥发或半挥发样品的检测，而不受被测组分在一样条件下无其色谱峰的出现及化学构造的影响，具有灵敏度高、重现性好的优点。参考文献：1张银娣，徐勤娥，刘小浩，等.黄芪苷升高白细胞及抗应激作用的研究J.南京医学院学报，1992