四种血虚小鼠模型制备方法的比较

1、四种血虚小鼠模型制备方法的比拟【关键词】血虚模型；,四物汤；,环磷酰胺；,乙酰苯肼摘要：目的挑选适宜的小鼠血虚模型的制造方法。方法采用环磷酰胺250g/kg腹腔注射；乙酰苯肼350g/kg皮下注射；环磷酰胺120g/kg+乙酰苯肼200g/kg腹腔注射及环磷酰胺160g/kg腹腔注射+乙酰苯肼60g/kg皮下注射四种方法制造小鼠血虚模型，取血测定小鼠外周血象、观察小鼠一般情况的变化。结果4种方法可造成不同程度的小鼠血虚状态,应用四物汤治疗后,环磷酰胺160l/kg腹腔注射+乙酰苯肼60g/kg皮下注射所造模型组小鼠血虚状态有显著改善。结论环磷酰胺160g/kg腹腔注射+乙酰苯肼60g/kg皮下

2、注射所造模型小鼠最能反映中医血虚证的主要特征。关键词：血虚模型；四物汤；环磷酰胺；乙酰苯肼血虚证是中医常见证，血虚模型是应用较广的中医动物模型，但目前制造模型的方法不一，作者首先采用环磷酰胺250g/kg腹腔注射；乙酰苯肼350g/kg皮下注射；环磷酰胺120g/kg+乙酰苯肼200g/kg腹腔注射三种方法制造小鼠血虚模型，并以四物汤对后两组进展治疗，效果不理想，后采用环磷酰胺160g/kg腹腔注射+乙酰苯肼60g/kg皮下注射制造小鼠血虚模型，以四物汤进展治疗获得成功。实验中，局部结果与文献不尽相符。现报道如下。1仪器和药品1.1动物昆明种小鼠体重1822g，雌雄各半，河北医科大学实验动物中

3、心。1.2仪器SysexF800型全自动血液分析仪日本1.3药物及试剂注射用环磷酰胺PA上海华联制药，批号020605；乙酰苯肼APH上海三爱思试剂，化学纯，批号20010323；生理盐水(石家庄四药股份批号03021227)。四物汤汤剂于实验前一天配制成高浓度药液,生药含量为1.25g/l，置4保存。临用前用蒸馏水稀释2倍得中浓度药液，生药含量为0.625g/l；稀释4倍得低浓度药液，生药含量为0.313g/l(相当于临床有效量)。2方法2.1三种造模方法的比拟实验动物按体重随机分为正常组、模型组、模型组、模型组，每组各10只。模型组于第4天腹腔注射PA250g/kg，第14天眼底静脉丛采血

4、测血常规。模型组于1，4，7d皮下注射APH150，100，100g/kg，第9天眼底静脉丛采血，测血常规。模型组于第4，8天腹腔注射PA60g/kg，第7、10天腹腔注射APH100g/kg，第14天眼底静脉丛采血测血常规。正常组于4，7，8，10d腹腔注射生理盐水，第14天眼底静脉丛采血测血常规25。2.2四物汤对乙酰苯肼350g/kg及环磷酰胺120g/kg+乙酰苯肼200g/kg所致血虚小鼠的补血作用实验动物按体重随机分为9组，每组12只。1组为空白对照组，25组为PA+APH模I模型组，69组为APH模II)模型组，其中2，6组为模型对照组，其余为高、中、低剂量组，分别给予高、中、低

5、剂量的四物汤，35用药组连续灌胃给药13d，对照组给等容积煮沸消毒的自来水。79用药组连续灌胃给药9d。造模及采血方法同前1。2.3四物汤对环磷酰胺160g/kg+乙酰苯肼60g/kg所致小鼠血虚状模型的补血作用实验动物按体重随机分为5组，每组12只。1组为空白对照组，2组为模型对照组，35组为给药组，分别给予高、中、低剂量的四物汤。各用药组连续灌胃给药13d，对照组给等容积煮沸消毒的自来水。25组分别于2，5d皮下注射APH20，40g/kg，从第5天开场连续四日每日腹腔注射PA40g/kg，空白对照组小鼠同时注射等容量的生理盐水。末次给药后1.5h眼底静脉丛采血测血常规。2.4统计处理本实

6、验采用s表示实验结果。统计分析使用SPSS11.5软件。3结果3.1三种造模方法的比拟3.1.1小鼠一般情况动物于造模后，开场出现不同程度的懒动、毛色枯槁、少食、及尾、耳、眼苍白，模型III组最为严重，第12天开场有动物死亡，共死亡2只，其他组没有动物死亡。转贴于论文联盟.ll.3.1.2小鼠外周血象的变化各模型组小鼠的红细胞、血红蛋白、红细胞压积均有不同程度降低。模型组降低最为明显。各组动物的血小板变化不大，只有模型III组血小板上升39%P0.05。除模型组白细胞下降外，其余二组白细胞上升模型组模型组结果见表1。表1三种造模方法的检验结果(略)3.2四物汤对乙酰苯肼350g/kg及环磷酰胺

7、120g/kg+乙酰苯肼200g/kg所致血虚小鼠的补血作用3.2.1小鼠一般情况PA+APH模型小鼠于造模后出现懒动、闭目，尾、耳、眼苍白，各组有46只动物死亡，经x2检验无显著性差异。APH模型小鼠尾、耳、眼苍白，饮食、活动尚可，给药组与模型组无明显差异。3.2.2四物汤对环磷酰胺160g/kg+乙酰苯肼60g/kg所致血虚小鼠的补血作用小鼠外周血象的变化各模型组小鼠的红细胞、血红蛋白、红细胞压积均降低，与正常组相比有显著差异P0.01，各用药组与模型组差异不显著P0.05。见表23。表2四物汤对PA120g/kg+APH200g/kg所致血虚小鼠模的作用(略)表3四物汤对APH350g/

8、kg所致血虚小鼠模)的作用(略)3.3四物汤对环磷酰胺160g/kg+乙酰苯肼60g/kg所致血虚小鼠的补血作用3.3.1小鼠一般情况模型组小鼠于造模后，出现懒动、毛色枯槁、少食、及尾、耳、眼苍白。给药孝中剂量组小鼠行动敏捷，毛色正常，眼、耳、尾呈粉红色，与正常组无明显差异。3.3.2小鼠外周血象的变化模型组小鼠的红细胞、血红蛋白、红细胞压积均降低，与正常组相比有显著差异P0.01。给药中、小剂量组与模型组比拟，各指标有显著进步P0.01，用药大剂量组各指标数值虽有进步但与模型组差异不显著P0.05。表4四物汤对PA160g/kg+APH60g/kg所致血虚小鼠的补血作用(略)4讨论有报道采用

9、PA+APH造成小鼠血虚状态，实验动物白细胞下降，分别应用当归补血汤，四物汤治疗后，白细胞上升，并与模型组有显著差异13。本次实验中严格按照文献记载方法造模，但白细胞显著增高，经人工计数验证，结果一样。大多数文献报道单用APH造模可致白细胞升高，但也有报道白细胞下降6，提示可能与APH有关，实验所用APH均为化学纯，APH对实验动物白细胞的影响有待进一步研究。本研究中以PA120g/kg+APH200g/kg造模时实验动物死亡2只，与文献报道一样。用于研究四物汤的补血作用时，动物死亡近半，与文献报道每组死亡只不符，经重复实验，结果一样，死亡动物解剖可见动物肝、脾、肾肿大，色黑，与文献报道一样2

10、。有报道指出四物汤可显著改善以APH350g/kg，PA120g/kg+APH200g/kg所致小鼠的血虚状态，本次实验中采用一样方法，各用药组的各指标数值比模型组有所改善，但无统计学意义。以PA160g/kg+APH60g/kg造成小鼠血虚状态时，除白细胞外其他与文献报道相符。参考文献：1金假设敏，宁炼，陈长勋，等血虚模型动物制备及当归补血汤的作用研究J.中成药，2001，23(4)：268.2袁久荣，卢兖伟，容蓉，等计算机辅助分析四物汤补血作用配伍机理的研究J.中国实验方剂学杂志，2000，6(1)：37.3袁久荣，朱建伟，李成韶，等四物汤对两种血虚动物模型补血作用的比拟J.山东中医药大学学报，1999，23(5)：238.4马增春，高月，刘永学，等.四物汤对环磷酰