氟达拉滨气道滴入对小鼠病毒性肺炎疗效观察

1、氟达拉滨气道滴入对小鼠病毒性肺炎疗效观察肺部病毒性疾病种类众多，由于其发病机制还不完全明了，临床往往使用糖皮质激素对过度强烈的免疫反响进展抑制，情况如近年出现的传染性非典型性肺炎SARS。但长期大量使用激素的副作用明显，且激素在抑制炎症方面并非总是最正确选择，因此需要其他高效、平安的药物作为激素治疗的替代和补充。1材料与方法1.1材料1.2方法A组、仙台病毒组B组和仙台病毒加氟达拉滨治疗组组。别离红细胞。在血凝板中每孔参加参加0.5l仙台病毒鸡胚尿囊液，浓度从1/10到1/1280成倍递减，另设一孔为阴性对照。室温静置3060in后观察血凝结果，红细胞呈伞状在血凝板底部沉积，边缘略呈伞状翻卷为

2、阳性，血球呈点状沉积于血凝板底部者为阴性。以阳性结果的最高稀释度为血凝效价。本实验采用的仙台病毒血凝效价为1320。小鼠吸入乙醚作轻度麻醉后，A组经鼻滴入50lPBS，B、组动物均经鼻滴入同体积仙台病毒鸡胚尿囊液制备仙台病毒肺部感染模型，组同时滴入0.04gl-1的氟达拉滨PBS溶液25l。1.23氟达拉滨用药方法参照我们以往实验结果，选择0.001g只-1为气道部分用药剂量2。HE染色行病理观察；右肺中下叶同样方法固定以备免疫组织化学分析；左下叶肺组织冻存于-70作esternBltting分析。参加Trizl1l，静置5in后加氯仿0.2l振遥12000g离心后取有机相，参加乙醇使DNA沉

3、淀，低速离心去除DNA沉淀后加2l异丙醇使蛋白质沉淀，12000g离心后用盐酸胍乙醇溶液洗涤蛋白质块3次，用1l1%SDS使蛋白质溶解。Bradfrd法测定蛋白浓度，调至1gl-1，与上样缓冲液混合煮沸后每个泳道加样20l。聚丙烯酰胺凝胶电泳后湿式转印至硝酸纤维薄膜，一抗、二抗孵育后DAB显色。将免疫印迹所得结果经图像扫描分析，选择其中1条泳道的蛋白质条带作标准进展灰度测定。根据平均灰度与STAT1含量呈正比的原理，计算每个泳道STAT1的相对含量。1.3统计学处理2结果2.1小鼠质量变化B组小鼠质量进展性下降，A、组质量均有上升。实验开场1周后，A组质量由原来22.31.4g增加到24.50

4、.5g，组质量由原来23.60.9g增加到23.80.7g，B组质量由原来22.71.1g减少到19.41.2g。实验开场时3组间小鼠质量无显著性差异P0.05，7d后3组间质量均有显著性差异P0.05，其中A组质量最高，B组最低。2.2气道病理学变化A组小鼠肺组织切片显示，支气管内壁光滑，无上皮脱落现象，肺泡间隔菲薄，未见淋巴滤泡形成。B组肺部炎症明显，肺内细胞增多，支气管壁增厚，黏膜褶皱伸到管腔中央，支气管黏膜下有大量淋巴细胞聚积，淋巴细胞面积为1450.01494.32。组肺部炎症程度较B组轻，支气管黏膜下无大量淋巴细胞浸润，聚集成团的淋巴细胞面积为128.2142.32。比拟3组淋巴滤

5、泡面积，B组与A、两组具有显著性差异P0.05，A、组间无显著性差异P0.05。见图1。2.3支气管厚度变化支气管厚度A组为17.15.4%,B组为45.230.9%，组为19.810.3%。B组与A、两组相比，支气管厚度增加，差异均有显著性均P0.05，A、两组之间无显著性差异P0.05。3讨论肺部病毒感染性疾病缺乏特异的治疗手段，常需要免疫抑制剂以减轻部分炎症或延缓疾病进程。糖皮质激素是临床上常用的免疫抑制剂，但在病毒性肺炎中，大剂量糖皮质激素易导致严重副作用的产生，同时激素在某些情况下也不能有效阻断炎症病程。在肺部疾病如特发性肺间质纤维化和糖皮质激素抵抗性哮喘中，常需应用环孢菌素或氨甲喋

6、呤来弥补或代替糖皮质激素作用的缺乏6。a.A组小鼠肺组织，支气管内壁光滑，肺泡间隔菲薄,HE100;b.B组肺部炎症明显，支气管壁增厚，黏氟达拉滨作为一种嘌呤碱类似物，在体内可通过抑制DNA的合成来治疗慢性淋巴细胞性白血病等血液玻但近年来，氟达拉滨也被作为抗炎药物，用于治疗某些淋巴细胞过度活泼的疾病，例如治疗糖皮质激素无反响的关节炎7。我们在以往的实验中发现氟达拉滨经鼻滴入对脂多糖诱导的小鼠肺炎具有抑制作用。本实验显示，氟达拉滨对仙台病毒引起的气道炎症也有抑制作用，表如今肺内炎症细胞数量减少、气道壁增厚程度减轻、肺内STAT1的表达降低，动物一般情况有所改善。氟达拉滨作为抗肿瘤药物的作用原理，

7、主要表达在抑制淋巴细胞的活化。在病毒感染时，D8+T淋巴细胞起着关键的抗病毒作用，但D8+T细胞的细胞毒作用同样可对正常组织造成破坏。Sullivan等对致死性哮喘的尸检说明，病毒感染造成的、高度活化的细胞毒性D8+T淋巴细胞是导致哮喘患者死亡的重要原因。因此，在病毒感染过程中，淋巴细胞的活化并不总是对机体有利的，一旦免疫反响过于强烈那么需要采用免疫抑制手段干预14。在上述因哮喘死亡的7例患者中，6例长期使用吸入或口服糖皮质激素，可见糖皮质激素对D8+T淋巴细胞功能的抑制并缺乏够有效。氟达拉滨对D4和D8T淋巴细胞都具有强大、持久的抑制作用，对D8T淋巴细胞的体外抑制作用要强于对D4的抑制作用15。本实验中，仙台病毒感染1周后鼠肺组织可见大量淋巴细胞浸润，部分可见显著的淋巴滤泡构造。未用氟达拉滨干预的动物不仅肺部病变明显，且质量也显著下降P0.05；使用氟达拉滨的动物肺内淋巴滤泡明显减少，动物一般情况有所改善，提示氟达拉滨的治疗机制与抑制STAT1表达无关，而与抑制仙台病毒引起的鼠肺淋巴细胞的募集和活化有关。氟达拉滨在血液系统恶性肿瘤和炎症性疾病中的应用结果说明，它具有强大持久的抑制淋巴细胞活化的才能，包括原始T细胞D4+D45RA+、记忆T细胞(D4+、D45R+)和D8+T细胞。我们的实验也说明，小剂量的部分给