血细胞分类检测的影响因素

1、白细胞分类检测的影响因素【摘要】 目的 探讨影响血液细胞分析仪测定白细胞分类的因素，排除假性增高和假性降低情况，必要时必须血片复核，准确地为临床提供可靠的诊治依据。 方法 使用Sysmex KX-21血液细胞分析仪及目视显微镜，同时对150例标本进行检查，对比分析。结果 操作不顺利、标本采取后放置时间、温度及上机前标本混匀、振荡时间、力度等均可影响血液细胞分析仪正确对白细胞的分类。结论 血液细胞分析仪并不能完全代替目视显微镜进行白细胞分类，对出现疑有异常白细胞警告报警，应分析原因，目视显微镜下白细胞分类或重新采血。 【关键词】 血液细胞分析仪；白细胞分类；影响因素 【Abstract】 Obj

2、ective To discuss the factors that can effect the blood cells analyer to measure the classification of leukcyte and remove the situation of the pseudo increasing and decreasing and push a blood piece to examine and provide the clinical doctors with the reliable indentification of diagnosis and treat

3、ment accurately. Methods With the Sysmex KX-21 blood cell analyer and the visual microscope,150 blood specimens were examinecl and had the constrary analysis in one time.Results Being unsmooth on operation, setting aside the specimens for a long time after collecting, the temeprature and the mixture

4、 of specimens, the duration and power of osillation and so on are all effect the accurate classification of leukcyte in the blood cells analyer. Conclusions The blood cells analyer cannot compeletely replace the visual microscope to examine the classification of leakcyte. When appearing the doubts a

5、nd warning reports on the unusual leakcyte, reasons should be analied and classification should be in the visual microscope or blood specimen should be collected again. 【Key words】 blood cells analyzer; classification of leukocyte; the influential factors 外周血白细胞分类，是白细胞分析中一项十分重要的内容，是临床诊断和鉴别诊断的重要指标之一。

6、近几年来，随着HYPERLINK /gongxue/科学技术的不断HYPERLINK /fazhan/发展，各种型号血液细胞分析仪，在各级HYPERLINK /Medicine/医院检验科已广泛应用，特别是白细胞自动分类和异常白细胞警告提示，改变了目视显微镜分类方法，大大减轻了检验人员的劳动强度，使工作效率明显提高。但是，目前很多检验人员因对三分类血细胞分析仪性能缺乏足够的认识，误认为血细胞分析仪分类结果，完全可以代替目视显微镜分类结果，而忽视某些结果需要复片的重要性。为此，本文将对日本Sysmex公司生产的KX-21血细胞分析仪白细胞分类，与目视显微镜复片分类，对异常白细胞检出率进行对比分析

7、。找出使用血细胞分析仪检测白细胞分类的影响因素，现探讨如下。 1 材料与方法 1.1 仪器 血液细胞分析仪(Sysmex KX-21)，为日本Sysmex公司产品。 1.2 试剂 全部配套试剂和质控液。 1.3 方法 随机抽查门诊患者150例，静脉采血，EDTA-K2抗凝。室温放置15min后，充分混匀，上机测试。同时推血片一张，室温HYPERLINK /lixue/自然干燥，瑞氏染色，目视显微镜下进行白细胞分类。将两种方法对异常白细胞检出率进行对比分析。 2 结果 150例标本经血液细胞分析仪检测，白细胞分类结果，出现疑有异常白细胞警告报警有20例，报警率（阳性率）13.3%。目视显微镜复片

8、，发现有不同程度异常白细胞12例，阳性率8.0%。20例阳性标本，目视显微镜复片，其中有8例可见有不同程度异常白细胞（有幼稚细胞1例，杆状核粒细胞增多1例，嗜酸粒细胞增多2例，嗜碱粒细胞增多1例，异常淋巴细胞增多3例），占阳性标本的40%。130例阴性标本（无警告），目视显微镜复片，有2例发现有不同程度的异常白细胞，占阴性标本的1.5%。其中1例为已确诊急性淋巴白血病在化疗中，血液中白细胞总数偏低，血细胞分析仪分类淋巴细胞百分比增高，仪器无异常白细胞警告，显微镜复片，幼稚细胞8%。另1例为发热待查儿童，血液中白细胞总数正常，血细胞分析仪三分类百分比基本正常，没有出现异常白细胞警告，目视显微镜复

9、片，异常淋巴细胞达10%。3 讨论 通过以上结果分析，可以看出门诊患者，全血做血液细胞分析，白细胞分类结果，异常白细胞警告较高，假阴性率虽然较低，但也应该引起检验人员的重视。 根据几年来的工作体会认为，出现上述问题的主要原因，一是血液细胞分析仪对白细胞分类不同于常规的涂片染色分类1，常规分类除细胞大小外，还要根据细胞染色反应，核的形态及染色质的着色情况，胞质的着色及颗粒才能确定为某种细胞。三分类血细胞分析仪法，是根据白细胞直方图分类法，只能反映经溶血剂处理后某种体积的颗粒，即某种大小细胞的多少，而不能反映某种特殊细胞的变化，对少见的正常白细胞和异常细胞不能准确识别，不难看出电阻法白细胞分类只不

10、过是较粗的筛选方法1。另外，手指采血，由于采血过程中因操作缓慢、穿刺不顺、组织液混入、混匀不及时等，均会引起白细胞形态变化。对血细胞分析仪分类会产生明显影响，而出现异常白细胞假报警，为此，根据HYPERLINK /文献介绍和大量实验证明2，使用末梢血在血细胞分析仪上进行检测，影响因素较多，有些参数不能得出准确结果，其重复性及稳定性都不及静脉血标本，应提倡静脉血。 血细胞的检测结果，尤其是血小板（PLT）的结果，直接反映试剂的质量。原则上强调使用与仪器检测原理相匹配的试剂3。溶血剂是血液细胞分析仪试剂中的主要试剂，能将红细胞溶解，并能使白细胞的体积发生HYPERLINK /规律性变化。实际工作中

11、发现，若溶血不完全，由于红细胞碎片冲洗不彻底将引起白细胞计数（WBC）假性增高。此外，稀释液的渗透压、离子强度等亦可影响检测结果。特别注意的是，试剂应避免污染，否则，杂质微粒会使本底增高，导致最后计数结果偏高，影响白细胞分类结果的准确性。 抗凝剂的种类对检测结果影响较大，国际化学标准化委员会（ICSH）推荐用EDTA二钾抗凝。另外，血液和抗凝剂比例也会影响检测质量。血液比例过高时，由于抗凝剂相对不足，血浆中出现微血块的可能性增加。微凝块可能堵塞仪器影响检测结果，从而无法得出正确的结果4。 在正常情况下，血液细胞分析仪对血细胞体积的识别有明显的体积界限：WBC35-450fl。根据Coulter

12、原理，仪器只识别颗粒大小而不能识别颗粒的性质。当其体积异常高于或低于仪器设定的阈值时，往往会造成误判。除以上原因外，标本采取后放置时间、温度及上机前标本混匀、振荡时间、力度等均可影响血细胞分析仪对白细胞分类的准确识别，如采血后标本放置时间小于5min，室温低于10，标本混匀不当等，可使白细胞三分类不全及异常白细胞假报警率增高5。 综上所述，目视显微镜法分类，应是目前一种重要的检测手段。血液细胞分析仪法分类，是当今HYPERLINK /gongxue/科学技术HYPERLINK /fazhan/发展的趋势，其优点是速度快，省时少力，重复性及稳定性较高，但易受很多因素的影响。为此，国内专家多次提出

13、2，在各种参数及图形均正常的情况下，结合临床表现可以做筛选手段。要坚决反对当前有些单位使用血细胞分析仪后，就一律不再做镜下复检和分类的错误倾向。最好每次标本都先涂一张血片，以备必要时复检。 【HYPERLINK /参考文献】 1 丛玉隆，王淑娟.今日临床检验学.北京：HYPERLINK /china/中国科学技术出版社，1997，60-61. 2 全国血液学自动化分析质量控制研讨会纪要.中华医学检验杂志，1995，18（2）：125. 3 朱芸.不同血液分析仪试剂使用的比较.河北医药，2000，22（11）：854-855. 4 刘健.抗凝剂对血小板及其参数检测结果的影响分析.国际医药卫生导报

14、，2004，10（8）：64-65. 5 Robert V. Pierre:Peripheral blood film review.Clin Lab Med，2002，22：279-297.转贴于 中国论文下载中心 HYPERLINK HYPERLINK /view/9572.htm白细胞分类是在进行血液显微镜检察时，将白细胞分类计数的一种医学检测法。血液中的白细胞共有五种，即中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。它们各有其生理功能。长期接触铅、汞、苯、放射线等可引起白细胞总数及白细胞分类的改变。在环境医学研究中白细胞分类是一项重要的指标。 专业知识介绍 1单位：百分比

15、（常用1.0表示100%） 2正常值： （1）嗜中性粒细胞（N）： 成人：0.40到0.75 儿童：0.30到0.65 （2）嗜酸性粒细胞（E）：0.005到0.05 （3）嗜碱性粒细胞（B）：0到0.01 （4）淋巴细胞（L）： 成人：0.20到0.45 儿童：0.30到0.56 （5）单核细胞（M）： 成人：0.02到0.06 儿童：0.02到0.08血细胞分析仪的普及使得目前血细胞分析水平大大提高，它较传统的显微镜计数分类更加准确、快捷、方便，但目前较为普及的电阻抗法仪器仍存在某些局限性，在实际工作中常常会受到一些异常因素的干扰，我们总结了日常工作中常见的异常因素干扰现象及其处理对策。1

16、、有核红细胞对白细胞计数及分类的影响典型常用的血细胞分析仪不能完全区分有核红细胞，当外周血中出现有核红细胞，白细胞计数会出现严重干扰，表现为白细胞总数假性增高，具体会反映在白细胞直方图上，而在分类淋巴细胞比例会大大增高。处理有核红细胞干扰最经典的检验地带网方法是涂片染色显微镜计数100个有核细胞中的有核红细胞数，乘以白细胞总数(X109L)，即为有核红细胞数(x109L)，白细胞总数减有核红细胞数即为校正后实际白细胞总数(x109L)，再用显微镜分类排除机器分类干扰，但其计数的准确性仍然受到技术人员的主观因素影响较大，美国贝克曼、亚培和日本东亚公司已陆续推出了一种利用荧光染色与特殊溶血技术相结

17、合的方法自动计数NRBC的机器，更能有效排除NRBC对白细胞计数及分类的干扰。2、红细胞冷凝集对红细胞计数及相关参数的影响由于个体差异，某些人红细胞膜存在一种冷抗体(冷凝素IgM)在300C以下反应活跃，260C即可发生冷凝集，我们在13常工作中通常室温在100C左右易出现红细胞冷凝集现象。血液冷凝集对检测红细胞数目及其各项参数造成很大影响，当红细胞凝集时，就导致多个红细胞堆积而一并通过计数小孔，而引致 RBC、HCT的计数减少，直接导致MCV、MCHC、RDW等参数的升高，由于血细胞分析仪在检测血细胞时分两个通道进行，血色素、白细胞是经溶解红细胞后从另一通道检测，血小板与红细胞同一通道，但血

18、小板的体积比红细胞小得多，因此，血液冷凝集时对它们的检测结果影响不大。较好的处理方法是血液标本与检测试剂双重加温，15分钟后检测可消除冷凝集影响。3、肝病病人，红细胞抗溶血对血红蛋白(HB)、白细胞计数及分类的影响目前，国内使用的绝大多数自动血细胞分析仪是容量阻抗法，一个血细胞流经微孔时，电极问的阻抗升高，一个信号传到电路上，阻抗大小与细胞大小一致，每个大小细胞的信号以检验地带网直方图形式被储存分析。白细胞(WBC)计数和分类(DC)采用特殊溶血素将红细胞(RBC)溶解并使白细胞膜紧裹在胞核周围，根据淋巴细胞群(LY)3590fl，单核细胞群(MC)90160 fl，粒细胞(GR)160450

19、 fl大小不同进行三群细胞分类计数。当红细胞溶解不全时，WBC和DC血红蛋白及相关参数减低RBC被误认为LY，WBC、LY及LY绝对值增高，GR假性降低，GR绝对值无影响。其处理对策是参照全国临床检验操作规程进行血红蛋白测定和RBC、WBC计数和分类。4、EDTA-2K致血小板依赖性凝集使血小板(PLT)假性减低以及对相关参数的影响因EDTA2K致血小板依赖性凝聚而引起机检血小板计数结果假性偏低，血小板平均体积(mpv)明显增高，血小板压积(PCT)无明显改变，血小板分布宽度轻度右移，分布左侧起点升高5。血小板计数假性减低可有多种原因，包括采血不畅、未及时混匀、病人本身有血小板抗体存在等。当P

20、LT不明原因减低，并有血小板直方图异常提示，不仅要及时进行手工计数，还要重视涂片观察是否有PLT凝集。5、小红细胞致干扰血小板(PLT)计数血小板计数是血液检查的一个主要指标，由于体积小，易黏附的特性，在电阻法血细胞分析仪上与一些非血小板颗粒如小红细胞及碎片等颗粒难以区别，血小板与红细胞在同一通道计数，当MCV145，红细胞和血小板直方图明显异常，即红细胞直方图出现两个峰，血小板直方图尾部明显抬高，证明是小红细胞干扰，其处理对策是手工计数血小板并涂片染色观察红细胞形态。摘要：血常规检验是指对血液中红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白及相关数据的计数检测分析。血常规检验不仅是诊断各种血液病的主要依据

21、，而且对其他系统疾病的诊断和鉴别也提供了许多重要信息1。关键词：血常规 检验 因素 血常规检验是指对血液中红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白及相关数据的计数检测分析。血常规检验不仅是诊断各种血液病的主要依据，而且对其他系统疾病的诊断和鉴别也提供了许多重要信息1。笔者翻阅国内血常规检验的相关报道和根据经验分析,影响血常规检验的因素主要可分为人为、生理、仪器、试剂等因素。现总结如下，以供临床检验参考。 1 人为因素 1.1 标本的采集 血常规检验标本常用静脉采血法和末梢毛细血管采血法。根据各类文献报道24，静脉血采取的血样是最可靠的标本，手指末梢血的准确性和可重复性较差，因此血常规检验宜采用静脉血。

22、采集合格的静脉血标本应注意：(1)采血前检查注射器和针头, 避免因连接不紧而使空气进入产生泡沫致溶血;(2)采集标本最好采用封闭式真空采血管;(3)所选采血部位的皮肤应完整，无溃烂、烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症等; (4)采血时应定位准确，严禁针尖在静脉中反复穿刺;(5)采血完成将血从注射器中推入试管时应把针头拔掉;(6)采血时体位不同对血常规检验结果也有影响，直立位与卧位相比易导致血红蛋白、白细胞、红细胞、血细胞压积等项目测定值偏高;(7)采集末梢血标本时应严格按照操作规程进行5，第1滴血擦去不用，采用第2滴血;(8)血液检查的标本量与抗凝剂比例要合适。血液比例过高时，容易出现微凝块，可能阻

23、塞血细胞仪;血液比例过低，抗凝剂相对过剩，会引起血细胞形态和体积的一些改变，导致结果不准确6，7。 1.2 标本的保存、运送及测定时间 患者标本应有明确标记，与医师申请单内容相符;标本运送要专人专送;标本采集后应立即送检。对不能及时送检或测定的标本，必须采取保存措施，用EDTA抗凝静脉血标本在标本采集后的5min内或30min后8h内(室温)检测，可以得到最佳的检测结果。EDTA抗凝的末梢血至少应在15min后测定；预稀释标本一般需在标本制备后10min内检验，如稀释液中添加细胞稳定剂，其存放时间也不可超过4h6，7。 2 生理因素 患者的活动情况、精神状态、年龄、性别、种族、样本采集时间、吸

24、烟、服用药物、季节等因素都会影响检测结果。 因此采血时应询问是否服用过明显干扰检验的药物，血液采集前应避免跑步、骑自行车等剧烈运动，冬季应将患者暖和后再采血。不同生理状态下血细胞各参数也会有所不同，比如进食、喝水后，血液会有生理性稀释作用，RBC和Hb检测结果会有所下降，剧烈运动后血液浓缩，此时迅速采集血液标本可使RBC和Hb检测结果增加约10%。因此对于动态观察指标的非急诊患者最好固定某一时间检查，以尽量减少不同生理状态对检测结果的影响7。 3 仪器因素 全自动血液细胞分析仪因其检验数据精确、分析数据时间短，普遍用于血常规的检测。血液分析仪分类法有三分类和五分类两种，速度快、准确性高、易于标

25、准化、能提示异常结果，是白细胞分类和筛检的首选方法，但不能完全代替显微镜检查法对异常白细胞进行鉴别和分类。基于血细胞分析仪的基本原理，在血细胞分析仪的设计应用中，稀释倍数和计数容量是最重要的设计指标之一。稀释倍数过低，会形成细胞排队通过传感器的重合缺损;稀释倍数过大，则会造成一定测量容量内血细胞数量过少，这都会影响血液细胞检验的测量精度8。 4 试剂因素 用全自动血液分析仪进行血常规检验时，最好选用原装配套试剂，检查校准用的标准物是否在有效期内，外观有无变化，然后连续测定标准物11次，第1次数据不用,从第2次到11次计算均值、标准差、绝对误差和相对误差，检查测定结果是否达到标准要求。如果条件不

26、允许，要选择和溶血素配套的稀释液。溶血素直接影响血细胞的检验，如质量不好，可造成溶血不完全，造成白细胞数假性增高，血红蛋白偏低。另外，也可使白细胞变形、直方图异常、白细胞分类计数不准确，甚至不能进行分类计数6。 影响血常规检验结果的因素很多，要想取得准确的检验结果，就要在检验的每一步骤中按规程认真操作，把人为因素引起的误差降到最低，消灭过失误差，尽量减少偶然误差和系统误差，对有疑问的要追寻原因，及时纠正潜在引起检验结果偏差的影响，提高检验质量。参 考 文 献1马双双,王红艳,杨俊.血常规检验的质量控制与注意事项.重庆医学，2006,35(18):1694-1695.2丛玉隆.临床实验室分析前质

27、量管理及对策.中华检验医学杂志,2004,27(8):483-487.3陈兴章,柴富萍.白细胞与临床.北京:人民军医出版社,1995，102.4叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程，第2版.南京:东南大学出版社,1997，300-350.5马洁,陈丹霞,黎永新.急诊血细胞检测分析前的质量控制.中华检验医学杂志,2004,27(8):535-536.6马双双,王红艳,杨俊.提高血常规检验质量的方法和策略.临床误诊误治,2006,19(11):79-80.7赵晋芳.浅谈血常规检验的影响因素.实用医技杂志，2008, 15(23):3077-3078.8张云霞.血液细胞分析仪检验中的点滴体会.实用医

28、技杂志,2007,14(1):46.血常规检验是指对血液中红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白及相关数据的计数检测分析。血常规检验不仅是诊断各种血液病的主要依据，而且对其他系统疾病的诊断和鉴别也提供许多重要信息，同时也是临床医学检验中最常用、最重要的基本内容之一。血常规检验的最原始的手段是通过显微镜人工镜检，随着基础医学的发展，高科学技术的应用，血液细胞分析仪已成为取代镜检进行血常规分析的重要手段。无论是镜检、还是使用血液分析仪，要获得血常规检验的稳定可靠、准确的数据，防止临床诊疗人出错误的判断，实验室检验要充分考虑影响血常规检验中的多种影响因素，并严格加以控制。我院近些年根据对临床上的病例进行分

29、析，得到相应的结论，现报告如下： 1 材料和方法 1.1材料：选取我院临床病例136例，其中男性78例，女性58例。年龄270岁，平均年龄36岁。 1.2方法：使用真空采血管（含EDTAK2）采集患者的血常规标本，常规消毒皮肤，找准血管，刺入针头，见回血后，另一端插入已备好的采血管，采血完毕，拔出针头，采用大面积按压法按压皮肤针眼和血管针眼。将血标本与抗凝剂充分混匀即可。 1.3影响因素 1.3.1标本的采集：血常规检验标本常用静脉采血法和末梢毛细血管采血法，静脉血采取的血样是最可靠的标本，手指末梢血的准确性和可重复性较差，且白细胞计数明显偏高，血小板计数偏低，因此血常规检验宜采用静脉血。静脉

30、采血不能在正在输液的手的附近或同侧肘部静脉采血，以免输液影响血液分析结果。毛细血管采血时，不可用力挤压，以免混入组织液影响结果；也不能用小管口频繁地在针刺伤口刮取血液，这样既增加病人的痛感，又容易混入皮肤表面的杂质，堵塞仪器。应将血珠稍倾于小管口，自动流入小管中，边采血边指弹混匀。 1.3.2标本的保存、运送及测定时间：患者标本应有明确标记，与医师申请单内容相符;标本运送要专人专送;标本采集后应立即送检，尽快检测，尽量减少运送和保存的时间。因为标本保存时，血细胞的代谢活动、蒸发和升华作用以及化学反应、微生物降解等因素均会直接影响标本的质量，因而采血后到检验间隔的时间越短，检验结果越可靠。一个血常规，从采血、检测、审核，到报告单的发出，最好由同一个人全程完成，以免出现差错。 1.3.3患者自身因素：患者的活动情况、精神状态、年龄、性别、种族、样本采集时间、吸烟、服用药物、季节等因素都会影响检