蒜氨酸+蒜酶共同作用对环磷酰胺处理小鼠免疫功能的调节作用

1、蒜氨酸+蒜酶共同作用对环磷酰胺处理小鼠免疫功能的调节作用陈锋，顾丹今，陈坚，许晏【摘要】目的观察蒜氨酸+蒜酶对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的调节作用。方法环磷酰胺造模法制作免疫抑制小鼠模型，给药10d，测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率、血清溶血素、脾淋巴细胞增殖功能及血清IL-2含量，观察蒜氨酸+蒜酶对小鼠免疫功能的影响。结果与模型组比拟，蒜氨酸+蒜酶在中、高剂量可明显进步环磷酰胺所致免疫低下小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬率，也可促进血清溶血素形成和脾淋巴细胞的增殖，高剂量可进步血清IL-2含量。结论蒜氨酸+蒜酶对环磷酰胺处理小鼠免疫功能低下有免疫保护作用。【关键词】蒜氨酸；蒜酶；环磷酰胺；免疫功能Ab

2、strat：bjetiveTbservetheeffetfalliin+alliinasefrgarliniunlgialfuntininiunsuppressivedelieausedbyylphsphaide.ethdsTheISdelinNIHieereinduedbyylphsphaide:ieereadinisteredithalliin+alliinasefr10days.Thephagytsisabilityfarphare,seruhelysinnentratin,thespleenlyphellstransfratinandthelevelfIL-2inseruereeasu

3、red.ResultsTheresultsshedthatalliin+alliinaseattheiddleandhighdseuldauseasignifiantinreasefthephagytirate,theprliferatinfspleenyteesandtheseruhelysin,alliin+alliinaseathighdseuldinreasethelevelfIL-2.nlusinAlliin+alliinaseanstiulatetheiunlgifuntinfISieKeyrds：Alliin;Alliinase;ylphsphaide;Iunlgialfunti

4、n大蒜是百合科葱属多年生草本植物，作为药食两用历史悠久。现代医学证明大蒜主要具有抗感染、抗肿瘤和防治心脑血管疾病等3大成效。目前公认大蒜的生物活性成分主要是蒜酶alliinase)催化蒜氨酸产生的大蒜辣素(alliin)、阿霍烯(ajene)等系列含硫有机化合物1。大蒜的抗肿瘤作用与其免疫调节作用有关。大蒜不同制剂对机体免疫功能的影响已有广泛报道。本实验研究了蒜氨酸+蒜酶对环磷酰胺所致免疫受抑小鼠免疫功能的调节作用。1材料1.1动物NIH小鼠，(202)g，雌雄兼用，购自新疆医科大学动物实验中心。1.2药物蒜氨酸及蒜酶单体由新疆医科大学药学院采用新疆地产大蒜提取并纯化。蒜氨酸与蒜酶以21比例经

5、双蒸水混合,35水浴反响30in，形成纯品大蒜辣素(称做蒜氨酸+蒜酶)，根据预实验结果确定(125+63)，(250+125)，(500+250)gkg-1等低、中、高3个剂量。1.3试剂环磷酰胺(P)购自上海华联制药;绵羊红细胞悬液(SRB):由新疆医科大学动物实验中心提供。Alsevers血球保存液:按常规配制。都氏试剂:NaH31.0g，KN0.05g，高铁氰化钾0.2g，加水至1L。4保存。豚鼠补体:多个豚鼠心脏采血，别离血清，混合。按血清:绵羊红细胞=201的比例参加压积SRB中，4放置20in。2000r/in，离心10in，汲取上清液，生理盐水稀释8倍。2方法2.1分组随机将50

6、只NIH小鼠分成蒜氨酸+蒜酶(低，中，高剂量)剂量组及正常对照组和模型组，共5组，每组10只。正常对照组每日用生理盐水(20gkg-1)灌胃，共10d；模型组每日用生理盐水(20gkg-1)灌胃，共10d，并在第7天开场同时腹腔注射环磷酰胺(17.5gkg-1)，共4d；各给药组分别用不同剂量的蒜氨酸+蒜酶给相应各组小鼠灌胃，持续10d，并在第7天开场同时腹腔注射环磷酰胺(17.5gkg-1)，共计4d。第11天测定各项免疫指标。2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定2小鼠腹腔注射1%鸡红细胞，1l/只；30in后，再腹腔注射生理盐水1l/只，断颈处死小鼠，汲取腹腔液、涂片，11丙酮甲醇固定5i

7、n，Giesa染色，油镜观察。每份标本油镜下观察200个巨噬细胞，计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分率。吞噬率%=(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞)100%。2.3对小鼠淋巴细胞增殖的影响应用TT法3，4。处死小鼠用75%酒精浸泡5in，无菌操作取脾,置hanks液中于200目网中研磨,用完全1640培养液配成5106/l细胞悬液。每份标本设3个平行孔。每孔加100l细胞悬液和100lnA/LPS，并设细胞对照。37,5%2孵育68h，加TT(5g/l)20l/孔。继续培养3h,离心,1500r/in，5in，弃上清，每孔加100l二甲基亚砜(DS)振荡15in，于酶标仪570n处测D

8、值。2.4小鼠血清溶血素的测定5给药第6天，小鼠腹腔注射35(VV)SRB。第11天，取小鼠眼球血，离心(2000r/in离心，10in),获得待测血清。将血清做1300稀释,将此血清样品1l与10%SRB0.5l，18补体1l混和。37水浴30in，冰浴终止反响,2000r/in，10in，取上清液ll加都氏试剂3l，于酶标仪570n处测A值。计算小鼠的半数溶血值(H50)。样品H50=(样品的吸收度值/SRB半数溶血时的吸收度值)稀释倍数2.5小鼠血清IL-2测定取小鼠眼球血，离心(2000r/in，10in),别离血清待测。采用ELISA试剂盒检测：双抗体夹心法。2.6统计学分析实验数据

9、以s表示。利用PE211软件进展单因素多组方差分析和Q检验。3结果3.1对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响表1结果显示模型组吞噬百分率明显降低,与正常对照组比拟有显著差异(P0.05),说明免疫受抑小鼠模型成立。中、高剂量的蒜氨酸+蒜酶组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率明显进步，与模型组相比有显著差异(P0.05)，与蒜氨酸+蒜酶低剂量组相比也有显著差异(P0.05)。表1蒜氨酸+蒜酶对P处理小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响略3.2对小鼠淋巴细胞增殖的影响表2结果显示，模型组淋巴细胞增殖程度明显降低，与正常对照组比拟差异有显著意义(P0.05)，说明免疫受抑小鼠模型成立。中、高剂量的蒜氨酸+蒜酶可明显促进

10、淋巴细胞增殖，与模型组相比有显著差异(P0.05)。表2蒜氨酸+蒜酶对P处理小鼠脾淋巴细胞增殖的影响略3.3对小鼠血清溶血素形成的影响表3结果显示，模型组溶血素明显降低，与正常对照组比拟差异有显著意义(P0.05)，说明免疫受抑小鼠模型成立。中、高剂量蒜氨酸+蒜酶组溶血素的形成显著增加，与模型组相比有显著差异(P0.05)。表3蒜氨酸+蒜酶对P处理小鼠血清溶血素和IL-2的影响略3.4小鼠血清IL-2测定表3结果说明，模型组IL-2含量明显降低，与正常对照组比拟有显著意义P0.05，说明免疫受抑小鼠模型建立。高剂量蒜氨酸+蒜酶可进步血清IL-2程度，与模型组相比有显著差异P0.05。4讨论大蒜

11、及其含硫化合物的抗肿瘤活性已为大量实验所证实，其抗肿瘤机理复杂，大蒜对免疫系统的调节作用也是其抗肿瘤重要机理之一。有文献报道大蒜提取物可进步机体免疫功能68。Truhlinski等9报道大蒜提取物、1,2,4-triasle衍生物和紫锥花汁均可增强母火鸡的非特异免疫功能，可进步吞噬细胞百分率、NBT阳性颗粒和溶酶体含量；其中大蒜提取物的增强作用最强。本实验检测了蒜氨酸+蒜酶对免疫受抑小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率的影响，结果说明中、高剂量的蒜氨酸+蒜酶可明显进步免疫受抑小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率，此结果与Truhlinski的结果是一致的，说明蒜氨酸+蒜酶可进步巨噬细胞的吞噬功能，增强机体的非特异性免

12、疫力。当肿瘤发生后，机体可通过免疫效应机制发挥抗肿瘤作用。在体内宿主对肿瘤的免疫应答效应是细胞免疫和体液免疫对肿瘤作用的综合结果。一般认为细胞免疫是抗肿瘤免疫的主力。本实验结果说明中、高剂量的蒜氨酸+蒜酶可显著促进免疫受抑小鼠脾脏淋巴细胞转化、进步H50程度，提示蒜氨酸+蒜酶对免疫受抑小鼠的细胞免疫、体液免疫功能均有增强作用。在特异性免疫应答中，细胞因子的辅助是必不可少的。IL-2是在机体复杂的免疫网络中起调节作用的重要细胞因子。主要由的TH细胞合成和分泌，可促进多种T细胞亚类的增殖和分化，促进多种细胞因子或其受体的表达。实验结果说明，高剂量的蒜氨酸+蒜酶可进步血清IL-2，这与文献报道一致1

13、0。本实验说明蒜氨酸+蒜酶对环磷酰胺所致免疫功能低下有免疫保护作用，对其非特异免疫、特异性免疫都有上调作用。【参考文献】1anabeT,HasuiA,Sugiyaa,etal.AlliinaseS-alk(en)yl-L-ystEinesulfxidelyasefrAlliutubersu(hinesehive)-purifiatin,lalizatin,DNAlningandheterlgusfuntinalexpressinJ.EurJBihe,1998,257(1):21.2陈奇.中药药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,1993：315.3徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学，第2版.

14、北京:人民卫生出版社,1991：1221.4郑永唐,贲昆龙.测定细胞存活和增殖的TT方法的建立J.免疫学杂志,1992,8(4):266.5沈关心,周汝麟.现代免疫学实验技术，第2版.武汉:湖北科学技术出版社,2002:396.6li,Savi.GarliextratsstiulateprliferatinfratlyphyteinvitrinreasingIL-2andIL-4prdutin.IunpharalJ.Iunpharal-Iuntxil,2000,22(1):163.7rika,N.,Sze,L.L.,rtn,D.L.etal.Prteinfratinfragedgarliextratenhanesyttxiityandprliferatinfhuanlyphytesediatedbyinterleukin-2andnanavalinAJ.anerIunlIunther.1993,37(5)：316.8Patya,ZahalkaA,VanihkinA,etal.Alliinstiulateslyphytesandeliitsanantitureffet:apssiblerlefp21rasJ.IntIunl,2022,16(2):275.9TruhlinskiJ,Krauze,endrska-Pinksz,etal.Influen