反相高效液相色谱法测定白头翁药材中白头翁皂苷B4的含量

1、反相高效液相色谱法测定白头翁药材中白头翁皂苷B4的含量【摘要】目的建立白头翁药材中白头翁皂苷B4的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱RP-HPL法，色谱柱：Krasil18(2504.6，5)，以乙腈-0.1%磷酸2872为流动相，流速：1.0lin-1，检测波长：205n，柱温：30。结果白头翁皂苷B4在29.4147gL-1内呈良好线性关系，相关系数为0.9999，平均回收率为99.7%，RSD为1.14%。结论该方法简便、准确、重复性好，可用于白头翁药材的质量控制。【关键词】反相高效液相色谱法；白头翁；白头翁皂苷B4白头翁为毛茛科植物白头翁PulsatillahinensisBge.

2、Regel的枯燥根，味苦，性寒，归胃、大肠经。白头翁始载于?本经?，具有清热解毒，凉血止痢之成效，可用于治疗热毒血痢，阴痒带下，瘰疬，痈肿，秃疮等1。其主要有效成分为皂苷类成分，白头翁皂苷B4为其主要有效成分之一，其含量也较高。故本实验采用反相高效液相色谱法对其含量进展测定，对白头翁药材或制剂的质量标准研究具有重要意义。实验结果说明，该方法简便可靠，重现性好，为白头翁药材或制剂的质量控制提供了参考根据。1仪器与试剂美国aters高效液相色谱仪515泵，2487紫外检测器，hrStatin色谱工作站，KQ3200型超声仪昆山市超声仪器。白头翁皂苷B4对照品中国药品生物制品检定所，白头翁药材由三九

3、药业提供，甲醇为色谱纯天津市康科德科技，水为自制重蒸水。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为Krasil18(2504.6，5)，以乙腈-0.1%磷酸2872为流动相，流速为1.0lin-1，检测波长为205n，柱温为30，进样量：10l。2.2溶液的制备2.2.1对照品储藏液的制备精细称取白头翁皂苷B4对照品1.47g，加甲醇定容至10l，制成每1l含白头翁皂苷B4147g的溶液，作为对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备白头翁药材粉碎后，精细称取药材粉末过3号筛0.12g，置具塞锥形瓶中，精细参加甲醇10l，超声30in，放冷，过滤，滤液置50l量瓶中，用少量流动相洗涤容器及残渣，洗液并入同

4、一量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过0.2滤膜即得。2.3系统适用性试验取供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，白头翁皂苷B4与相邻色谱峰的别离度大于1.5，理论塔板数不低于3000图12。2.4线性关系考察取对照品储藏液，按照不同比例稀释，使白头翁皂苷B4质量浓度分别为29.4，58.8，88.2，117.6，147gL-1。分别取上述溶液各10l进样测定，记录色谱图。以对照品质量浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进展回归计算，回归方程为：Y=2.8844X-2.04(r=0.9999，n=5)。结果说明，白头翁皂苷B4质量浓度在29.4147gL-1内呈良好线性关系。结果见

5、表1。表1标准曲线结果略转贴于论文联盟.ll.2.5仪器精细度实验取同一对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，计算白头翁皂苷B4色谱峰面积的RSD为0.32%n=5。结果见表2。表2精细度结果略2.6方法重复性实验取同一批号的样品，按“2.2.2条方法平行制备5份样品按上述色谱条件进样分析，计算白头翁皂苷B4含量的RSD为1.37%n=5。见表3。表3重复性结果略2.7稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12h注入液相色谱仪，依法测定。计算白头翁皂苷B4色谱峰面积的RSD为1.47%n=6。结果见表4。结果说明，样品溶液在12h内稳定。表4稳定性实验结果略2.8回收率实验

6、精细称取含量的白头翁药材粉末过3号筛6份，分别精细参加高、中、低质量浓度的对照品相当于药材含量的80%，100%，120%，每一质量浓度2份，按上述方法测定分析，白头翁皂苷B4平均回收率分别为99.7%n=6结果见表5。表5回收率实验结果略2.9含量测定取3批供试品，按“2.2.2条操作，在上述条件下进样分析，记录色谱峰面积，采用外标一点法计算白头翁皂苷B4的质量分数为4.9%。3讨论3.1色谱条件的选择检测波长的选择参照?中华人民共和国药典?2022版增订2局部的白头翁项下，药典选择测定波长为201n，流动相选用甲醇和水，我们进展了样品的全波长扫描，发如今200205n波长范围内，样品均呈现

7、较强吸收，以甲醇和水为流动相基线极不平稳，参考相关文献3，4，HPL法测定白头翁含量所用的流动相是比例不同的甲醇-0.1%磷酸系统和乙腈-0.1%磷酸等系统。本文经过屡次实验探索，发现由乙腈-0.1%磷酸系统在205n波长下基线平稳，分别选用不同比例的该流动相系统：乙腈-0.1%磷酸3070；乙腈-0.1%磷酸2971；乙腈-0.1%磷酸2575，发现乙腈-0.1%磷酸比例为2872可以使白头翁皂苷B4得到较好别离，且重复性好。3.2样品提取条件的选择实验过程中，我们分别采用回流和超声两种方法进展提取，超声提取效果明显好于回流提取法；分别采用甲醇，70%乙醇，95%乙醇作溶剂进展提取，结果显示甲醇提取效果更好。该实验为白头翁药材中白头翁皂苷B4的检测及含量测定提供了参考方法，为白头翁药材的质量控制标准化和标准化提供了根据。【参考文献】1唐德才.中药学.上海：上海中医药大学出版社，2022:111.2国家药典委员会.中华人民共和国药典增订S.北京：化学工业出版社，2022:68.3