太子参多糖含量分析及其动态研究

1、太子参多糖含量分析及其动态研究【摘要】目的分析不同采收期、贮藏期、生长条件及取材部位的太子参中多糖的含量，讨论太子参多糖的动态积累及其变化规律。方法用HPL-ELSD法测定多糖的含量。以葡萄糖为对照品，测定太子参多糖中葡萄糖含量，求出多糖换算因子，将样品液中测得的葡萄糖量换算出多糖含量。结果不同生长期太子参中多糖的动态积累具有一定规律;贮藏时间对太子参中多糖含量具有一定影响;太子参野生品与栽培品、主根与参尾中多糖含量具有一定差异。结论为太子参药材的采收、加工与贮藏及其质量评价提供了根据。【关键词】太子参;多糖;含量分析;动态变化Abstrat：bjetiveTanalyzethententfp

2、lysaharideinRadixPseudstellariaefrdifferentharvesttie,stragetie,grthnditinanddraedeterial,anddeterinethedynaihangefplysaharidententinRadixPseudstellariae.ethdsPlysaharideastestedbyHPL-ELSD.ithgluseasstandard,thepurifiedplysaharideashydrlyzedtgluse,andtheplysaharidenversinfatrasululated.Thrughthenver

3、satinfatr,thententfgluseasnvertedtthententfplysaharideindifferentsaples.ResultsTheauulatinfplysaharideshedaregularpatternindifferentgrthtie;StragetiehadeffetnntentfplysaharideinRadixPseudstellariae,andthententfplysaharideasdifferentinildingandultivatedsaple,inthebdiesandrtsfRadixPseudstellariae.nlus

4、inThisexperientprvidestheryfundatinfrsientifiharvest,pressing,strageandqualityassessentfPseudstellariaheterphylla.Keyrds：RadixPseudstellariae;Plysaharide;ntentanalysis;Dynaihange太子参为?中国药典?收载的常用中药，具益气健脾、生津润肺之成效，临床用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱、气阴缺乏、自汗口渴、肺燥干咳等症，尤其是治疗小儿脾虚而食欲不佳的要药。药理试验说明，太子参多糖具有增强机体免疫功能的作用1，2。太子参多糖为中

5、性葡聚糖3，有关太子参多糖含量测定一般多采用硫酸-苯酚比色法46，还有采用SE-HPL法测定3，本文在建立多糖HPL-ELSD测定方法，分析不同产地太子参多糖含量7的根底上,对不同采收时间、不同贮藏时间、不同取材部位以及野生与栽培的太子参样品进展了分析，为太子参药材的合理采收、科学加工与贮藏及其质量评价提供根据。1仪器与试药岛津L-10AD高效液相色谱仪，Allfeh500型蒸发光散射检测器，H-2000色谱数据工作站;ShiadzuAY220电子天平;KQ-500B型超声波清洗器(昆山市超声仪器)。葡萄糖对照品(Siga公司)，甲醇(江苏汉邦科技，色谱纯，批号2022051802)，双重蒸馏

6、水，硫酸(批号061030558)等试剂均为化学纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为汉邦Krasil18分析柱(2504.6，5);流动相为H3H-H2(595);流速0.8l/in;柱温30;检测器漂移管温度115;分析时间5in;进样量20l。2.2标准曲线的制备精细称取葡萄糖对照品20g，置10l容量瓶中，加双蒸水溶解并稀释至刻度，为标准贮备液。精细量取标准贮备液5l置10l容量瓶中，得到1000g/l的标准溶液，然后依次稀释一倍得到浓度为500，250，125g/l，62.5g/l的标准系列溶液。分别汲取标准系列溶液各20l,进样，测定峰面积，以葡萄糖浓度的对数(X)为横坐标，葡萄糖

7、峰面积的对数(Y)为纵坐标，线性回归，得到线性方程是：Y=1.1883X+3.391，r=0.9995。结果见表1。表1葡萄糖线性关系2.3多糖的提取与精制称取已枯燥的太子参(S8)粗粉(60目)200g,用工业乙醇回流提取6h，回收乙醇。残渣挥干后,用双蒸水回流提取3次，提取液减压浓缩后，加95%乙醇使含醇量达80%,静置过夜，滤取白色沉淀，用双蒸水溶解，用Sevag法去蛋白质，上清液加90%乙醇使含醇量达80%，静置过夜，滤取沉淀，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤屡次，真空枯燥，得太子参多糖。2.4多糖换算因子的测定2.4.1多糖水解液的制备精细称取多糖10g，于10l具塞刻度试管中，加1l

8、/lH2S42l，封管100恒温水解4h，冷却后用饱和Ba(H)2中和至中性，离心别离(5000r/in,10in)除去BaS4沉淀，取上清液至10l容量瓶中，定容，经0.45微孔滤膜，备用。2.4.2多糖换算因子的测定取多糖水解液20l，进样，测定峰面积，由线性方程求出多糖中葡萄糖含量，按下式f=/(D)为多糖的重量(g)，为多糖中葡萄糖含量(g)，D为多糖的稀释因数计算换算因子，测得f=1.3025。2.5样品溶液的制备精细称取太子参样品1.0g，置100l圆底烧瓶中,加80%乙醇80l，水浴90回流提取3h,趁热过滤，残渣用80%热乙醇洗涤(10l3)。残渣连同滤纸置圆底烧瓶中,加超纯水

9、80l,水浴提取2h,趁热过滤，残渣及烧瓶用热超纯水洗涤(5l4),洗液并入滤液，移入100l容量瓶中，定容。精细汲取样品液5l，于10l具塞刻度试管中，加1l/lH2S41l，封管100恒温水解2h，冷却后用饱和的Ba(H)2中和至中性，离心别离(5000r/i,10in)除去BaS4沉淀，取上清液至10l容量瓶中，定容，经0.45微孔滤膜，供测试。转贴于论文联盟.ll.2.6方法学考察2.6.1精细度实验精细汲取葡萄糖标准溶液(500g/l)，重复进样5次，测定葡萄糖峰面积，其峰面积相对标准偏向RSD为3.03%。2.6.2稳定性实验精细称取太子参样品(S8)，制成样品溶液，分别于制备后0

10、，1，2，3，4，5，6，7，8h进展测定，葡萄糖峰面积相对标准偏向RSD为1.87%，说明样品液在8h内根本稳定。2.6.3重复性实验精细称取太子参样品(S8)，5份，制成样品溶液，进样，测定样品中葡萄糖含量，求出多糖含量，多糖含量相对标准偏向RSD为2.65%，说明含测方法可行。2.6.4加样回收率实验精细称取6份太子参样品(S8)1g，6份，参加太子参多糖100g，制备样品液，进样，测定葡萄糖含量，求出多糖含量。根据样品(S8)多糖含量为20.22%，计算加样回收率。结果见表2。表2太子参多糖加样回收率实验2.7样品多糖含量测定精细汲取各样品液20l，进样,测定葡萄糖峰面积，由线性方程求

11、出样品液中葡萄糖的浓度，再按下式：多糖含量%=(D/)f为样品重量(g)，为多糖中葡萄糖浓度(g/l),D为样品溶液稀释因数,f为多糖换算因子,计算样品中多糖含量。结果见表3及图1。3讨论3.1多糖水解条件的选择对多糖水解时间和水解时硫酸用量进展了考察。取多糖10g，6份，分别加1l/lH2S41，2l，分别水解2，4，6h，制备多糖水解液，进样，测定葡萄糖峰面积，结果说明，加1l/lH2S42l，水解4h，葡萄糖峰面积不再增加，即水解完全，故确定1l/lH2S42l水解4h作为多糖水解条件(表4)。表3太子参中多糖含量测定结果表4不同水解条件下的多糖中葡萄糖峰面积3.2样品水解时间选择取样品

12、(S8)提取液5l，3份，加1l/lH2S41l，分别水解1，2，4h，制备样品液，进样，测定葡萄糖峰面积，结果葡萄糖峰面积分别为6560342，6797850，6797231，说明2h水解完全，故确定2h作为水解时间。见图2。图2样品水解时间(1，2，4h)3.3多糖组分分析太子参多糖水解液和样品液进样检测，均为一单峰，且与葡萄糖标准品峰保存时间一致，进一步证明太子参多糖为葡聚糖。结果见图3。1.葡萄糖对照品(t/in3.047)2.多糖水解液(t/in3.037)3.样品液(t/in3.044)图3葡萄糖对照品、多糖水解液及样品液的HPL-ELSD色谱图太子参中多糖类成分具免疫活性，能增强

13、人体抵抗力，故可作为药材质量分析的一项指标。分析结果初步说明，不同采收时间太子参中多糖的动态积累呈现规律性变化，以79月份含量较高，其积累曲线最大峰值与传统采收期根本一致;贮藏时间对太子参中多糖的含量具有一定影响，随贮藏时间延长，多糖含量下降;太子参主根多糖含量高于参尾，说明药材加工过程中，修剪去除参尾，可进步太子参多糖含量，进步药材质量;野生太子参多糖含量明显低于栽培太子参，野生太子参多生于树荫下，采光量相对较少，是否对多糖的积累有影响有待进一步讨论。【参考文献】1刘训红，阚毓铭.太子参研究概述J.时珍国医国药，2000，11(12):1131.2刘训红，陈彬，王玉玺.太子参多糖抗应激和免疫增强作用的实验研究J.江苏中医，2000，21(10):51.3陈芸芸，王伟，丁怡，等.SE-HPL测定太子神悦胶囊中多糖相对分子质量分布及含量J.中国药学杂志，2022，40(7)：540.4刘训红，谈献和，曾艳萍，等.不同产地太子参的质量比拟研究J