同济医院检验科ISO15189体系文件04可提取核抗原抗体谱(ENA)测定_第1页
同济医院检验科ISO15189体系文件04可提取核抗原抗体谱(ENA)测定_第2页
同济医院检验科ISO15189体系文件04可提取核抗原抗体谱(ENA)测定_第3页
同济医院检验科ISO15189体系文件04可提取核抗原抗体谱(ENA)测定_第4页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

1、同济大学附属同济医院检验科免疫组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ704第2版标题:可提取核抗原抗体谱(ENA)测定第7章 第04号第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页1. 目的:检测血清标本中的ENA。2. 适用范围:同济医院检验科免疫室。3. 项目名称:ENA测定。4. 检测方法:免疫印迹法。5. 检测原理:在载片上的每个反应区内固定了2条免疫印迹膜条。膜条上包被了经亲和层析纯化了的抗原平行线。第一步反应,已稀释的病人标本与膜条温育。如果是阳性标本,特异性的ENA抗体将与相应抗原位点结合。用酶标记的抗人IgG(酶结合物)进行第二步温育与之反应,然后加入酶底物以呈颜色反应

2、。6. 试剂:6.1 品牌:购自由德国欧蒙公司。6.2 内含物:每一试剂盒组成为:6.2.1 已被抗原的反应膜条:10张载片;6.2.2 阳性对照血清:l0.2ml;6.2.3 阴性对照血清:l0.2ml;6.2.4 酶结合物:l0.5ml;6.2.5 标本缓冲液:160ml;6.2.6 底物液:l4ml;6.2.7 清洗缓冲液:2100ml;6.2.8 说明书:1份7. 仪器品牌、型号:上海铂斯德牌摇床。8 操作步骤:8.1 打印工作单:8.1.1 打开电脑及打印机电源,8.1.2 双击齐效检验系统,登陆工号与密码;8.1.3 双击报告处理,单击标本申请信息,打开标本申请明细信息查询,打开左

3、上角的所有信息,选择未生成报告信息。8.1.4 在检验项目处选择ENA执行查询,点击打印申请单,打印出工作单。8.2 排列被检测标本:根据工作单上的库位号找出相应标本,并按工作单上的顺序排列。8.3 按以下步骤开始操作:8.3.1 准备试剂和血清标本:8.3.1.1 在使用前,所有试剂及载片应达室温。8.3.1.2 载片:直接使用。与室温平衡后方可打开保护膜,以防止包被面发生冷凝。8.3.1.3 阳性和阴性对照血清:直接使用。8.3.1.4 酶结合物:用清洁的吸管取所需量并用标本缓冲被1:10稀释。例如,吸取30ul酶结合物加到270ul标本稀释液中。8.3.1.5 标本缓冲液:1瓶60ml,

4、直接使用。8.3.1.6 浓缩清洗缓冲液,10倍浓度。用清洁的吸管吸取所需量并用蒸馏水1:10稀释。8.3.1.7 底物液:直接使用。因对光敏感,在使用之前应立即盖紧瓶盖避光存放。8.3.2 稀释血清或血浆标本:血清或血浆标本用标本缓冲液1:101稀释。8.3.3 加样,将加样板放在泡沫塑料板上,加50ul己稀释血清于加样板的每个反应区。避免产生气泡。8.3.4 温育(1)将载片盖在加样板的凹槽里,反应开始。确保每个标本均与载片上的膜条接触,在300rpm摇床上室温温育30分钟。8.3.5 清洗:将清洗缓冲液盛于烧杯中,滴水冲洗载片后,放在小杯玻璃框里浸洗 15分钟。8.3.6 加样:加50u

5、l己1:101稀释的酶结合物(碱性磷酸酶标记的抗人IgG于加样板的每个反应区。8.3.7 温育:将载片从清洗缓冲液中取出,只需擦干背部和四周后置于加样凹槽里。在300rpm摇床上室温温育30分钟。8.3.8 清洗:将缓冲液盛于烧杯中,流水冲洗载片后立即放在小杯的玻璃框里浸洗15分钟。8.3.9 加50ul底物液于加样板的每个反应区。8.3.10 温育:将载玻片从清洗缓冲液中取出,擦千背部及底边后置于加样板的凹槽里。8.3.11 清洗:用去离子水或蒸馏水冲洗载片。风干数分钟。8.4 结果:根据膜条上颜色强度判断结果。与非抗原包被相比,阳性反应将在相应的抗原处可见兰/紫色条带。抗人lgG带(右侧条

6、膜底部)出现清析阳性反应说明实验操作正确,若抗人IgG条带出现微弱反应,需要重复实验。8.5 发送报告:详见免疫报告发送程序。9. 参考范围:正常人阴性。10. 临床意义:10.1 高滴度的IU-nRNP抗体是混合性结缔组织病(MCTD,Sharp综合征)的特征,发生率为95%100%,抗体滴度与疾病活动性相关。UI-nRNP抗体在30%-40%的系统性红狼疮患者也可见。10.2 Sm抗体与系统性红班狼疮密切相关,与dS-DNA一起,是系统性红班狠疮的特异性指标,但仅有20%-40%病人样阳性。10.3 SS-A抗体与各类自身免疫病相关,常见于干燥综合症病人(40%-80%),也见于系统性红斑

7、狼疮(30%-40%),原发性胆汁性肝硬化(20%),偶见于慢性活动性肝炎。此外,100%新生儿红斑狼疮出现SS-A抗休。10.4 抗SS -B抗体见于干燥综合症(40%-80%)和系统性红斑狼疮 (10%-20%.)患者,几乎均为女性(29:l)。干燥综合症常同时有SS-A抗体和SS-B抗体。10.5 Scl-70抗休见于25%-75%的进行件系统性硬化症。10.6 Jo-1抗体见于多肌炎,发生率为25%-35%。常与肺间质纤维化相关。11 病人准备、标本要求:标本为血清时最好空腹采血,脂血、溶血不可使用。其它体液标本无特殊要求。12 注意事项:12.1 接受标本后不能及时检测者应分离血清时,防止溶血。12.2 试剂盒中的所有组分都应当作潜在性

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论