金银花对发热新西兰兔解热作用机制的研究

1、金银花对发热新西兰兔解热作用机制的研究谢新华蒋绍祖邹晓琴周琴温二生薛进华【摘要】目的探究金银花解热作用的中枢机制,为其在临床应用提供实行根据。要领用白细胞介素-1IL-1复制新西兰兔发热模子,在不雅察金银花解热作用的底子上,应用免疫组化技能检测静脉注射金银花对IL-1作用下新西兰兔视前区-下丘脑前部(preptianterirhypthalaus,PAH)构造中前线腺素受体EP3E-typeprstaglandinreeptrEP3表达的影响。效果金银花静脉注射后对正常新西兰兔结肠温度没有显着影响,与生理盐水组比拟,最大要温上升高度(T)及1h体温反响指数(TRI1)两组间无统计学意义(P0.

2、05)；IL-1组在静脉注射IL-1后,结肠温度渐渐升高,T及TRI1与生理盐水组比力,有统计学意义(P0.01)；而金银花+IL-1组结肠温度上升峰值显着低于IL-1组,两组T及TRI1有明显性差异(P0.05)。新西兰兔PAHEP3在生理状态下仅有少量表达；静脉注射IL-1诱导实行动物发热时,EP3表达显着加强(P0.01)；而金银花能淘汰IL-1引起的EP3表达(P0.05)。结论金银花对IL-1性发热新西兰兔的解热作用机制大概与其按捺视前区-下丘脑前部EP3的表达有关。【关键词】金银花解热视前区下丘脑前部前线腺素受体EP3金银花是我国中医药宝库中的宝贝,其身分庞大，含多种挥发油、绿原酸

3、类化合物、三萜皂苷类化合物、黄酮类化合物。具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤、加强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、落脂、抗生养、止血、抗溃疡等多种药理作用1。以金银花为主的多种复方制剂如银翘散、银黄注射液、银黄解毒片等对多种熏染所致的发热有较好的疗效。我们以往的实行也表白2，金银花对IL-1引起的发热有显着的解热作用，并用电生理要领对此中枢解热机制作了开端研究。本实行从分子生物学角度进一步探究此中枢解热机制,为其在临床解热中的应用提供更多的实行根据。1东西与要领1.1装备及试剂ST-1型数字温度计上海医用仪表厂,电热恒温造就箱上海跃进医疗东西一厂,1900型恒冷箱切片机德国徕卡公司,DRA2正立电动荧光

4、显微镜德国徕卡公司,LEiaQin彩色图像阐发体系德国徕卡公司,IL-1美国Siga公司。金银花注射液。免疫组化试剂盒武汉博士德生物工程。1.2动物及分组康健新西兰兔24只,牝牡不限，体重1.52.0kg，随机分成4组，每组6只。生理盐水(NS)比拟组：每只动物静脉注射NS1l；金银花组：每只动物静脉注射金银花注射液1l；IL-1组：每只动物静脉注射IL-1100ng用无热原NS稀释至1l；金银花+IL-1组：静脉注射金银花注射液1l/只,30in后再静脉注射IL-1剂量同IL-1组。1.3发热动物模子的制备利用ST-1型数字温度计丈量结肠温度。实行前3d将兔置于实行情况中模拟操纵以顺应实行条

5、件，46h/d，第4天正式实行。实行时，实行室温度保持在231，将新西兰兔置于特制兔箱中，用涂有白腊油的测温探头经肛门插入10,并用胶布结实于尾根部，待体温不变后,每隔10in记载1次结肠温度，取3次的均匀值作为底子体温。IL-1组从耳缘静脉注射IL-1，并每隔10in记载体温1次，共记载70in；NS比拟组从耳缘静脉注射NS；实行组记载体温要领雷同。1.4取材和切片记载至70in时，用20%氨基甲酸乙酯举行麻醉，敏捷分散双侧颈总动脉和一侧颈外静脉，此中一侧颈总动脉插管，另一侧颈总动脉结扎，开放颈外静脉，快速(2in内)输入370.01%肝素生理盐水100l，再先快后慢灌注44%多聚甲醛200

6、l，维持灌注30in；取兔下丘脑，放入4%多聚甲醛后结实，按通例白腊切片要领，脱水、透明、包埋、切片，厚度为4，隔2取1，用作EP3免疫组化法查抄。1.5飘浮法免疫组化染色步伐按通例AB要领。切片脱蜡、脱水；奇怪配制的3%双氧水浸泡10in，以消除内源性过氧化物酶；抗原修复；正常兔血清孵育30in，滴加抗EP3抗体，4留宿；滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37孵育20in；滴加试剂SAB，37孵育30in；DAB显微镜下操纵显色；上述各步之后均用0.01l/LPBS振荡漂洗3次，每次5in；苏木素复染，脱水，透明，封片，显微镜下不雅察。阴性比拟以PBS取代一抗，别的步调雷同。阳性比拟接纳自身比拟

7、，用PBS取代一抗和二抗作阴性比拟。1.6图像阐发接纳LeiaQin彩色图像阐发体系，每张切片随机拔取10个不重叠的视野，计数每个视野阳性细胞数；每个视野随机选10个细胞，盘算单个细胞面积及阳性细胞总面积来反响PAH、EP3亚型的表达程度。1.7统计学阐发全部实行数据均以s表现，用SPSS11.0举行t查验。2效果2.1金银花对IL-1性发热效应的影响效果见表1。从表1可以看出，金银花组和NS组新西兰兔体温没有显着变革，两组比力，T及TRI1均无显着差异(P0.05)；而IL-1组与NS组比拟，结肠温度升高，T及TRI1有明显性差异(P0.01)；金银花+IL-1组在事先注射金银花后，温度上升

8、峰值显着低于IL-1组，两组T及TRI1比力，有明显性差异(P0.05)。表1各组家兔结肠温度影响的比力略与NS组比力，*P0.01；与IL-1组比力，P0.05；n=62.2金银花对发热新西兰兔视前区-下丘脑前部PAH前线腺素受体EP3表达的影响效果见表2。从表2可以看出，NS比拟组和金银花组视前区-下丘脑前部每个视野EP3阳性神经元个数、单元面积阳性神经元及阳性细胞面积光密度值差异无统计学意义P0.05；IL-1组新西兰兔PAH每个视野EP3阳性神经元个数、单元面积阳性神经元及阳性细胞面积光密度值均显着高于生理盐水比拟组P0.01；而注射金银花注射液能按捺IL-1诱导的EP3表达，其PAH

9、每个视野EP3阳性神经元个数、单元面积阳性神经元及阳性细胞面积光密度值均显着低于IL-1组P0.05。表2各组新西兰兔PAHEP3的表达程度略与NS组比力，*P0.01；与IL-1组比力，P0.053讨论IL-1是公认的内生致热源之一，动物实行中常用来复制发热模子。如今以为IL-1引起发热的机制之一是IL-1与终板血管器的血管内皮细胞及其四周的巨噬细胞、小胶质细胞胞膜上的IL-1受体结合，促进靶细胞内PGE2合成，天生的PGE2以旁排泄情势诱导下丘脑温度敏感神经元细胞膜上的PGE2受体并与之结合3，进而引起后续的细胞信号转导；PGE2受体有4种亚型：EP1，EP2，EP3，EP44。药理学研究

10、资料表现EP1和EP3大概介导了PGE2依靠性发热；而利用基因敲除小鼠阐发的效果提示EP3更大概是PGE2诱导发热的关键受体5。我们以往实行也表白6：IL-1诱导发热时，视前区-下丘脑前部EP3RNA的表达显着加强。PGE2与其受体结合后，通过信号转导通路改变体温调治中枢体温调定点程度7，从而引起机体产热和散热变革，使体温升高。假设可以或许下调视前区-下丘脑前部内EP3的表达，那么可按捺IL-1所致的发热。金银花具有清热解毒作用，以金银花为主的多种复方制剂对多种熏染所致的发热有较好的疗效8,9。我们以往的实行效果也表白2,10，金银花有显着的解热作用，并从中枢电生理的角度阐发其解热机制与逆转致

11、热原引起的温度敏感神经元放电频率的改变有关。本实行用免疫组化法进一步从分子程度来研究金银花的中枢解热作用机制。效果表白：IL-1引起新西兰兔发热的同时，视前区-下丘脑前部神经元上的前线腺素受体EP3表达显着增长；而注射金银花注射液可下调IL-1诱导的EP3表达。因此我们以为，金银花起解热作用的另一机制大概与其按捺PAH神经元EP3的表达有关。【参考文献】1何显忠,兰荣德.金银花的药理作用与临床应用J.时珍国医国药,2022,15(12):865.2谢新华,董军,付咏梅，等.金银花解热作用及机制的实行研究J.时珍国医国药,2022,18(9):2071.3niaEk,EngblD,SahaS,e

12、tal.Inflaatryrespnse:pathayarsshebldbrainbarrierJ.Nature,2001,410(6827):544.4Takakazuka,Kaeka,liffrdB，etal.ntrastingeffetsfEtypeprstaglandin(EP)reeptragnistsnrebdyteperatureinratsJ.BrainResearh,2022，968:256.5UshikubiF,SegiE,SugitY,etal.IpairedfebrilerespnseinielakingtheprstaglandinEreeptrsubtypeEP3J.Nature,1998,395(6699):281.6唐红梅,潘锐,谢新华，等.IL-1对兔下丘脑前线腺素受体EP3RNA表达的影响J.广东医学,2022,286：869.7李沧海,周军,霍海如，等.前线腺素EP3受体冲动剂诱导发热及其机制初探J.中国病理生理杂志,2022，20(4):664.8刘华钢,陈燕军,林启云，等.复方银黄微型灌肠剂解热、抑菌作用的研究J.广西医科大学学报,2001,18(6):801.9覃筱燕,张淑萍,杨林，等.复方双花口服液的解热、抗炎、抑菌作用的实行研究J.中心民族大学学报(天然科学