饲料原料 酸价的测定 编制说明

1、 中华人民共和国农业行业标准饲料原料 酸价的测定编 制 说 明（公开征求意见稿）2022年8月浙江省动物疫病预防控制中心（浙江省兽药饲料监察所）*目 录工作简况（一） 任务来源1（二） 制定背景1（三） 工作过程2二、标准编制原则、主要技术内容确定依据与过程 3（一）标准编制原则 3（二）主要技术内容确定依据与过程 41.试剂和材料 4（1）试验用样品收集 4（2）试剂 7（3）仪器和设备 82.试验方法的建立 8（1）试样制备方法考察 8 （2）试样溶解用溶剂考察 15（3）滴定液的考察 17（4）指示剂的考察 17（5）水相和非水相电极对电位滴定的影响 21（6）电位滴定法滴定方法考察 2

2、4（7）电位滴定法两种标准滴定溶液的酸价比较与精密度考察 33（8）谷维素含量对米糠油中酸价测定的影响35（9）试验称量范围 36（10）方法精密度试验 37（11）方法检出限考察443.市场采集样品考察结果 47三、试验验证的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果 48（一）检验检测机构试验验证的分析、综述报告 48（二）技术经济论证66（三）预期的经济效果66四、国际、国内同类标准技术内容对比情况66（一）国内外相关标准查询比较情况 66（二）采用本标准和国内外相关标准方法进行对比试验的结果67五、采标情况以及是否合规引用或采用国际国外标准68（一）采标情况 68（二）是否合规引用或

3、采用国际国外标准68六、与有关法律、法规的关系68七、重大分岐意见的处理经过和依据68八、涉及专利的有关说明68九、贯彻国家标准的要求，以及组织措施、技术措施、过渡期和实施日期的建议等措施建议 68十、其他应予说明的事项69 一 、工作简况（一）任务来源根据农业部农财发201738号农业部关于支付2017年农产品质量安全监管专项经费等项目资金的通知要求，由浙江省兽药饲料监察所承担饲料原料油脂中酸价的测定标准制定工作。本项目由中华人民共和国农业农村部畜牧兽医局提出，全国饲料工业标准化技术委员会归口，项目编号为181721301092372049，项目名称：饲料原料油脂中酸价的测定。（二）制定背景

4、在畜禽养殖中，油脂对动物的生长具有重要意义，除了可以为动物的生长提供必需的脂肪酸外，还是能量的重要来源，也可以高效的转化为动物的体脂，提高生长和屠宰性能，是动物营养中不可缺少的组成部分。但油脂在贮藏和运输时，由于空气中的氧、日光、微生物、酶和金属离子等的作用而发生复杂的化学变化，特征表现为油脂散发出特殊的臭味，即油脂的酸败。根据油脂酸败的特征和分类，目前国际上广泛使用酸价（AV）、过氧化值（POV）、丙二醛（TBA）、羰基值（COV）作为油脂酸败的评价指标。酸价是油脂中游离状脂肪酸含量的标志，饲料原料目录中，酸价是许多饲料原料的强制性标识要求。目前测定油脂中酸价或脂肪酸价的国际标准主要有ISO

5、 660: 2020和AOCS Official Method Cd 3d-63 Acid Value两个标准，国内涉及油脂中酸价测定标准主要有GB 5009.229-2016 食品安全国家标准 食品中酸价的测定、LS/T 6107-2012 动植物油脂 酸值和酸度测定 自动滴定分析仪法、GB/T 5510-2011 粮油检验 粮食、油料脂肪酸价测定、NY/T 2333-2013 粮食、油料检验脂肪酸价的测定等。饲料原料油脂种类繁多，且多为粗油，杂质较多，颜色较深，目前缺乏专属的检测方法。针对饲料原料的特殊性，开展饲料原料中酸价的检测方法的研究，对于保障饲料的质量安全，提高养殖动物的生长性能具

6、有重要的意义。（三）工作过程1.标准申请和立项本单位于2016年11月向全国饲料工业标准化技术委员会提出标准制定申请，于2017年6月获得立项。2.成立标准起草小组2016年11月计划任务下达后，为确保项目的顺利实施，成立标准起草小组，同时对标准起草工作进行分工，明确各自任务和职责，制定工作计划，落实人员与任务分工，详见表1。表1 标准主要起草人员和任务分工人员职称任务分工任玉琴正高级兽医师项目负责人，方案设计，制定工作总体协调王彬兽医师试验方法研究，标准文本和编制说明编写陈洁高级畜医师协助试验方法研究，样品收集黄娟高级畜牧师试验方法的研究，试样测定侯轩兽医师样品收集和测定罗成江兽医师样品测定

7、裘丞军畜牧师样品测定周丰超助理工程师样品测定陈晓林畜牧师方法学验证蔡文金兽医师样品测定葛孟昀/精密度试验3.开展调研和试验本单位于2016年11月向全国饲料工业标准化技术委员会提出标准制定申请，于2017年6月获得立项。2017年9月成立项目组，明确实施方案与分工，收集国内外相关资料、检测标准，咨询相关生产、检测单位，到饲料生产企业了解产品生产工艺流程、产品现行标准执行情况，项目组对标准的各项指标修订进行了充分的讨论，拟订产品修订指标。2018年2月至5月，向生产企业征集产品，对饲料原料目录中收载的品种进行广泛的收集与购买。2018年6月至2021年12月，组织相关技术人员对试验方法进行了充分

8、的试验和验证。4.编写标准草案2021年12月至1月，起草组根据前期的调研、试验结果和起草人员讨论，编写了标准草案稿和编制说明征求意见稿。5.征求意见和验证2022年1月至2022年4月，发送“征求意见稿”的单位（专家）数36份，收到“征求意见稿”后，回函的单位（专家）数20（21）份，收到“征求意见稿后”回函并有建议或意见的单位（专家）数19（20）份，没有回函的单位（专家）1。提出建议的检验机构占35.0%，科研院校占35.0%，使用单位占33.3%。对专家意见进行汇总，提出建议75条，采纳64条，不采纳7条，部分采纳4条。根据专家意见对征求意见稿进行进一步修订。根据征求意见的结果，将标准

9、适用范围扩大到酸价作为强制性标识的所有饲料原料，并组织相关技术人员对扩大范围的样品以及部分试验数据进行了补充，形成了预审稿，同时委托3家质检单位进行了验证。6.编写标准初审稿和预审2022年6月23日，委托全国饲料工业标准化技术委员饲料检测方法标准化工作组组织了标准预审会议。预审会议上，专家组提出了5条修改意见：1. 建议标准名称更改为饲料原料 酸价的测定。2. 建议修改适用范围，增加定量限。3. 将4.4中油脂提取内容调整至4.5试验步骤。4. 建议补充百里香酚酞指示剂、碱性蓝6B指示剂测定米糠油酸价的对比试验数据以及谷维素含量对米糠油酸价测定有无影响的试验数据。5.按照GB/T 1.120

10、20、GB/T 20001.42015的要求规范标准文本及编制说明。预审会议后，起草组按照预审专家的意见补充了油料籽实样品（选择的样品为大豆和油菜籽）酸价测定试验和米糠油使用不同指示剂对比试验数据以及谷维素含量对米糠油酸价测定结果的影响试验，并对标准文本做了几项重要修改：1.将标准改为饲料原料 酸价的测定，英文翻译改为“Feed materialsDetermination of acid value”。2.按照饲料原料目录将标准的适用范围改为“油料籽实及其加工产品、谷物及其加工产品、奶油及其加工制品、陆生动物产品及其副产品、水生生物及其副产品”，范围增加了大豆、油菜籽等油料籽实及其加工产品没

11、有要求强制性标识酸价但实际上又需要测定酸价的产品。3.将4.4中油脂提取内容调整至4.5试验步骤。4.4内容改为了油脂提取前的粉粹、过筛等前处理环节。4.根据米糠油使用不同指示剂对比试验数据以及谷维素含量对米糠油酸价测定结果的影响试验数据，将米糠油、米糠、统糠、稳定化米糠这类（提取后的油脂）含有谷维素含量较高的饲料原料排除在冷溶剂指示剂滴定法适用范围内。5.将大豆、油菜籽等非强制标识酸价指标的油料籽实类原料纳入冷溶剂指示剂滴定法和冷溶剂电位滴定法的适用范围，并补充了大豆、油菜籽两类样品的试样制备和酸价测定试验数据。二 、标准编制原则、主要内容及其确定依据（一）标准编制原则本标准依据GB/T 1

12、.1-2020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则、GB/T 20001.42015标准编写规则 第部分：试验方法标准的原则，结合资料查询、市场调研及实验数据对标准的范围、试验步骤等进行制订编写。（二）主要技术内容确定依据与过程1.试剂和材料（1）试验用样品收集根据中华人民共和国农业部饲料原料目录，涉及酸价指标的饲料原料产品为：植物油；动物油脂；稻谷加工产品、氢化脂肪；奶油及其加工制品；鱼、其它水生生物及其副产品、昆虫加工产品、肉粉、肉骨粉等,详见表2。表2 酸价作为强制性标识要求的饲料原料类型原料编号原料名称强制性标识要求谷物及其加工产品1.2.12稻米油米糠油酸价、过氧化值

13、1.2.13米糠粗脂肪、酸价、粗纤维1.2.18统糠粗脂肪、粗纤维、酸价1.2.19稳定化米糠粗脂肪、粗纤维、酸价1.8.3黍米糠粗脂肪、粗纤维、酸价1.11.14小麦胚芽油酸价、过氧化值1.13.19玉米油玉米胚芽油粗脂肪、酸价、过氧化值油料籽实及其加工产品2.1.3扁桃（杏）仁油酸价、过氧化值2.3.3大豆磷脂油（大豆磷脂油粉）粗脂肪、酸价、水分，丙酮不溶物2.2.6菜籽油（菜油）酸价、过氧化值2.3.7大豆胚芽油酸价、过氧化值2.3.12大豆油（豆油）酸价、过氧化值2.4.2番茄籽油酸价、过氧化值2.5.3橄榄油酸价、过氧化值2.6.3核桃仁油酸价、过氧化值2.7.5红花籽油酸价、过氧化

14、值2.8.4花椒籽油酸价、过氧化值2.9.7花生油酸价、过氧化值2.10.2可可油（可可脂）酸价、过氧化值2.11.6葵花籽油酸价、过氧化值2.12.8棉籽油（棉油）酸价、过氧化值2.13.3木棉籽油酸价、过氧化值2.14.2葡萄籽油酸价、过氧化值2.15.3沙棘籽油酸价、过氧化值2.16.2酸枣油酸价、过氧化值2.17.2文冠果油酸价、过氧化值2.18.4亚麻籽油酸价、过氧化值2.19.3椰子油酸价、过氧化值2.20.5棕榈仁油酸价、过氧化值2.20.6棕榈油（棕榈脂肪粉）酸价、过氧化值2.21.3月见草籽油酸价、过氧化值2.22.4芝麻油酸价、过氧化值2.23.4紫苏油酸价、过氧化值2.2

15、4.1氢化脂肪酸价、过氧化值2.24.2琉璃苣籽油酸价、过氧化值其他籽实及其加工产品（5.1辣椒及其加工产品）5.1.4辣椒籽油酸价、过氧化值其他植物、藻类及其加工产品（7.5 藻类及其加工产品）7.5.10藻油粗脂肪、酸价、过氧化值乳制品及其副产品8.3.1奶油（黄油）脂肪、酸价、过氧化值、水分8.3.2稀奶油脂肪、酸价、过氧化值、水分陆生动物产品及其副产品9.1.1油粗脂肪、不皂化物、酸价、丙二醛9.2.1蚕蛹（粉）粗蛋白质、粗脂肪、酸价9.2.2蚕蛹粕脱脂蚕蛹（粉）粗蛋白质、粗脂肪、酸价9.2.7虫（粉）粗蛋白质、粗脂肪、酸价9.6.7肉粉粗蛋白质、粗脂肪、总磷、胃蛋白酶消化率、酸价9.

16、6.8肉骨粉粗蛋白质、粗脂肪、总磷、胃蛋白酶消化率、酸价鱼、其他水生生物及其副产品10.2.6虾油脂肪、酸价、碘价10.3.5乌贼油粗脂肪、酸价、碘价10.3.10鱿鱼油粗脂肪、酸价、碘价10.4.11鱼油酸价、碘价、丙二醛、粗脂肪根据上述产品信息及市场调研，项目组收集了以下代表性产品：谷物及其加工产品（米糠、玉米油、米糠油）；油料籽实及其加工产品（大豆、大豆油、油菜籽、菜籽油、大豆磷脂油、氢化脂肪、棕榈脂肪粉）；辣椒及其加工产品（辣椒油）；奶油及其加工制品（奶油黄油、稀奶油）；动物油脂（鸡油、猪油）；鱼、其它水生生物及其副产品（鱼油、鱿鱼油、鳀鱼油）；昆虫及其加工产品（蚕蛹粉）；肉骨及其加工

17、产品（鸡肉粉）。样品基本覆盖了含油脂的饲料原料的主要类型，结果见表3。表3 收集的油脂的基本信息原料名称来源玉米油益海嘉里米糠山东美越饲料米糠油嘉吉饲料大豆（黑龙江大豆）沈阳信昌粮食贸易有限公司大豆油益海嘉里油菜籽杭州市桐庐县分水镇播义村榨油坊菜籽油浙江常发粮油食品有限公司鸡油潍坊美宝来动物蛋白有限公司猪油金燕鱼油熙美诺鱿鱼油付达渔粉销售中心鳀鱼油五丰粮油辣椒油河北邢台市隆尧县旭日食品有限公司奶油 澳大利亚德运黄油、德国安佳稀奶油雀巢淡奶油、法国总统（President）牌、欧德宝、妙可蓝多氢化脂肪益海嘉里 大豆磷脂油安徽省中创工程技术有限公司大豆磷脂油粉海兴正昌饲料厂棕榈脂肪粉益海嘉里鸡肉粉

18、美国蛋白公司蚕蛹粉山东美越饲料（2）试剂氢氧化钠：上海凌峰，批号：20191210；氢氧化钾：上海凌峰，批号：20190930 ；酚酞：阿拉丁，批号：P108715；百里香酚酞：阿拉丁，批号：T104283;碱性蓝6B：麦克林，批号：C10092067; 无水硫酸钠：江苏强盛，批号：20150801；石油醚（30 60 ）：上海凌峰，批号：20181022；异丙醇：上海凌峰，批号：20130313；乙醚：国药沪试，批号：20170622；乙醇：上海凌峰，批号：20181112；正庚烷：国药沪试，批号：2021222。（3）仪器和设备精密电子天平 品牌：METTLER型号：XP205DU ；电位

19、滴定仪品牌：Metrohm 型号：916 Ti-Touch；恒温干燥箱 品牌：宾德 型号：FD115；电热恒温振荡水槽 品牌：上海精宏 型号：DKZ-2;超声波清洗器 品牌：昆山市超声仪器 型号：KQ-500E；磁力搅拌器 品牌：德国IKA 型号：RO 10；旋转蒸发仪 品牌：BUCHI 型号：R-210;离心机 品牌:sigma 型号：3K15；紫外分光光度计 品牌：岛津 型号：UV3600。2.试验方法的建立用有机溶剂提取样品中的油脂，将油脂溶解成溶液，再用氢氧化钠标准滴定溶液或氢氧化钾乙醇标准滴定溶液中和样品溶液中的游离脂肪酸，通过指示剂的颜色变化或电位变化的等当点判断滴定终点，通过标准

20、滴定溶液消耗的体积计算油脂试样中的酸价。(1)试样制备方法考察 动植物油脂 植物籽实及其加工产品提炼的油脂、动物组织提炼的油脂，在不同储存条件下，外观形态为液态、半固态和固态。该类产品脂肪含量均匀，水分和杂质含量较低，样品制备主要是去除固体杂质和水分，因此标准引用GB/T 15687-2008 动植物油脂 试样的制备的方法对其进行制备。 谷物及其加工产品、油料籽实及其加工产品、昆虫加工产品、肉（骨）粉、大豆磷脂油粉谷物及其加工产品、油料籽实及其加工产品、肉（骨）粉等含油脂的饲料原料含杂质较多，游离脂肪酸含量低，需要通过制备提取出较纯的油脂，制备方法主要参考GB/T 20195-2006 动物饲

21、料 试样的制备、GB 5009.229-2016 食品中酸价的测定中含油食品试样的制备方法（浸出法）、GB 5009.227-2016 食品中过氧化值的测定中油脂制品试样的制备方法（浸出法）和NY/T 2333-2013 粮食、油料检验 脂肪酸价的测定中样品制备方法（振提法）。GB/T 20195-2006 动物饲料 试样的制备中试样的制备步骤为；研磨样品，过1 mm的筛。食品中酸价的测定（GB 5009.229-2016）中浸出法提取步骤为：称取样品，加入3倍5倍体积石油醚（30 60 ），并用磁力搅拌器充分搅拌30 min60min,使样品充分分散于石油醚中，然后在常温下浸出12 h 以上

22、，再用滤纸过滤，取滤液置于水浴温度不高于45的旋转蒸发仪中蒸干；食品中过氧化值的测定（GB 5009.227-2016）中油脂制品试样的制备方法为： 将粉碎的样品置于广口瓶中, 加入 2倍3倍样品体积的石油醚, 摇匀, 充分混合后静置浸出 12h 以上, 经装有无水硫酸钠的漏斗过滤, 取滤液, 在低于40 的水浴中, 用旋转蒸发仪减压蒸干石油醚, 残留物即为待测试样。在试验中发现大豆、大豆磷脂油粉等饲料原料样品油脂含量低，称量的样品和溶剂的体积太大（200g样品+600mL溶剂），磁力搅拌子无法搅动样品，只能采用玻璃棒搅拌的方式；浸出后过滤的方法不便于操作（速度慢，且溶剂挥发性强，不利于实验人

23、员健康）；采用直接取上清液的方法操作简便，即便上清液中含有一定量的固体杂质可以在旋蒸后通过其他的方式去除。因此，浸出法提取试验采用的具体的方法为：取代表性试样200 g ，置于广口瓶中，加入600 mL石油醚，用玻璃棒搅拌10min以上，静置12h。取出提取液转移至50 mL离心管中，8 000 r/min 离心分离5 min，取上清液置于水浴温度不高于40 的旋转蒸发仪内，0.08 MPa0.1 MPa负压条件下，将其中的溶剂彻底旋转蒸干，取残留的液体油脂作为试样。若残留的油脂浑浊，将油脂转移至50 mL离心管中，8 000 r/min离心分离5 min，取上清液作为试样。粮食、油料检验脂肪

24、酸价的测定（NY/T 2333-2013）中振荡法提取的步骤是样品经粉粹称量后加入6倍体积溶剂振荡1h后测定。振荡法提取试验采用的具体的方法为：取代表性试样200 g ，置于广口瓶中，加入3倍体积石油醚（30 60 ），置于往返式振荡器上振摇2 h，振荡频率为100次/min。取出提取液，8 000 r/min 离心分离5 min，取上清液置于水浴温度不高于40 的旋转蒸发仪内，0.08 MPa0.1 MPa负压条件下，将其中的溶剂彻底旋转蒸干，取残留的液体油脂作为试样。若残留的油脂浑浊，将提取液转移至50 mL离心管中，8 000 r/min离心分离5 min，取上清液作为试样。分别以米糠（

25、已粉粹）、蚕蛹粉、鸡肉粉和大豆磷脂油粉作为样品，分别按照上述浸出提取法和振荡提取法的方法进行提取试验，并称取所得油脂，采用80 mL乙醚-异丙醇混合溶液（1+1）溶解油脂，以氢氧化钠标准滴定溶液（0.1 mol/L）进行电位滴定测定酸价，测定结果见表4。表4 浸出提取法和振荡提取法比较试验 样品 提取方法油脂收率（%）酸价（mg/g）*12平均变异系数（%）*米糠浸出法9.34.694.864.73.6振荡法16.27.347.557.42.8蚕蛹粉浸出法9.715.7715.3715.62.6 振荡法19.78.788.948.9 1.8鸡肉粉浸出法6.59.088.708.9 4.3振荡法

26、14.27.086.967.0 1.7大豆磷脂油粉浸出法48.025.7625.1825.5 2.3振荡法48.126.3326.0626.2 1.0大豆浸出法15.60.2050.2230.214.2振荡法15.80.1910.2020.202.5油菜籽浸出法28.2%0.7770.7980.791.3振荡法36.7%0.9170.8820.901.9注：酸价是以样品所提取的油脂作为试样计算。从表4中可以看出，对于大豆磷脂油粉和大豆样品，采用两种方法提取出的油脂的收率和酸价差异不明显，但米糠、蚕蛹粉、鸡肉粉和油菜籽的油脂收率和酸价差异较大，采用振荡提取法所得油脂的收率更高，表明油脂的提取效果

27、更好。油用米糠（LS/T 3269-2020）规定的三级（最低级）粗脂肪含量为14.0，米糠中油脂与蛋白提取技术研究进展肖信锦，李阳洋等.粮食与油脂，2016，29（3）：1-4中指出米糠含有1424的油脂，饲料原料 米糠饼（NY/T 123-2019）中规定的米糠饼的粗脂肪含量为10.0%，而米糠饼则是米糠脱油后剩余的产物。从以上文献可知，米糠中含油脂的量应在10%以上，因此，浸出法的油脂收率略低，振荡法的油脂收率结果比较符合。蚕蛹粉和蚕粕的制作与应用孙述兰,孙元丰.中国动物保健,2002(7)34-35中指出蚕蛹粉的粗脂肪含量可达22以上，蚕蛹粕(渣)的粗脂肪含量一般仅在10左右。蚕蛹粉代

28、替70%进口鱼粉饲喂北京肉鸭试验孙桂芝,韩桂芝.辽宁畜牧兽医,1997(5)20-20中所用蚕蛹粉所含粗脂肪含量为22.3%。饲喂变质蚕蛹粉引起鸡胃溃疡张庆坤,刘孝刚,徐长顺等.养禽与禽病防治,1996(10):37中指出蚕蛹粉的粗脂肪含量为。从以上文献可知蚕蛹粉的粗脂肪含量应在20%以上，因此，浸出法的油脂收率太低，振荡法的油脂收率结果比较符合。鸡肉粉样品的粗脂肪为7%13%（所购的商品标签上注明）。因此，浸出法油脂收率略低，而振荡法油脂收率比较符合。饲料添加剂 大豆磷脂（GB/T 23878-2009）中规定的指标是磷脂酰胆碱+磷脂酰乙醇胺+磷脂酰肌醇35.0 %。因此，浸出法和振荡法收率

29、均比较符合。GB 1352-2009 大豆规定高油大豆最低等级（3级）粗脂肪含量为20.0 %。本试验大豆为东北大豆大豆含油率较低，大约在17.5%左右，出油率大概在12%18%，因此，浸出法和振荡法收率均比较符合。通常，油菜籽的出油率在37.5%46.3%，GB/T 11762-2006 油菜籽规定普通油菜籽和双低油菜籽最低等级（5级）的含油率均34.0%，由此可见，浸出法收率偏低，振荡法收率比较符合。综上所述，米糠、蚕蛹粉、鸡肉粉、大豆磷脂油粉、油菜籽选用振荡法制备试样效果更好，能够较完整的提取出油脂。拟采用的方法步骤为：先将样品切割或分割小片或小块,再将其放入粉碎机中粉碎至1mm，并通过

30、圆孔筛，取过筛后样品50 g100 g(测定的样品中油脂的酸价4mg/g10 mg/g，需要称量油脂样品5g,按油脂收率10%计算，至少50g)，置于广口瓶中，加入4倍体积石油醚，用玻璃棒搅拌混匀后密塞，置于往返式振荡器上振摇2 h。取出溶液及样品，置于50 mL离心管中，于8 000 r/min 离心5 min，取上清液置于水浴温度不高于40 的旋转蒸发仪内，负压条件下，将其中的溶剂彻底旋转蒸干，取残留的液体油脂作为试样。 奶油（黄油）和稀奶油奶油（黄油）常温下为固态，需要先加热融化混合均匀，然后去除样品中的杂质和水分，得到纯度高的油脂。食品中酸价的测定（GB5009.229-2016）中附

31、录C 乳化类油脂试样的处理采用浸出法石油醚(30 60 )浸出,旋蒸，食品中过氧化值的测定（GB5007.229-2016）对人造奶油的制备是采用破乳法（60 70 加热破乳，漏斗过滤）。由于浸出法耗时过长，而奶油样品溶解在石油醚中后可以采用磁力搅拌或振荡的方式缩短制备时间，因此，奶油（黄油）制备试验设计了破乳、浸出、振荡和磁力搅拌四种提取方法，四种方法间的差异以及试样制备及酸价的结果见表5。表5 奶油（黄油）提取试验中4种提取方法及试验结果对比试验组A组B组C组D组制备方法破乳法（60，30分钟）浸出法(12h)振荡法（100次/分，2h）磁力搅拌法(600转/分，2h)样品重量200200

32、200200融化温度50505050提取溶剂无需溶剂，破乳后通过分液漏斗取上层油脂3倍体积石油醚(30 60 )3倍体积石油醚(3060 )3倍体积石油醚(3060 )旋蒸/是是是油脂收率（%）60.254.755.955.6酸价（mg/g）*10.4160.4370.4540.49520.4190.4450.4440.499平均0.420.440.450.50变异系数（%）0.71.82.20.8注：酸价是以样品所提取的油脂的称样量计算。由表5可知，四种方法的油脂收率为55%60%，采用破乳化的油脂收率要略高于浸出法、振荡法和磁力搅拌法。四种方法所制备的油脂的酸价无显著差异，制备方法应首选破

33、乳法，但考虑到破乳过程中长时间高温可能会对样品的酸价造成影响，在破乳后使用分液漏斗分离的操作十分繁琐，时间稍长很容易致使样品凝固，不易操作;浸出法耗时过长;磁力搅拌法对磁力搅拌器的功率有较高的要求（200g样品+600mL溶剂大约600g重），因此，选用振荡法制备较好。稀奶油为液态乳化状或固态，脂肪含量在10%80%，水含量较高，依照奶油（黄油）制备试验分别采用破乳、浸出、振荡和磁力搅拌四种提取方法，四种方法间的差异以及试样制备及酸价的结果见表6。表6 稀奶油提取试验中4种提取方法及试验结果对比试验组A组B组C组D组制备方法破乳法浸出法振荡法磁力搅拌法样品重量200200200200融化温度5

34、0，505050破乳80，60分钟/提取溶剂无法破乳，停止试验3倍体积石油醚(3060)3倍体积石油醚(3060)3倍体积石油醚(3060)提取时间/12h100次/分，2h无法搅拌，停止试验旋蒸/是是/油脂收率（%）/27.728.4/酸价（mg/g）*1/0.7420.790/2/0.7590.774/平均/0.750.78/变异系数（%）/2.32.0/注：酸价是以样品所提取的油脂作为试样计算。由表6可知，稀奶油样品无法使用破乳法和磁力搅拌法制备，浸出法和振荡法提取油脂收率和酸价无显著差异，油脂收率大约为33%，与样品标签上标识的脂肪含量30%相符，相比之下，采用振荡法更易操作且时间更短

35、。综上所述，奶油（黄油）和稀奶油的制备方法为：取代表性试样100 g200 g(样品酸价0.3 mg/g1 mg/g，需要称量油脂试样40g，按奶油油脂收率50%和稀奶油油脂收率20%计算，需要100 g200 g)，置于广口瓶中。密塞，放入50 60 电热恒温干燥箱中加热融化，加入4倍体积石油醚，用玻璃棒搅拌混匀后密塞，置于往返式振荡器上振摇2 h，振荡频率为100次/min。取出溶液及样品，置于50 mL离心管中，于8 000 r/min 离心分离5 min，取上清液置于水浴温度不高于40 的旋转蒸发仪内，负压条件下，将其中的溶剂彻底旋转蒸干，取残留的液体油脂作为试样。若残留的油脂浑浊，将

36、提取液转移至离心管中，8 000 r/min离心分离5 min，取上清液作为试样。若残留的油脂中含有的水分无法通过离心除去，可按每10 g油脂加入1 g 2 g 的比例加入无水硫酸钠，振荡混合吸附脱水，再次8 000 r/min离心5 min分离，取上清液作为试样。(2) 试样溶解用溶剂考察现行国内外标准中酸价测定常用的溶剂为乙醚-异丙醇混合溶液（乙醚+异丙醇=1+1）和乙醚-乙醇混合溶液（乙醚+乙醇=1+1），因此选取这两种溶液作为油脂试样溶解用溶剂考察。溶剂过量或过少可能在溶液中产生浑浊和分层现象，影响酸碱指示剂法滴定终点的颜色变化；其次考虑适合的标准滴定溶液使用量，根据手动和电位滴定管规

37、格及节约试剂及溶剂的需要，滴定液的消耗体积以不超过10 mL为宜。试验选取氢氧化钠标准滴定溶液（0.1mol/L）10 mL，考察两种溶剂与标准滴定液的互溶性，结果见表7。由表7可知，溶剂的用量至少为60 mL才能确保滴定过程中液体始终不会产生分层，拟定溶剂的最低用量为60 mL。表7 两种溶剂的最低用量考察溶剂名称40mL50mL60mL70mL乙醚-异丙醇混合溶液分层分层不分层不分层乙醚-乙醇混合溶液不分层不分层不分层不分层参考ISO660及GB/T5009.229标准，油脂样品的称样量为1.0g20g。称取约20g有代表性的油脂，分别考察60mL和80mL乙醚-异丙醇混合溶液（乙醚+异丙

38、醇=1+1）和乙醚-乙醇混合溶液（1+1）在常温下对油脂的溶解情况，结果见表8。由表8可知，两种溶剂均不能在常温下溶解棕榈脂肪粉和氢化脂肪，这是由于棕榈脂肪粉和氢化脂肪熔点很高，在常温下呈固体状态，即便热熔后使用溶剂快速溶解，等温度降到常温后仍会有油脂析出，因此这两类产品不适于冷溶剂滴定的方法。此外，乙醚-乙醇混合溶液（1+1）不能溶解奶油、稀奶油和大豆磷脂油，因此选择乙醚-异丙醇混合溶液（1+1）为冷溶剂滴定方法（冷溶剂指示剂滴定法冷溶剂指示剂法和冷溶剂电位滴定法冷溶剂电位滴定法）样品的溶剂。表8 常温下两种溶剂对样品的溶解情况样品名称乙醚-异丙醇混合溶液（1+1）乙醚-乙醇混合溶液（1+1

39、）60mL80mL60mL80mL大豆油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解米糠油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解玉米油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解菜籽油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解鸡油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解猪油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解鱼油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解鱿鱼油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解鳀鱼油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解辣椒油完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解奶油完全溶解完全溶解析出沉淀析出沉淀稀奶油完全溶解完全溶解析出沉淀析出沉淀大豆磷脂油完全溶解完全溶解析出沉淀析出沉淀棕榈脂肪粉上层析出油脂上层析出油脂上层析出油脂上层析出油脂氢化脂肪上层析出油

40、脂上层析出油脂上层析出油脂上层析出油脂为了考察热溶剂法（热溶剂指示剂滴定法）的溶剂的溶解性能，分别选取棕榈脂肪粉和氢化脂肪，考察60mL 乙醇在 70下试样的溶解情况，结果见表9。由表9可知，棕榈脂肪粉和氢化脂肪在70均能被乙醇溶解，因此标准选择乙醇为热溶剂法（热溶剂指示剂滴定法）试样的溶剂。表9 70下乙醇对样品的溶解情况样品名称溶解情况棕榈脂肪粉完全溶解氢化脂肪完全溶解(3)滴定液的考察酸价滴定常用的滴定液有氢氧化钠标准滴定溶液和氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液，如GB 5009.229-2016、GB/T5510-2011均使用氢氧化钾或氢氧化钠标准滴定溶液，NY/T 2333-2013使用氢

41、氧化钾-乙醇滴定溶液，GB/T14415.5-2008使用氢氧化钠标准滴定溶液和氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液，由于GB/T 601-2016 化学试剂 标准滴定溶液的制备收录的是氢氧化钠标准滴定溶液和氢氧化钾乙醇标准滴定溶液，因此选取氢氧化钠标准滴定溶液和氢氧化钾乙醇标准滴定溶液作为考察对象。(4)指示剂的考察酸价滴定常用指示剂分别有酚酞、百里酚酞和碱性蓝6B三种指示剂，指示剂的变色范围见表10。表10 指示剂的变色范围指示剂变色范围颜色变化酚酞指示剂8.310.0酸性和中性无色，碱性紫红色百里香酚酞9.410.6无色变为蓝色碱性蓝6B9.414.0酸性显蓝色，中性显紫色，碱性显淡红色碱性蓝6B

42、指示剂的配制方法有两种，一种是称取2g碱蓝6B，加乙醇100mL溶解即可（冷溶法，参考GB 5009.229-2016）；另一种是称取1g碱蓝6B加入到50mL煮沸的乙醇中，水浴中回流1h,冷却后过滤（热溶法，参考GB/T264-83）。试验过程中发现热熔法要比冷溶法配制的碱性蓝6B指示剂灵敏度更好。图1是相同条件下分别采用当日配制的冷溶法和热熔法碱性蓝6B指示剂在相同的使用量（4滴）下滴定米糠油样品终点时的颜色对比，由图1可知热溶法制备的碱性蓝6B指示剂能正确显示中性环境下的紫色，而冷溶法制备的碱性蓝6B指示剂则显示为样品溶液本身显示的黄色（即使严重滴定过量也无法变为紫色或红色）。图1 米糠

43、油采用两种方法配制的碱性蓝6B指示剂的指示终点颜色对比项目组对比了酚酞指示剂、百里香酚酞指示剂和采用热熔法配制的碱性蓝6B指示剂储存不同时间对酸价滴定结果灵敏度的影响，结果分别见表11表13。由表11和表12可知，酚酞指示剂和百里香酚酞指示剂在储存期3个月内稳定性较好，有效期定为3个月比较合适；由表13可知，碱性蓝6B指示剂在储存2个月时已经不能很好的指示米糠油样品滴定终点时的颜色变化，有效期定为1个月比较合适。表11 酚酞指示剂储存时间对酸价滴定结果灵敏度的影响油脂样品当日新配1个月2个月3个月大豆油灵敏灵敏灵敏灵敏玉米油灵敏灵敏灵敏灵敏鸡油灵敏灵敏灵敏灵敏表12 百里香酚酞指示剂储存时间对

44、酸价滴定结果灵敏度的影响油脂样品当日新配1个月2个月3个月大豆油灵敏灵敏灵敏灵敏玉米油灵敏灵敏灵敏灵敏米糠油灵敏灵敏灵敏灵敏表13 碱性蓝6B指示剂（热熔法配制）储存时间对酸价滴定结果灵敏度的影响油脂样品当日新配1个月2个月3个月大豆油灵敏灵敏灵敏不灵敏玉米油灵敏灵敏灵敏不灵敏米糠油灵敏灵敏不灵敏完全不能使用项目组选择具有代表性的油脂分别考察了氢氧化钠标准滴定溶液（0.1mol/L）和氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液（0.1mol/L）以及酚酞、百里酚酞和碱蓝6B三种指示剂对酸价测定的影响，结果见表14。由表14可知，浅色油脂选用氢氧化钠标准滴定溶液和氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液均可，三种指示剂变色均

45、灵敏，由于酚酞指示剂变色范围的最低pH值最接近中性（8.3，见表10），因此，浅色油脂滴定的指示剂首选酚酞指示剂；米糠油、菜籽油、鱼油等略深色的油脂选用氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液和百里香酚酞指示剂，滴定终点判定灵敏；辣椒油、鱿鱼油和鳀鱼油等深色油脂使用两种滴定液和三种指示剂均不灵敏，不适宜采用冷溶剂指示剂滴定方法。表14 不同指示剂的滴定样品名称滴定液油脂颜色酚酞指示剂百里香酚酞碱蓝6B终点颜色是否灵敏终点颜色是否灵敏终点颜色是否灵敏大豆油氢氧化钠黄色紫红是蓝色是红色是氢氧化钾-乙醇黄色紫红是蓝色是红色是玉米油氢氧化钠浅黄紫红是蓝色是红色是氢氧化钾-乙醇浅黄紫红是蓝色是红色是菜籽油氢氧化钠深棕

46、红色否蓝色否灰棕否氢氧化钾-乙醇深棕棕黄否蓝色是灰棕否米糠油氢氧化钠深棕红色否蓝色否灰棕否氢氧化钾-乙醇深棕棕黄否蓝色是灰棕否辣椒油氢氧化钠棕色棕色否蓝色否褐色否氢氧化钾-乙醇棕色棕色否蓝色否褐色否猪油氢氧化钠浅黄紫红是蓝色是红色是氢氧化钾-乙醇浅黄紫红是蓝色是红色是鸡油氢氧化钠浅黄紫红是蓝色是红色是氢氧化钾-乙醇浅黄紫红是蓝色是红色是鱼油氢氧化钠棕色浅黄否蓝色是灰棕否氢氧化钾-乙醇棕色浅黄否蓝色是灰棕否鱿鱼油氢氧化钠棕色浅黄否蓝色否灰棕否氢氧化钾-乙醇棕色浅黄否蓝色否灰棕否鳀鱼油氢氧化钠黑棕黄棕否蓝色否灰棕否氢氧化钾-乙醇棕色黄棕否蓝色否灰棕否奶油氢氧化钠黄色紫红是蓝色是红色是氢氧化钾-乙醇

47、黄色紫红是蓝色是红色是稀奶油氢氧化钠黄色紫红是蓝色是红色是氢氧化钾-乙醇黄色紫红是蓝色是红色是 (5)水相和非水相电极对电位滴定的影响酸碱中和滴定常用的电极是玻璃-饱和甘汞电极，它是以玻璃薄膜为电极，以饱和甘汞电极作为参比电极。目前，复合pH玻璃电极应用已十分广泛，它将指示电极和参比电极组装在一起，使用起来更方便。复合pH玻璃电极根据使用介质又可分为水相和非水相电极，油脂样品的溶剂都是乙醚和异丙醇等电导率较低的有机相溶液，非水相电极的玻璃隔膜为圆球形，比表面积很大，且隔膜为可移动的套管式隔膜，能够确保在这类低电导溶液中响应快速且测量值稳定。项目组分别选用瑞士万通非水相玻璃-饱和甘汞电极（以下简

48、称非水相电极，型号：6.0229.100）和瑞士万通水相玻璃-饱和甘汞电极（以下简称水相电极，型号：6.0223.100），以mv作为测量值，进行验证试验，结果见表15。由表15可知，四种油脂采用两种电极测定的酸价的结果均比较接近，但水相电极测得结果的精密度（绝对差值/算术平均值以及RSD）远大于非水相电极，且大豆油、米糠油和猪油测定值的绝对差值/算术平均值10%,RSD4%，表明采用水相电极测定的结果的可靠性较差。表15 两种电极测定油脂中酸价的结果对比样品名称电极酸价值（mg/g）*绝对差值/算术平均值（%）RSD(%)1234平均值大豆油非水相0.6600.6640.6520.6590.

49、661.80.8水相0.6530.6110.6860.6490.6511.54.7米糠油非水相3.583.603.713.613.63.60.7水相3.323.633.703.693.610.65.0猪油非水相2.982.892.933.023.04.31.9水相2.753.332.933.243.118.78.8稀奶油非水相0.5350.5320.5370.5390.541.30.6水相0.5440.5360.5660.5690.565.92.7*绝对差值/算术平均值是取每组中绝对差值最大的两次。图2图9为四种油脂采用两种电极滴定的滴定曲线（电压值-滴定体积实时变化曲线）的图片，可知非水相电

50、极的滴定曲线滴定突跃点（EP1）所对应的电压变化的一阶导数图（图中红线）顶点更尖锐，即突跃点更易识别。 图2 大豆油水相电极滴定曲线 图3 大豆油非水相电极滴定曲线 图4 米糠油水相电极滴定曲线 图5 米糠油非水相电极滴定曲线 图6 猪油水相电极滴定曲线 图7 猪油非水相电极滴定曲线 图8 稀奶油水相电极滴定曲线 图9 稀奶油非水相电极滴定曲线 项目组又采用pH值作为测量值作对比试验，所得结果见表16和图10图17。表16 两种电极对油脂酸碱中和滴定测量值及稳定性的影响（pH-滴定体积实时变化曲线）样品名称电极酸价值（mg/g）*绝对差值/算术平均值（%）RSD(%)1234平均值玉米油非水相

51、0.6490.6650.6590.6620.662.41.1水相0.6420.6770.6890.6520.667.13.3米糠油非水相3.783.723.713.693.72.41.0水相3.413.873.463.593.610.65.8猪油非水相2.812.852.762.792.83.21.3水相3.073.222.943.313.111.95.2稀奶油非水相0.5510.5430.5410.5450.541.90.8水相0.5290.5540.5570.5430.555.12.3*绝对差值/算术平均值是取每组中绝对差值最大的两次。 图10 玉米油水相电极滴定曲线 图11 玉米油非水相

52、电极滴定曲线 图12 米糠油水相电极滴定曲线 图13 米糠油非水相电极滴定曲线 图14 猪油水相电极滴定曲线 图15 猪油非水相电极滴定曲线 图16 稀奶油水相电极滴定曲线 图17 稀奶油非水相电极滴定曲线由表16可知，采用两种电极测定的四种油脂酸价的平均值结果均比较接近，但水相电极测得结果的精密度（绝对差值/算术平均值以及RSD）远大于非水相电极，采用水相电极所测得的结果的可靠性较差。由图10图17可知非水相电极的一阶导数图顶点更尖锐，即突跃点更易识别。由此可知，水相电极用来测定玉米油等只有一次pH突跃且样品提炼简单基质对滴定无较大干扰的油脂尚可，对于米糠油、稀奶油、猪油等滴定过程中存在多次

53、pH突跃或油脂提炼过程较复杂的样品难以确保滴定结果的准确性。因此，电位滴定需采用非水相专用复合pH电极或性能相当的电极。再对比表14和表15以及图2图17可知，相同电极采用电位值（mV）和pH值对检测结果没有显著影响，但对于米糠油等可能会在滴定中出现多个突跃点的样品，采用pH值作为测量值可以方便滴定过程中以pH值辅助滴定终点的判定。(6)电位滴定法滴定方法考察样品滴定方法考察不同厂家的电位滴定仪对酸碱滴定的测定的参数设置不同，即便同一厂家采用不同的电极所设定的参数也不尽相同。项目组调研了国内使用较多的几种电位滴定仪的仪器性能参数以及推荐的酸价滴定的方法参数，分别见表17和表18。表17 5种电

54、位滴定仪的仪器性能参数型号916Orion Star T910G20SZDJ-5BZDJ-3D生产厂商万通赛默飞梅特勒上海雷磁北京先驱威锋测量范围pH值：0.0020.00 电位：-2000+2000mvpH值：2.0020.00 电位：-2000+2000mvpH值：020.00 电位：-2000+2000mvpH值：0.0020.00 电位：-2000+2000mvpH值：020.00 电位：-2000+2000mv分辨率pH值：0.001；电位：0.1mvpH值：0.001；电位：0.1mvpH值：0.001；电位：0.1mvpH值：0.001；电位：0.01mvpH值：0.01；电位：

55、0.1mv测量精度0.2mv0.2mv0.2mv0.2mv0.2mv滴定管分辨率1/80001/200001/200001/200001/20000滴定体积精度0.1l0.1l0.1l0.1l0.625l测量模式动态滴定、等量滴定动态滴定、等量滴定动态滴定、等量滴定动态滴定、等量滴定动态滴定、等量滴定*阈值通常设定为等当点处一阶导数最大值的50%80%。表18 厂家推荐的酸价滴定方法参数型号916Orion Star T910DL50ZDJ-5BZDJ-3D生产厂商万通赛默飞梅特勒上海雷磁北京先驱威锋滴定模式动态滴定动态滴定动态滴定动态滴定等量滴定最小滴定体积（mL）0.0100.0100.0

56、100.0500.050 最大滴定体积（mL）0.1000.2000.100最大0.2 信号漂移值（mV/min）5030503030电位评估值（突跃量）（mV）50405030 30 阈值*/200/300等当点个数51049591515等当点确认最大值最大值最大值最大值最大值项目组采用的仪器为万通916型电位滴定仪，采用表18中的916型仪器的方法作为滴定方法进行滴定试验，所得的pH-滴定体积滴定曲线见图18图30。 图18 玉米油电位滴定曲线 图19 米糠油电位滴定曲线 图20 菜籽油电位滴定曲线 图21 辣椒油电位滴定曲线 图22 鸡油电位滴定曲线 图23 猪油电位滴定曲线 图24 鱼

57、油电位滴定曲线 图24 鱿鱼油电位滴定曲线 图25 奶油电位滴定曲线 图26 稀奶油电位滴定曲线 图27 米糠电位滴定曲线 图28 大豆磷脂油电位滴定曲线 图29 蚕蛹粉电位滴定曲线 图30 鸡肉粉电位滴定曲线在电位滴定刚开始的阶段（0.2mL前）由于系统还未稳定，会出现pH值先降后升的现象（见图31）或有一次突跃（见图32）而产生一个较大的一阶导数峰（等当点），有时这个等当点的峰值会大于滴定终点所对应的等当点的峰值（图28，EP7为滴定终点）造成误判（许多电位滴定方法默认等当点判定方法是取一阶导数曲线最大峰值），因此，在滴定方法中设置预滴定体积0.2 mL以避免该处突跃的影响。许多样品会因有

58、多个突跃导致出现多个等当点（图19，图28等），即便同一基质，不同的电位评估值（或阈值）也可能产生不同的等当点，滴定终点的判定方法一般是选取峰值最大的等当点，如果电位滴定的参数设置不当（比如等当点数量太少，阈值太小或太大），会出现仪器未到理论滴定终点前即终止滴定或误判其他等当点为滴定终点，参照表10 中三种指示剂开始变色的pH值范围（因滴定采用的是非水相电极，和水相电极测定的pH值有一定的差异），采用以“pH突跃”产生的起点最符合或接近于pH 7.59.5 范围的等当点为滴定终点（酚酞指示剂变色的起始pH为8.3，百里香酚酞变色的起始pH为9.5）；若在一个“pH突跃”上产生多个等当点，以峰值

59、最大的等当点作为滴定终点。图28和图33为同一次试验的滴定曲线图和滴定结果图，可知前6个等当点(EP1EP6)所对应的pH均小于7，此时溶液为酸性环境显然不应是滴定终点，第7个等当点（EP7）所对应的pH接近7.5且一阶导数曲线峰值大于第8个(EP8)和第9个(EP9)，因此，选第7个等当点为滴定终点，即滴定体积V=6.2264 mL,同时，在滴定开始时向溶液中加入了3滴百里香酚酞指示剂，溶液变色时滴定体积在6.28mL左右，也佐证了该点是滴定终点。图31 电位滴定开始阶段（米糠油）图32 电位滴定开始阶段（玉米油）图33大豆磷脂油电位滴定结果（与图28为同一次试验） 空白试验的滴定方法选择采

60、用冷溶剂指示剂滴定法滴定时，空白试验所测得的滴定体积结果见表19。由表19可知，采用两种滴定液和两种指示剂所测得的空白试验滴定终点体积均比较稳定，体积值在0.12mL0.25mL。表19 冷溶剂指示剂滴定法空白试验滴定终点体积试验编号滴定液指示剂终点体积（mL）1氢氧化钠（c=0.0984mol/L）酚酞0.1420.1330.124百里香酚酞0.1950.1760.207氢氧化钾-乙醇（c=0.0965mol/L）酚酞0.1580.1490.1510百里香酚酞0.22110.24120.25表20为使用较多的5种电位滴定仪空白试验的推荐参数。项目组使用万通916电位滴定仪，以100 mL乙醚