体内药物分析中的样品预处理技术

1、体内药物分析中的样品预处理技术体内药物分析是指体内样品（生物体液、器官或组织）中药物及 其代谢产物或内源性生物活性物质的定量分析。通常药物进入体内后，其化学结构与存在状态就可能发生显著变 化。在体液中，药物的存在形式多样化，除游离型的原料药物或其代 谢物，也有原形药物或其代谢物与葡萄糖醛酸等内源性小分子经共价 结合的结合物（或缀合物），还有与蛋白质分子经氢键及其他分子间 力结合的结合型药物；而且药物及其代谢物的浓度通常很低、干扰物 质多。因此，在测定时，除少数情况将体液作简单处理后可直接测定 外，通常在测定前要对体内样品进行分离净化与浓集等样品前处理， 从而为体内样品中药物的测定提供良好的环境

2、和条件。常用的样品前 处理方法有：去除蛋白质、缀合物水解、化学衍生化、分离浓集及微 波萃取和微透析技术等。一、体内样品种类：体内药物分析采用的体内样品包括血液、尿液、唾液、头发、脏 器组织、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、 粪便等样品。这些大都具有：采样量少；待测物浓度低；干扰 物质多的特点。二、体内样品预处理的目的：使待测药物游离，以便测定药物或代谢物的总浓度；满足测量方法的要求，纯化浓集样品；保护仪器性能、改善分析环境。三、常用生物样品预处理技术:1有机破坏法：湿法破坏：电热消化器法、电热板消化法、烘箱消化法干法破坏：高温电阻炉灰化法、低温等离子灰化法氧瓶燃烧法2去蛋白

3、质法：溶剂解法（加入与水相混溶的有机溶剂）、加入中性盐、加入强 酸、加入含锌盐或铜盐的沉淀剂、超滤法、酶水解法、加热法分离、纯化和浓集法：液-液萃取法、固相萃取法缀水物的水解法：酸水解法、酶水解法化学衍生化发：硅烷化、酰化、烷基化、紫外衍生化、荧光衍生化、点化学衍 生化、生成非对映异构体衍生化发四、新兴生物样品预处理技术：1微波消解2自动化固相萃取3固相微萃取4液相微萃取5微透析技术超临界流体萃取分子印迹固相萃取这里就固相微萃取技术和超临界流体萃取技术进行简单说明：固相微萃取固相微萃取(Solid phase micro2-extraction,SPME)是 80 年 代末发展起来的样品预处理

4、方法，其装置简单，操作方便，已实现 自动控制，适用于现场分析。它用一个类似于气相色谱微量进样器的 萃取装置，从样品中萃取出待测物质，并直接与气相色谱(GC)或高 效液相色谱(HPLC)联用，在进样口(GC即为气化室)将萃取的组分 解吸附后进行色谱分离检测。SPME集萃取、浓缩、进样于一身，极大地提高了分析速度。萃 取模式可分为直接固相微萃取(Direct-SPME)和顶空固相微萃取 (Headspace-SPME,HS-SPME)两种。Direct-SPME 将涂有高分子固相 液膜的石英纤维直接伸入样品基质中进行萃取，经过一定时间达到 分配平衡，即可取出进行色谱分析HS-SPME则将石英纤维放

5、在样品 溶液上方进行顶空萃取，避免了基质的干扰，提高了分析速度。HS-SPME在体内分析中能克服其它物质的强烈干扰，对生物样 品的分析步骤少于Direct-SPME法，并能延长石英纤维的使用寿命。 Fustinoni等用HS-SPME法测定人血液及尿液中的苯和甲苯含量, 方法是：将2 ml血样与1 g NaCl加入密封瓶中，在40 C下平衡 30分钟，用涂有聚二甲基硅氧烷的石英纤维进行顶空萃取，从GC 进样口直接进样。GC采用内填DB1的熔融硅石英柱，载气为He气, 用程序升温法进行分析，校正曲线范围：12 ng/卜5以g/L ,实验 结果的RSD为1 %9 %。体液的背景干扰很小。但HS-S

6、PME也有 其局限性，一般只能萃取沸点较低的药物。目前设计出的一种中空纤 维膜，能从复杂的生物基质中萃取出高沸点的待测物，有望克服应 用范围窄的不足。 超临界流体萃取技术超临界流体(SF)是指温度与压力均在其临界点之上的流体。在 研究过的超临界流体体系中,CO2因其价廉无毒，应用最为广泛。超临 界流体同时表现出液体与气体的优点，既有与液体相近的密度，又 有与气体相近的粘度及高的扩散系数。故具有很高的溶解能力和良好 的流动、传递性能，可代替传统的有毒、易挥发、易燃的有机溶剂。 超临界流体萃取技术(Supercritical fluid extraction, SFE)对热 敏感物质和复杂样品中微

7、量组分萃取的有效性已引起人们关注，日 前已用于体内分析。SFE的装置主要是有一个在头部可进行冷却的注射(或往复) 泵，用泵把液态SF压到一个萃取池中；萃取池为一置于恒温箱中的 不锈钢圆筒，恒温箱温度需高于SF的临界温度；在萃取池后有一个 限流器。为保证萃取系统中有一定的压力，限流器常用一支内径为 50 Lm的弹性石英毛细管。在采用SFE进行萃取时，为增加溶剂的 选择性，可加入各种1 %10 %的极性改性剂，如甲醇、异丙醇、 乙睛、二氯甲烷、甲酸等。Allen等分别用SFE与固相萃取(SPE)法测定了全血中的吗啡 含量，并对两种方法的检测结果加以比较。用SFE萃取时，以超临界叫为流动相，加入30

8、0p L甲醇-三乙胺(13:7)溶液做为改性剂, 流速2 mL/min,然后进行衍生化；另一份血样先加入0.1 mol/L的 磷酸盐缓冲液1mL和NH4OH溶液50 p L,用先经乙烷处理的SCX固 相小柱萃取，再同样进行衍生化。萃取后待测组分用GC-质谱(M S) 法分离检测。与SPE法相比，SFE具有萃取效率高、速度快、选择 性好、萃取过程易于控制，萃取物易与CO2分离的优点。Simmons等 采用SFE技术从血清和水中萃取苯并二氮杂卓类药及同化类药物 (anabolic drug),再用HPLC定量分析。与液-液萃取(LLE)和SPE 的实验结果相比，使用SFE时，其回收率、精密度均有很大提高，且 LLE需使用大量有机溶剂，而SFE技术所用超临界CO2消耗少，无毒 副作用。应用展望：SPME与SFE技术作为快捷安全、易于实现自动化的新型样品 预