辅酶Q对SHR大鼠的降血压效应观察的论文

1、.：.；辅酶Q对SHR大鼠的降血压效应的察看徐呈 兰晓曦 庞文璟 解轶声 林盟菲 孟晋 方原 吴贻明级法文班指点教师：李稻摘要 目的：探求、比较单用辅酶Q以及辅酶Q与拉贝洛尔结协作用对SHR大鼠的血压升高的抑制或降压的作用，并对辅酶Q的降血压机制进展初步讨论。 方法：实验组：SHR大鼠只，每天灌辅酶Q mg/day；对照组：SHR大鼠只，每天灌等剂量生理盐水。喂药前，测血压并采血一次，喂药开场后每间隔五天测一次血压、心率，喂药后十五天剪尾采血。第十六天先测定血压，然后注射拉贝洛尔，min后再测血压。动物麻醉处死，心脏采血，并取心脏称重。血清学检测目的：超氧化物歧化酶SOD，丙二醛MDA。 结果

2、：实验组动物在辅酶Q 灌胃十五天后，血压与对照组比较有显著的下降p.。注射剂量为正常最小剂量的四分之一拉贝洛尔后，实验组动物血压降低效应比对照组更明显。但血清学目的SOD、MDA均无明显改动。 结论：辅酶Q有明显的降血压作用，但其降血压机制能够与抗脂质过氧化作用无关。另外，长时间服用辅酶Q能减少普通抗高血压药物的运用剂量而到达降压效果。关键词 高血压 ；辅酶Q ；拉贝洛尔 ；脂质过氧化Abstract Objective: to compare the hypotensive effect (inhibition of the development of blood pressure) of

3、 Coenzyme Q (CoQ) and CoQ+ Labetalol on spontaneous hypertension rats (SHR). Method: SHR were divided into two groups. We collected blood samples from each of rat . Study group: administration of CoQ (mg/day); control group: placebo (physiological saline), for days. We measured Bp and Hr every days.

4、 th day: collection of the second blood sample. th day: measurement of Bp and injection of Labetalol and minutes later, we measure Bp. We anesthetized the rats, collected the third blood sample from heart and weigh rats hearts. Serumal items: SOD and MDA. Results: after days administration, Bp of th

5、e rats in study group dropped significantly (p.) while that of control group were unchanged. After the injection of one-forth of the minimum dose of labetalol, Bp of the rats in study group dropped more rapidly than that of control group. But the concentration of the items in serum didnt change grea

6、tly. Conclusion: CoQ has a hypotensive effect. It can protect the high risk people and reduce the dose of regular medication (hypotensor). The mechanism of CoQ is independent from its role in anti-lipid peroxydation. Key Word idiopathic hypertension; Coenzyme Q; Labetalol; lipid peroxydation 高血压是一种常

7、见、多发病，原发性高血压的病因不详，与遗传要素和环境要素亲密相关，对高血压高危人群的防治任务尤为重要。然而传统的抗高血压治疗主要是控制血压，不能对因治疗，一直不能到达理想效果，也不能起到预防作用，所以需求不断探求新的维护、降压的途径。上世纪年代，人们就曾经发现了辅酶Q对于高血压有一定的治疗意义。有实验提示虽然辅酶Q不会大幅度降低血压，但是可以延伸降压药物对血压控制的时间延伸两倍，因此提出辅酶Q可以降低其他降压药的运用频率，并具有较好的协同作用。但是，目前为止，对于辅酶Q的降压和协同机制，仍没有定论。新近发现脂质过氧化反响能够参与了高血压发生和开展的病理过程。脂质过氧化作用及其产物可以对细胞产生

8、损害，使外周血管阻力升高，诱发高血压。同样有研讨阐明，辅酶Q具有较好的抗脂质过氧化的作用。本实验利用血压未达平台期普通在十八周龄的SHR大鼠模拟高血压高危人群，复制辅酶Q降压的动物模型，讨论其降血压的能够机制，以及辅酶Q与肾上腺素、受体阻断剂拉贝洛尔结协作用对降低血压的疗效察看，探求协同用药的新途径。资料与方法动物分组与血清制备研讨对象 SHR大鼠只，雄性，十六周龄；正常WKY大鼠只，雄性，十六周龄。大鼠均由中国科学院上海动物实验中心提供且来源于同一窝，体重相近。SHR大鼠初始血压均接近于高血压的平台期，正常WKY大鼠血压正常。测根底血压 先将大鼠置于恒温箱中预热- min，取出置于大鼠固定网

9、套中，放入已预热的血压计固定箱中，由实验人员经过留出鼠尾测定血压大鼠血压计型号：B型RBP大鼠血压计。在延续三天测定血压的根底上，取第二天和第三天的血压均值作为根底血压。配对方法 大鼠标号，按其接近血压平台期的程度进展配对，再用随机数法将其分至实验组和对照组。实验组：、；对照组：、。血样采集与血清制备 第一次摘动物眼球取血，采血量约. ml；第二次为剪尾采血，采血量约. ml；第三次在动物麻醉条件下心脏采血，采血量约. ml。采集的血液待凝固后，转min离心，取上层血清。将制备得到的血清置于eppendorf管中，-保管备用。动物降压实验辅酶Q降压实验 在测定根底血压之后，先采集第一次血样，然

10、后每天中午给大鼠灌胃。实验组每只大鼠每日灌药量为mg辅酶Q溶解于ml生理盐水；对照组灌等量的生理盐水。延续灌胃天。其间，一切大鼠每天测定一次血压、心率在当日灌胃之前。第天，一切大鼠剪尾取血、分别血清。联用拉贝洛尔实验 将实验组和对照组大鼠分别置于恒温箱中预热min后，依次测其血压。然后肌肉注射拉贝洛尔拉贝洛尔.mg，用生理盐水稀释到.ml，注射终了放入恒温箱，立刻计时。分钟后，测定其血压。处死，心脏取血、称重 大鼠腹腔注射%戊巴比妥钠. ml麻醉。翻开胸腔，进展心脏采血，分别血清并保管。用镊子小心提起心包膜，用眼科剪剪开，再用镊子夹住心尖提起心脏，剪断相连的动静脉，取下心脏。沿上下腔静脉、肺动

11、静脉、自动脉分别剪开心房、心室，洗净其中的血液及血凝块。修剪动静脉口，使其与心肌壁相平。将心脏放在吸水纸上枯燥min。分析天平称重。血清学目的检测 实验组和对照组三次采集和制备的血清于同一天进展SOD，MDA检测试剂盒均购自南京建成生物工程研讨所。SOD检测方法配制试剂试剂一：将A试剂ml加蒸馏水稀释至ml；试剂二：为B试剂ml；试剂三：为C试剂ml；试剂四：将D试剂.ml用ml 稀释液:稀释；试剂五：粉剂A加-热双蒸水ml溶解；试剂六：粉剂B加蒸馏水ml溶解；显色剂配制：按照试剂五: 试剂六:冰乙酸=:的体积比配成避光操作。 测定操作试剂测定管对看管试剂一ml.样品l蒸馏水l试剂二ml.试剂

12、三ml.试剂四ml.用漩涡混匀器充分混匀，置恒温水浴分钟显色剂ml混匀，室温放置分钟，于波长nm处，cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色计算SOD活力U/ml=(对看管吸光度-测定管吸光度)/对看管吸光度%反响体系的稀释倍数样本测试前的稀释倍数MDA检测方法配制试剂试剂一：将A试剂ml适当水浴加温至溶解透明；试剂二：将B试剂m加ml双蒸水混匀；试剂三：将粉剂C参与到-的热双蒸水ml中，充分溶解后用双蒸水补足至ml，再加冰醋酸ml混匀；规范品：为nmol/ml四乙氧基丙烷ml。测定操作规范管规范空白管测定管测定空白管nmol/ml规范品(l)无水乙醇(l)测试样品(l)试剂一(l)混匀试剂二(ml)

13、试剂三(ml)%冰醋酸(ml)漩涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小孔，水浴分钟，取出后流水冷却，然后-转/分，离心分钟。取上清，于波长nm处，cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色计算MDA含量(nmol/ml)=测定管吸光度-测定空白管吸光度/规范管吸光度-规范空白管吸光度规范品浓度样本测试前稀释倍数数据统计 运用SPSS .统计软件进展统计分析，以p.作为有显著差别，p.作为有非常显著差别。血压变化作配对T检验。血清学目的进展组间、组内对比，作独立样本T检验。结 果辅酶Q的降压效果察看 实验组动物延续服用辅酶Q 天，对照组动物服用抚慰剂生理盐水天内，动物血压如下图。经统计处置，显示

14、实验组血压明显下降(p.)，对照组血压无明显变化图-A。实验组和对照组动物血压变化量也具有明显差别(p.)(图-B)，阐明辅酶Q对SHR大鼠具有明显的降血压作用，并推迟其血压到达平台期的时间。A 延续灌胃天内，大鼠血压变化量的比较 (n=)。以根底血压为零，用Bpn-Bp的变化量来表示降压效果。用配对t检验的方法比较两组之间血压变化量，p.。B 延续灌胃天内，大鼠血压的变化n=。用配对t检验的方法分别比较实验组动物和对照组动物服药前后的血压。实验组：p.，阐明辅酶Q有降血压作用。 图 辅酶Q延续灌胃过程中两组大鼠血压的变化比较酶Q对心脏的作用 辅酶Q延续灌胃天内，实验组与对照组大鼠心率如表所示

15、，比较两组心率，没有明显差别图。处死动物后，称大鼠心重表，两组比较，差别不明显图。延续灌胃天内，大鼠血压的变化n=的本身比较。随着时间变化，实验组大鼠的血压随着辅酶Q的服用，血压有着明显的下降趋势，而对照组的趋势依然是上升的延续灌胃天内，大鼠血压的变化n=的组间比较。随着时间的变化，在正常对照组血压不变的情况下，实验组与对照组相比，血压有着明显下降。CD 表服药天内大鼠心率(次/分)study groupcontrol groupRbRbRbRbRbRb(day )(day )(day )(day )(day )(day )图延续灌胃天内，大鼠心率变化次/分n=用配对t检验分别比较实验组大鼠和

16、对照组大鼠服药前后的心率，p.，阐明辅酶Q对大鼠心率没有明显作用。表 服药天后大鼠心重(g)study groupcontrol group.由于实验组大鼠死亡只，对照组死亡只，故只能做对配对t检验，p.,阐明辅酶Q对心脏负荷也无明显作用。图 延续灌胃天后，两组大鼠心重比较 (n=). 辅酶Q和拉贝洛尔的结协作用 确定拉贝洛尔注射剂量实验。先测定了正常最小剂量.mg对SHR大鼠的时效曲线图，然后，采用正常最小剂量的四分之一量察看拉贝洛尔min的降压效应图，并将注射拉贝洛尔.mg作为与辅酶Q连结合用药剂量，min后丈量血压比较两组的降血压效果。在辅酶Q延续灌胃天后，肌肉注射拉贝洛尔.mg，测大鼠

17、血压变化见表、图。从图中可以看出实验组大鼠血压下降幅度大于对照组大鼠，这阐明辅酶Q和拉贝洛尔联用时，能起到协同作用(但因动物数量较少，故未作统计学处置，只做景象察看)。图 /正常最小剂量拉贝洛尔对SHR大鼠的时效曲线。可察看到大鼠血压较稳定地下降，因此决议以/剂量作为正式实验剂量。表 注射拉贝洛尔后，大鼠血压变化study groupcontrol groupBpBpBpBp(min )(min )(min )(min )图 延续灌胃天内后，肌肉注射拉贝洛尔后，大鼠血压变化n=因动物数量有限，无法作统计学分析，但从趋势上分析，运用一样剂量的拉贝洛尔，实验组较对照组血压有更大的下降幅度，因此服用

18、辅酶Q可以降低拉贝洛尔的剂量到达与原先一样的降压效果。辅酶Q降压机制的讨论 血清中MDA浓度 服用辅酶Q前后，大鼠血清MDA浓度如表所示，实验组服用辅酶Q后无下降，对照组却有所下降，但是无统计学意义，阐明服用辅酶Q 天，并没起到抗脂质过氧化作用。血清中SOD浓度 服用辅酶Q前后，大鼠血清SOD浓度如表所示，实验组和对照组十五天后其均值可见明显变化，但因个体数太少使得变异度相对较大，无统计学意义。阐明服用辅酶Q 天，并没起到抗脂质过氧化作用。表 大鼠血清MDA变化study groupcontrol groupWKYMDAMDAMDAMDAMDAMDAMDA(day )(day )(day )(

19、day )(day )(day )(day ).表 大鼠血清SOD变化study groupcontrol groupWKYSODSODSODSODSODSODSOD(day )(day )(day )(day )(day )(day )(day ).*血清学分析由于实验终了时实验组仅存三只大鼠，因此只作实验组和对照组各三只大鼠的景象察看。讨论辅酶Q (CoQ)，,-二甲氧-甲基-多异戊二烯-苯醌 (,-dimethoxy-methyl -multiprenyl-benzoquinone)，在细胞的生命过程中具有多方面的功能，存在于线粒体，浆膜和微粒体、溶酶体、高尔基体中。辅酶Q有许多亚型，人

20、体中存在的亚型称为辅酶Q，,-二甲氧-甲基-癸异戊烯-,-苯醌，存在于日常饮食中，并可在人体组织细胞中生物合成，是一种氧化复原酶，在电子转移和氧化磷酸化耦联机制、在呼吸链和ATP合成中起了关键作用。此外，辅酶Q有抗脂质过氧化的作用，能对细胞产生维护作用。上世纪年代， Yamagami等人就曾经发现了辅酶Q对于高血压有一定的治疗意义。他们研讨了辅酶Q对于经去氧皮质酮deoxycorticosterone或盐水溶液(saline)诱导的继发性高血压大鼠的作用，发现经过六周的给药后，其对于两者收缩压均有一定的降低作用。IgarashiT等人察看了辅酶Q对不同高血压动物模型特别是自发性高血压大鼠SHR

21、的作用，实验发现：辅酶Q对正常大鼠没有降压作用；但在不同的高血压动物模型中，口服辅酶Q对抑制血压升高或降低血压有效。另外，辅酶Q的降压作用表如今长期反复服药之后，在急性实验中即使辅酶Q服用量高达mg/Kg也无效果。同样，在SHR大鼠模型中，服用mg/Kg辅酶Q对收缩压mmHg的大鼠无降压作用，但对血压更高的大鼠有明显作用。Yamagami等人以为，不论是对照组还是辅酶Q灌胃实验组其外周血管阻力均无显著差别。而Folkers等人经过研讨高血压病人服用辅酶Q后的各项目的变化，提出辅酶Q降低血压的机制是由于外周阻力的自我调理autoregulation，并以为辅酶Q本身并无直接的降血压的药理活性，而

22、是在转录程度上增长辅酶Q酶发扬其降压作用。由于辅酶Q的降压作用有限，故有不少学者探求辅酶Q与传统抗高血压药物联用效果。Danysz A.等人的实验先给SHR大鼠喂养一定时间的辅酶Q再注射普通剂量的尼群地平/氨氯地平，分析血压变化那么提示了辅酶Q不会增大最大降压幅度，但是可以延伸药物对血压控制的时间延伸两倍，因此提出辅酶Q的运用可以降低其他降压药的运用频率。而Rosenfeldt 也提出将辅酶Q作为一种治疗高血压的辅助药。在我国，也有人得出了贝那普利血管紧张素转换酶抑制剂与辅酶Q结合用治疗原发性高血压比单用贝那普利效果好的结论。氧自在基能攻击生物膜磷脂中的多不饱和脂肪酸(PUFA)引发脂质过氧化

23、作用，并构成脂质过氧化物LPO，继而分解成一系列复杂产物，其中包括丙二醛(MDA)。脂质过氧化作用及其产物可以对细胞产生损害。超氧化物歧化酶SOD是去除自在基的酶。研讨阐明，氧自在基损伤血管内皮细胞后，会导致血管内皮细胞功能受损，表现为.血管舒张因子一氧化氮分泌的减少 . 血管内皮细胞反响性降低 。也有证听阐明超氧阴离子与NO失活有关，即氧化作用加强导致NO损伤，氧自在基是NO损伤的诱导剂，超氧阴离子及氧化型LDL使内源性舒张因子NO失活，而使内皮细胞受损。以上两者相互作用，使NO含量减少，收缩因子-舒张因子的平衡被突破，血管在收缩因子的作用下发生收缩，使外周阻力升高，诱发高血压。辅酶Q作为一

24、种抗氧化剂，可以对内皮细胞进展维护，他们原先想象其降低血压的机制能够就与此有关。其降血压机制为：()CoQH与ADP-perferryl ion 作用ADP-Fe+O- + CoQH ADP-Fe+ + HO + CoQ( ) CoQH直接去除O- O- + CoQH HO + O + CoQ( ) CoQH脂自在基或脂过氧基反响L + CoQH LH + CoQLOO + CoQH LOOH + CoQ也有证听阐明超氧阴离子使NO失活有关，即氧化作用加强导致NO损伤，氧自在基是NO损伤的诱导剂，超氧阴离子及氧化型LDL使内源性舒张因子NO失活，而使内皮细胞受损。以上两者相互作用，使NO含量减

25、少，收缩因子-舒张因子的平衡被突破，血管在收缩因子的作用下发生收缩，使外周阻力升高，诱发高血压。那么,辅酶Q的降血压作用能否与上述的抗脂质过氧化作用有关呢?经过本实验研讨发现，实验组动物的血压比对照组动物降低p.，而血清SOD的差别也无统计学意义p.。思索到本实验运用的实验动物只是十六周龄的大鼠大鼠平均寿命为-年，综合这几点推出以下几种能够性：辅酶Q的抗高血压作用并不依赖于其抗脂质过氧化作用。由于MDA是反映脂质过氧化程度的公认目的，所以可以用来衡量血管内皮细胞损伤的程度，而高血压和脂质过氧化及内皮细胞损伤是互为因果的。在本次实验中，辅酶Q有明显的降压作用，但是大鼠体内的MDA没有下降。阐明此

26、时辅酶Q的抗脂质过氧化作用还未显著发扬，由此，可以以为对十六周龄的SHR大鼠，辅酶Q的降血压作用并不依赖于其抗脂质过氧化作用。年龄要素对于高血压的构成机制能够存在的影响。高血压的病因多样，例如遗传神经-体液要素、胞内钙离子超载、社会心思要素等等。就人类而言，青年高血压患者和老年患者其构成、演化机制也不尽一样。青年患者多为遗传；而对于老年患者，血管内皮细胞的脂质过氧化就是一个不容忽视的病因。以往的研讨大多针对中老年患者，对于青年患者体内能否也存在着抗氧化失衡并到达了直接对血压产生影响的程度，目前尚未有文献报导。在本实验中，他们运用的实验动物是十六周龄的大鼠大鼠平均寿命为-年。对于比较年轻的大鼠而

27、言，体内脂质过氧化在高血压构成机制中能够是非主要要素，故体内MDA浓度和SOD活力与正常大鼠相比并无显著差别。也就是说，年轻的大鼠体内脂质过氧化还没有到如上所述的参与高血压发病的程度，其高血压构成能够主要是由于别的机制。由此，作者提出：青年高血压患者的血压构成机制不能单纯用脂质过氧化来解释；脂质过氧化虽然是高血压进展演化过程中一个不可忽视的要素，但是，单纯的脂质过氧化能够无法引发高血压的构成，必需求首先存在一个诱因，使得体内抗氧化机制严重失调，从而进一步诱发大量脂质过氧化物对血管内皮细胞的损害，使血压的升高变得更加明显和严重。此外，从本实验可以看出，单纯用辅酶Q来治疗高血压达不到理想的效果，必

28、需辅以其他抗高血压药物。拉贝洛尔是目前临床上广泛运用的一种一线抗高血压药物，由于其起效时间短而作用时间长，且可以静脉注射，因此被用于急诊治疗高血压危相。但是，由于它是一种非选择性的/肾上腺素能受体阻断剂，因此具有某些副作用如收缩气管平滑肌，这就限制了其对于某些病人如支气管炎病人的运用。而假设降低运用剂量，就能减轻其副作用。经过本实验他们发现，实验组的动物由于服用了一段时间的辅酶Q，与未服用辅酶Q的动物相比，只需用小剂量的拉贝洛尔即可到达降压的效果，由此可以提出一种临床用药的新方法。在实验的第十五天、号大鼠死亡，第十六天号大鼠死亡，由此导致一些数据的不完全。为了找出死因，他们对实验组号、对照组号

29、大鼠进展了解剖。他们发现号大鼠死于脑溢血，全身无明显病变。号大鼠死于肺部感染，肺不张、肺节段性出血，但脑组织无出血。他们判别对照组的大鼠是由于血压忽然升高导致血管破裂而死脑卒中，而实验组大鼠死因和血压的升高无直接联络。至于辅酶Q维护血管的作用能否参与其中，目前不得而知，有待进一步的研讨。综上所述，他们以为，对于高血压病人及高血压高危人群而言，长期服用辅酶Q可以控制血压，维护机体功能；对于原有支气管炎等疾病而不适于运用某些抗高血压药物的患者而言，在急症高血压的治疗中也有很大的意义。在本实验过程中，各教研室教师，特别是病理生理学的张启良教师，给他们提出许多珍贵的意见和建议，给了他们很大的协助 。动

30、物房的丁隽教师和严国峰教师为他们处理了动物实验操作中的许多难题，上海市高血压研讨所的强卫国所长也抽出时间，处理了许多他们向他咨询的问题，尤其是他们的导师李稻教师两个月来放弃大量休憩时间对他们进展协助 和指点，在此一并表示赞赏。参考文献：Ernster L.Facts and ideas about the function of coenzyme Q in mitochondria. In:Filkers K,Yamamura Y,eds.Biomedical and Clinical Aspects of Dcoenzyme Q.Voll Elseviet/North-Holland. Amsterdam,Yamagami T. Iwamoto Y. Folkers K. Blomqvist CG. Reduction by coenzyme Q of hypertension induced by deoxycorticosterone and saline in rats. International Journal for Vitamin & Nutrition Research. ():-, .Folkers K. Drzewoski J. Richardson PC. Ellis J. Shi