“铬”检测技术的培训课件

1、“胶囊用明胶”及“明胶空心胶囊”中“铬”检测技术的培训 第1页，共63页。目 录背景资料检测方法及原理方法学验证注意事项第2页，共63页。第3页，共63页。第4页，共63页。第5页，共63页。4月15日晚国家药监局发出紧急通知，要求对媒体报道的13个铬超标产品暂停销售和使用。待监督检查和产品检验结果明确后，合格产品继续销售，不合格产品依法处理。对违反规定生产销售使用药用空心胶囊的企业，将依法严肃查处。4月16日中检院组织召开关于对部分胶囊剂产品开展监督抽验的紧急会议，成立了以李云龙为组长的应急工作领导小组，成立了应急检验技术专家组，安排部署应急检验的具体事宜。第6页，共63页。中检院发布明胶药

2、用空心胶囊铬检测方法指导原则的通知各省、自治区、直辖市(食品)药品检验所（院）：根据国家食品药品监督管理局的要求，为指导明胶药用空心胶囊中铬检测，保证检验质量，中检院依据中国药典2010年版（二部）的标准，结合前期工作经验，组织制定了明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则（见附件），供各单位检测时参考。附件：明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则(/CL0149/3480.html) 二一二年四月二十一日第7页，共63页。胶囊壳分类硬胶囊软胶囊:成膜材料和内容物同时加工成产品(海藻酸盐、明胶) 明胶空心胶囊植物来源：主要是植物纤维素动物来源:第8页，共63页。明胶空心胶囊（Vacant Capsule

3、s） 系由胶囊用明胶加辅料制成的空心硬胶囊。由帽、体两节胶囊壳组成，可容纳各种药粉、液体、半固体和药片。可掩饰药物的异味，易于吞服，具良好的崩解能力，较长的保质期等优点。规格尺寸：从大到小依次为000#、 00#、0#、1#、2#、3#、4#、5#等8种型号。 第9页，共63页。第10页，共63页。主要原材料：由明胶、甘油、水以及其它的药用辅料钛白粉(TiO2)组成。明胶约占所有原辅料的90%以上）。明胶是从动物（牛、马、猪、鱼、驴）的皮、骨、腱、鳞等含胶原蛋白的组织，经过酸、碱或酶水解处理以后降解生成的非均匀多肽混合物，由多种氨基酸所组成。明胶成分：8590%蛋白质，0.3%0.2%矿物质，

4、9%12%水分。 外观近于无色或者呈淡黄色，为透明、无特殊臭味的固体，分子量为1.75-45万。第11页，共63页。根据用途分为三类：药用明胶，食用明胶和工业明胶(照相明胶)。有关标准胶囊用明胶： 中国药典2010年版（二部）（Cr:2ppm）Gelatin ：EP7.0/BP2010 （Cr:10ppm）USP34（Cr:没有规定）JP16（Cr:没有规定）药用明胶： QB 2354-2005 （Cr:2.0mg/kg）(QB:轻工行业标准)食品添加剂 明胶： GB 6783-94 （A级：1.0mg/kg，B级：2.0mg/kg）食用明胶： QB /T 4087-2010 （Cr:2.0m

5、g/kg）工业明胶： QB/T 1995-2005 （Cr:没有规定。用途：1，火柴的起火剂；2，粘合剂；3，电解工业；4，纺织工业；5，感光耐蚀膜；）第12页，共63页。中国药典2010年版（二部）明胶空心胶囊项下铬检查项（P1204） 取本品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸510ml，混匀，浸泡过夜，盖上内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内，进行消解。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸汽挥尽并近干，用2%硝酸转移至50ml量瓶中，并用2%硝酸稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；同法制备试剂空白溶液；另取铬单元素标准溶液，用2%硝酸稀释制成每1ml含铬1.0g的铬标准贮备

6、液，临用时，分别精密量取铬标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬080ng的对照品溶液。取供试品溶液与对照溶液，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法（附录IV D第一法），在357.9nm的波长处测定，计算，即得。含铬不得过百万分之二（2mg/kg）。第13页，共63页。仪器原子吸收分光光度计（含石墨炉原子化装置）电子天平微波消解仪电热板或其他赶酸设备，如：恒温消解仪、赶酸器等。试剂硝酸（优级纯,国药集团或MERCk等）铬单元素标准溶液（1000g/ml或100g/ml，中国计量科学研究院）第14页，共63页。第15页，共63页。第16页，共63页。微波消解仪第17页，共63页

7、。第18页，共63页。微波消解罐第19页，共63页。赶 酸第20页，共63页。试 剂第21页，共63页。检验样品：胶囊剂（由明胶空心胶囊壳装载的胶囊）检验项目：明胶空心胶囊中的铬检验所需检品量的参考值：胶囊规格平均重量(g/粒，参考值)一次实验量（粒）检验3倍量（粒）0#0.09315451#0.07415452#0.06120603#0.05020604#0.0383090第22页，共63页。二、检测方法试验步骤已上市胶囊剂产品的空心胶囊壳中铬的检测空心胶囊壳的制备：参考附录I E 胶囊剂装量差异项（附录8）具体制备方法：倾出胶囊剂的内容物，胶囊壳用棉棒或小刷试净（不得损坏囊壳），放置，待用

8、。第23页，共63页。胶囊剂中明胶空心胶囊壳中铬的测定方法：铬标准贮备液的制备：取铬单元素标准溶液（1000g/ml），用2%硝酸稀释制成每1ml含铬1.0g的铬标准贮备液(不得超过一个月)。标准溶液的制备：分别精密量取铬标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬080ng的对照品溶液。临用时现配。第24页，共63页。二、检测方法试验步骤胶囊剂中明胶空心胶囊壳中铬测定方法(过夜) ：供试品溶液的制备：取本品约0.5g精密称定(胶囊整体称重，如1号胶囊约7个)，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸510ml，混匀，浸泡过夜，盖上内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解仪内消解。消解完全后，取消解内罐置电

9、热板上缓缓加热至红棕色蒸汽挥尽并近干(12mL)，用2%硝酸转移至50ml量瓶中，并加2%硝酸稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；同法制备空白样品溶液，作为空白校正。第25页，共63页。测定法：取供试品溶液与对照品溶液适量，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法（中国药典2010年版（二部）附录IV D第一法，标准曲线法），在357.9nm的波长处测定，计算，即得。第26页，共63页。原子吸收分光光度法原理第27页，共63页。原子光谱谱线跃迁示意图原子光谱类型原子光谱第28页，共63页。由待测元素灯发出的特征谱线通过供试品经原子化产生的原子蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收，通过测定辐射

10、光强度减弱的程度，求出供试品中待测元素的含量。原子吸收光谱基本原理第29页，共63页。原子吸收光谱的主要优点1、选择性好。锐线光谱，谱线重叠的几率小，光谱干扰小。2、灵敏度高。火焰法，可达ppm级，石墨炉法可达ppb级。3、测定精密度高。火焰法RSD2%,石墨炉法RSD5%.4、分析范围广。可测定元素超过70种。5、仪器及测定技术相对成熟。第30页，共63页。原子吸收光谱常用定量方法原子光谱分析是一种相对分析方法，须用校正曲线进行定量标准曲线法 最基本的定量方法,是其他定量方法的基础。标准加入法 排除基体成分干扰第31页，共63页。火焰原子吸收法(FAAS) ：操作简便，重现性好，但由于其灵敏

11、度和检测限的限制，一般只适用于常量元素或中药中残留含量相对较高的元素的测定（一般含量应在5ppm以上）。 Cu、Na、K、Ca、Zn测定方式按照原子化方式不同，分为四种测定方式第32页，共63页。石墨炉法（GFAAS)：应用最为广泛，其样品用量少，测定灵敏度高，采用适宜的基体改进技术和背景校正技术，可消除大部分杂质的干扰。 Pb、Cd、Cu、Cr第33页，共63页。氢化物发生法（HGAAS）:将待测元素在酸性介质中还原成沸点低、易受热分解的氢化物，再由载气导入由石英管、加热器等组成的原子吸收池，在吸收池中氢化物被加热分解，并形成基态原子，氢化物法具有比石墨炉法更好的检测限并且受干扰的程度比较低

12、。 As 冷原子发生法（CVAAS） ：基于汞的独特性质，专用于汞的测定，其仪器装置与氢化物法基本一致。 Hg 第34页，共63页。原子光谱检测法灵敏度范围示意图第35页，共63页。第36页，共63页。背景校正技术 由于样品成分复杂，其它分子吸收不可避免会对测定产生干扰，背景校正就是通过光学的手段，尽可能消除这种干扰。一般石墨炉法都要进行背景校正。氘灯背景校正：校正能力强，成本低，需引入第二光源，必需保证两个光路的完全准直。塞曼法背景校正：利用交变强磁场和偏振器进行背景校正，无需引入第二光源，校正能力强，但成本较高，灵敏度有所下降。第37页，共63页。第38页，共63页。黄柏中Cd吸收峰第39

13、页，共63页。原子吸收法测定锑第40页，共63页。校准曲线采用标准曲线法，即每次测定必需随行标准曲线标准物质采用单元素标准溶液（国家标准物质研究中心提供）制备标准贮备溶液，可长期保存，使用方便标准曲线应分别临用新配可以采用一次方程线性回归，但有时采用二次方程线性回归更为准确相关系数要求0.995第41页，共63页。第42页，共63页。空白试验原子吸收分光光度法灵敏度很高，极易受容器、试剂、水、试验室环境等的污染，因此每次测定必须随行空白实验。样品测定结果应扣除空白值后再行计算。若空白值过高，则测定结果不可信。硝酸应采用高纯试剂，使用前应检查各试剂中的相关金属元素含量符合测定的要求。水应为去离子

14、水或用石英蒸馏器蒸馏的超纯水，使用前应检查相关金属元素含量第43页，共63页。线性：制备含铬的对照品溶液至少5份，浓度依次递增，最高浓度吸收值应在0.8以下，保证具有较好的线性范围，相关系数（r）0.99。检测波长： 357.9nm。三、方法学验证第44页，共63页。第45页，共63页。准确性：应进行整个实验过程的（包括前处理）方法学回收率验证，暂定回收率应为80%-120%的范围内。每次测定需进行随行回收试验，每10个样品加一个质控样品。应采用高、中、低各2份加样回收率验证，或者在2ppm浓度平行加样回收操作6份。第46页，共63页。三、方法学验证进样精密度取限度浓度的标准品溶液重复测定5次

15、，吸收度（测定值）的变化范围（RSD）不得过5%。定量限（LOQ）本方法定量限应不低于0.5mg/kg。第47页，共63页。仪器检测限:(光谱分析） DL:检测限（ug/L） S0：空白溶液连续11次测定的标准偏差 b: 标准曲线斜率第48页，共63页。四、注意事项消解：样品前处理是试验中的关键步骤，既要保证消解完全，又要保证消解过程样品中的铬不损失，因此试验中建议加入510ml硝酸（优级纯），并需要浸泡过夜后一步消解/或不过夜二步消解。参考消解程序为：5min由室温升至120，维持3min；6min由120升至150，维持2min；6min由150升至180，维持20min。第49页，共63

16、页。注意：软胶囊的生产原料中含有胶料，增塑剂(通常为甘油）、水、附加剂（如：防腐剂、色素等）。与硬胶囊相比：甘油和水含量高。采用微波消解引发的安全性问题值得关注。第50页，共63页。酸化、加热微波消解原子吸收分光光度法预消解 消解测定第51页，共63页。软胶囊供试品溶液的制备将软胶囊剪一小口，挤出大部分内容物后，将囊体剖开，用棉签擦拭干净;再取棉签蘸取乙醚后擦拭囊体，晾干，备用。精密称取上述拭净囊体0.3-0.5g, 置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸3-5mL(视消解罐体积），100加热预消解，至无红棕色气体产生。预消解时可在精确控温立体加热器或水浴中进行，也可使用电加热板（温度可适当提高，但不要

17、超过150）。第52页，共63页。冷却至室温，补加2-3mL硝酸及0.5mL氢氟酸，置微波消解炉内，进行消解（消解程序见附表）。冷却后放气，加热赶酸至1-2ml,加去离子水定容至50mL。取上清液作为供试品溶液。同法同时制备试样空白溶液。软胶囊供试品溶液的制备第53页，共63页。微波消解参考程序序号功率（W）温度（ ）升温时间（min）保持时间（min）11500室温-130 10221500130-165 20331500165-180 1510第54页，共63页。2. 为避免玻璃容器的干扰，试验中宜采用塑料容量瓶（聚丙烯材质）定容。第55页，共63页。四、注意事项不同原子吸收仪试验参数可能

18、不同，可根据原子吸收仪说明书中推荐程序设定测定参数:Varian石墨炉升温程序如下：第56页，共63页。岛津原子吸收石墨炉升温程序升温程序温度（）时间（sec）气体流（sec）干燥150200.1干燥250100.1灰化80010001.0灰化80020.0原子化230020.0净化250021.0第57页，共63页。4. 含钛白粉的胶囊壳（不透明胶囊）建议在微波消解时，样品中除加硝酸外可另加0.5ml氢氟酸(优级纯)，其他同供试品溶液制备，注意空白校正和方法学验证。第58页，共63页。四、注意事项实验用水：应采用纯化水，储藏水的容器宜用聚乙烯塑料材料制成，不宜选用玻璃容器长期储存。试剂应采用优级纯及以上级别