血清乙型肝炎病毒表面抗原检测ELISA-检验科免疫室作业指导书

1、【实用】检验科SOP文件药海无涯学无止境专注医学领域血清乙型肝炎病毒表面抗原检测 ELISA原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清 （或 血浆）中乙肝表面抗（HBsA。标本采集采集前病人准备：受检者应空腹标本种类：血清或血浆标本要求：采集病人静脉血 3ml （可用EDT砒凝），室温放置 不超过4小时，分离血清备用。标本储存：2-8C保存不应超过1周，-20C不应超过3个月，-70C 长期保存，应避免反复冻融。标本运输：密封，室温运输。标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。试齐I试剂名称：

2、乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。包装规格：96Test/Kit试剂盒组成：HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg 阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物 A,底物B,终止液，封口膜，自封袋。试剂储存条件及有效期：2-8C避光保存，有效期9个月。仪器设备仪器名称：自动酶标仪仪器厂家：Rayto仪器型号：RT-2100操作步骤平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25 C）,微孔板开封 后，余者及时以自封袋封存。配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸储水或去离子水按1:19稀释后使用。编号：将

3、微孔条固定于支架，按序编号。加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50 l于相应孔中。加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体 50 1,轻拍混匀。温育：置37 c温育60分钟，室温平衡5分钟。洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒 的浸泡时间）。显色：每孔加入底物A、B各50 1,轻拍混匀，置37c暗处15分 钟。终止：每孔加终止液50 l,混匀。8.10测定：用酶标仪单波长 450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。结果判断与分析临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值NX 2

4、.1,阴性对 照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。结果判定：样品OD值S/C.O=1者为HBsAg阳性样品OD值S/C.O1者为HBsAg阴性质量控制每次试验用含2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测，以 S/CO值绘制 质控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储 藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其 在控。参考范围：阴性临床意义：在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为 无症状携带者。操作性能：灵敏度为ng/ml,特异性高。方法局限性.对于病毒复制较强的病人，病毒量较大，出现HOOK现象，造成假阴性，须将病

5、人血清进行稀释后再重新试验。.如出现跳孔现象可能造成假阳性。.样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。.注意事项每板建议设阴阳性对照血清各两孔， 设空白对照时，不加样品 及酶标记抗体，其余各步相同。洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加 前应弃去12滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿 将试剂滴在孔壁上。所有样品都应按传染源处理。封口膜使用说明微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可 以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条 底部，以免影响其透光性。微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验 带来的非预期的影响。不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证 所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判 读者，应留样待系统正常后复查。.参考文