饲料中粗蛋白质、总磷、钙连续测定方法

1、饲料中粗蛋白质、总磷、钙连续测定方法技术部 品管部应用此种方法的优点 现在介绍的方法，只称取一份样品，采用双氧水作催化剂，用硫酸消化，消化液定容后分别测定粗蛋白质、总磷和钙。 避免了重复称样和样品预处理，减轻了劳动强度，提高了工作效率，且节约了电费和试剂费用。原理H2SO4和H2O2都是强氧化剂，高温下放出新生态氧O，使饲料中的有机物破坏分解释放出CO2、SO2、NH3及各种无机元素，其中CO2、SO2释放到空气中，NH3与H2SO4结合生成(NH4)2SO4，P、Ca等各种无机离子均能分别留在消化液中。反应简式如下： 粗蛋白质测定原理 硫酸铵在强碱条件下，蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，用标准酸

2、滴定，测定氮的含量，乘以6.25为粗蛋白质含量。磷的测定原理 磷在酸性条件下，与钒钼酸铵作用，形成黄色钒钼酸铵络合物(NH4)3PO4NH4VO3*16MoO3，在420 nm波长下比色，其磷含量与吸光度成正比。钙的测定原理 EDTA络合滴定法，在待测液中加入钙黄绿素指示剂，用EDTA标准溶液络合滴定钙进行测定。测定方法总消化液的制备粗蛋白质和钙、总磷的测定总消化液的制备 试剂配制1、双氧水：分析纯，含量30 %(市售原装为30 %34 %，不用配制，直接使用)。2、硫酸：化学纯，含量为98 %，无氮。 消化步骤： 称样（过40目筛）0.51 g，精确到0.0001 g， 150250 mL消

3、化管中，加浓硫酸10 mL，摇匀，缓慢加双氧水直至溶液变清（边加边摇动双氧水约2-10ml，加入速度以不冲至瓶颈为准）， 消煮器在400的条件下消煮数分钟直至管内溶液中无黑色残渣，然后加双氧水（2-5mL）至溶液清彻再次放入消煮器中消煮至溶液透明为止。 消化完毕后，待消化管冷却，将管内消化液小心地转移到100 mL容量瓶中，待溶液冷却至室温后，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。 该消化液可作粗蛋白质、总磷、钙的测定。同时做空白试验，以校正试剂的误差。返回粗蛋白质测定试剂配制1、氢氧化钠（40 % ）：化学纯，40 g溶解在100 mL蒸馏水中。2、硼酸（2 % ）：分析纯，2 g溶解在100 mL蒸馏

4、水中。3、混合指示剂：甲基红0.1 %乙醇溶液，溴甲酚绿0.5 %乙醇溶液，两溶液等体积混合，用棕色瓶贮于阴凉处。4、0.05 mol/L盐酸标准液：4.2 mL分析纯浓盐酸溶成1000 mL水溶液，用无水碳酸钠标定。 氨的蒸馏与滴定 用半微量水蒸汽蒸馏法，取20 mL 2 %硼酸吸收液，加混合指示剂两滴使冷凝管末端浸入。吸取5mL样品消化液于反应室中，再加6mL 40 %氢氧化钠溶液，用少量水冲洗进样口，塞好进样口玻璃塞，防止漏气，变色后蒸馏4 min，冷凝管尖端稍高于吸收液面再蒸馏1 min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，冲洗液与吸收液合并，立即用0.05 mol/L盐酸溶液滴定，溶液由蓝绿色突

5、变为灰红色为终点，同时进行空白测定。计算： 式中： V2滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL； V1滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； N盐酸标准溶液当量浓度；W样品重量，g； 0.0140与1.00 mL盐酸标准液(1.000 mol/L)相当的氮的克数； 6.25氮换算成蛋白质的系数。 m样品重量，g； v试样分解液蒸馏用体积，ml v试样分解液总体积，ml（V2-V1）N 0.014 6.25v v 100m 粗蛋白质(%)钙的测定试剂配制： 1、盐酸羟胺：分析纯。 2、盐酸：分析纯，1+3 (V1+V2) 。 3、氢氧化钾溶液：分析纯，200 g/L。 4、三乙醇胺水溶液：分析纯，1+

6、1(V1+V2)。 5、乙二胺水溶液：分析纯，1+1(V1+V2)。 6、淀粉溶液(10 g/L)：称取1 g可溶性淀粉于200 mL烧杯中加 5 mL水润湿，加95 mL沸水搅匀，煮沸，冷却备用(现配现用)。 7、孔雀石绿水溶液1 g/L。 8、钙黄绿素甲基百里香酚蓝指示剂：0.1 g钙黄绿素与0.13 g甲基百里香酚蓝、5 g氯化钾研细混匀，贮存于磨口瓶中备用。 9、钙标准溶液(0.0010 g/mL)：称取于105110 干燥至恒重的基准碳酸钙2.497 g，溶于40 mL盐酸中，加热赶除CO2，冷却，用水转移至1000 mL容量瓶中，稀释至刻度。 10、EDTA标准滴定溶液：称取3.8

7、 g EDTA于烧杯中，加 200 mL水，加热溶解冷却后转至1000 mL容量瓶中，稀释至刻度。 EDTA标准滴定溶液的标定：准确吸取钙标准溶液10.0 mL，按试样测定法进行滴定。 EDTA标准滴定溶液对钙的滴定度按下式计算： T= 式中：TEDTA标准滴定溶液对钙的滴定度，g/mL；C钙标准溶液的浓度，g/mL；V所取钙标准溶液体积，mL；V0EDTA标准滴定溶液用量，mL。CVV0测定步骤 准确移取样品消化液10 mL(含钙量225 mg)，加水50 mL、淀粉溶液10 mL、三乙醇胺2 mL、乙二胺1 mL、孔雀石绿1滴，滴加氢氧化钾溶液至无色，再过量10 mL，加0.1 g盐酸羟胺

8、(每加一种试剂都须摇匀)、钙黄绿素少许，在黑色背景下立即用EDTA标准滴定溶液滴定至绿色荧光消失呈紫红色为滴定终点。计算： 式中： T-EDTA标准滴定液对钙的滴定度，g/mL； V1分取试样分解液的体积，mL； V2实际消耗EDTA标准滴定溶液体积，mL； m试样质量，g。 V 试样分解液的体积，mL；钙(%)=TV2mV1 100V 试剂配制 1、钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25 g，加硝酸250 mL，另取钼酸铵25 g，加蒸馏水400 mL溶解，冷却后将此溶液倒入上述溶液，加水定容至1000 mL贮于棕色瓶中，若生成沉淀，则不能继续使用。 2、磷标准溶液：称取KH2PO4(105

9、烘干2 h，干燥器中冷却)0.2195 g，溶于水，定量转入1000 mL容量瓶中，加硝酸3 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，配成50 g/mL的磷标准溶液 总磷的测定测定步骤标准曲线绘制或求回归方程式：准确吸取0、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0 mL磷标准溶液于50 mL容量瓶中，各加钒钼酸铵显色剂10 mL，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10 min以上，以0溶液为参比，用10 mm比色池在420 nm波长下，使用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线或求出回归方程式。 试样的测定：准确吸取210 mL样品消化液(含磷量50750 g)于5

10、0 mL容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10 mL，以空白消化液作参比，按上面的方法显色和比色测定，测得试样分解液的吸光度，用标准曲线查得或用回归方程式求得试样分解液的含磷量。计算： 总磷(%) 式中： m试样的质量，g； X由标准曲线查得或用回归方程式求得试样分 解液的磷含量，g； V移取试样分解液体积，mL。mV100X106小结 本方法操作与国标法相比，只是样品预处理与国标法不同，其他与国标法相同。原理： 硝酸银与溶液中的氯离子结合形成氯化银沉淀，多余的硝酸银与铬酸钾结合形成铬酸银红色沉淀，根据硝酸银的用量可以计算出氯离子的量。饲料中水溶性氯化物的测定饲料中水溶性氯化物的测定试剂的配制：0.

11、05mol/L硝酸银标准液：称取硝酸银8.5g溶于1000ml蒸馏水中，用基准氯化钠标定。10%铬酸钾：称取铬酸钾10g溶于100ml蒸馏水中。硝酸银标准液 的标定 三个锥形瓶中用移液管分别注入10.00ml氯化钠标准溶液，再各加10ml淀粉溶液（10g/L）、 90ml蒸馏水和1.0ml 10%铬酸钾指示剂，均用硝酸银标准溶液滴定至砖红色，且1min不退色，为终点。分别记录消耗量V，以并求平均值，但以三个平行试验数值间的相对误差应小于0.25%。另取100ml蒸馏水作空白试验，方法同上，记录消耗硝酸银量V0。计算： T=（10.001.00）（VV0） （mg/ml） 式中： V0-空白消耗硝酸银标准溶液体积，ml;V -氯化消耗硝酸银标准溶液的平均体积，ml10.00 -氯化钠标准溶液体积，ml1.00-氯化钠标准溶液浓度，mg/ml硝酸银溶液浓度（mgCl-/mlAgNO3）操作步骤： 称取样品510g，准确至0.00