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文档简介

1、第三章 细胞生物学研究方法第一节 显微技术 最大分辨率人眼： 0.2mm普通光学显微镜： 0.2m电子显微镜： 0.2nm光学显微镜：以可见光（或紫外线）为光源。电子显微镜：以电子束为光源。构成： 照明系统 光学放大系统 机械装置原理：经物镜形成倒立实像 经目镜进一步放大成像。（一）普通光学显微镜普通光学显微镜的最大分辨率 0.2m人眼的最大分辨率 为0.2mm（二）荧光显微镜特点：光源为紫外线，波长较短；分辨力高于普通显微镜；有两个特殊的滤光片；用于观察能激发出荧光的结构。用途：免疫荧光观察、基因定位、疾病诊断。（三）激光共聚焦扫描显微境 用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。能显示细胞样

2、品的立体结构。分辨力是普通光学显微镜的3倍。用途类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像。把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。环形光阑：位于光源与聚光器之间。相位板：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4。（四）相差显微镜（五）倒置显微镜物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，通常具有相差物镜，有的还具有荧光装置。 （六）电子显微镜原理: 以电子束作光源，电磁场作透镜。分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍。用于观察超微结构（ultrastructure），即小于0.2m

3、、光学显微镜下无法看清的结构，又称亚显微结构（submicroscopic structures）。1 透射电子显微镜2、扫描电子显微镜其它常用细胞生物学方法细胞分离技术流式细胞术细胞培养技术原代培养和传代培养细胞内化学成分显示免疫细胞化学技术单克隆抗体的制备胚胎干细胞和转基因动物1 流式细胞术2 细胞培养技术3 免疫细胞化学技术4 单克隆抗体技术英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌抗体的能力，但不能长期培养，瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌抗体。5 胚胎干细胞和转基因动物显微技术流

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