HLA检测技术与应用课件

1、血型HLA概念检测方法HLA的应用HLA与临床输血第1页，共34页。血型：血液中各种成分的遗传（表现）多态性标志血液成分：红细胞，白细胞，血小板，血清蛋白遗传多态性表现：细胞表面，血浆中的各种特异性蛋白多态性的遗传基础：基因（染色体上的核酸序列）第2页，共34页。输血治疗的需要促使“血型”发现15世纪后期开始输血1900年Landsteiner发现人类红细胞ABO血型1927年发现MN血型系统1940年发现Rh血型HLA1958年法国J.多赛发现第3页，共34页。第4页，共34页。免疫血液学方法：抗原、抗体检测方法 凝集实验：试管法、凝胶柱法、固相吸附、 流式技术细胞生物学检测方法：混合淋巴细

2、胞培养分子生物学检测方法：血型基因检测 SSP、SSO、SBT 第5页，共34页。人类白细胞抗原，白细胞表面的一种糖蛋白，有非常复杂的生物学功能，非常复杂的多态性广范存在于除白细胞表面的其他组织、体液中，与组织相容性有关，又称为组织相容性抗原第6页，共34页。HLA-I类分子HLA-II 类分子第7页，共34页。参与内外抗原肽的处理，呈递自我识别的信号某些病毒，细菌进入细胞的受体与某些疾病的发病有关,如：B27与强直 性脊柱炎（AS）第8页，共34页。第9页，共34页。（二）HLA复合体的遗传特征 1. 单元型遗传 2. 多态性现象 （1）复等位基因 （2）共显性表达 3. 连锁不平衡 第10

3、页，共34页。第11页，共34页。第12页，共34页。HLA-类分子的分布 1. 存在于有核细胞(含血小板和网织红细胞) 表面。 淋巴细胞 肾、肝脏、心脏 神经组织、成熟的滋养细胞 2. 存在形式 （1）膜结合：有核细胞表面 （2）可溶性：存在于血清、初乳和尿液等体液中。 第13页，共34页。 HLA-类分子的分布 1. APC B细胞、单核/巨噬细胞和树突状细胞； 2. 其他 激活的T细胞，精子和血管内皮细胞。 第14页，共34页。血清学细胞学分子生物学实验方法补体介导的微量细胞毒试验混合淋巴细胞培养法（MLC)分子生物学技术原理抗体(HLA分型) + 淋巴细胞(受者) + 补体淋巴细胞受损

4、 判定结果（细胞死亡百分率）单向法双向法比较供、受者编码HLA抗原基因的 DNA序列，判定供、受者间的相似程度。主要应用检测HLA-A、B、C抗原检测DR抗原 HLA分型法原理及应用第15页，共34页。TERASAKI 发明的微量淋巴细胞毒实验:当特异性抗体与HLA抗原结合，激活补体，使淋巴细胞溶解，显微镜下可见到被活性染料着色的淋巴细胞用于HLA-I类抗原分型第16页，共34页。基于PCR技术的分型方法PCR-SSP方法操作简单、灵活适合少量样本临床病例分型检测通量较小第17页，共34页。第18页，共34页。PCR-SSO（序列特异性寡核苷酸探针）杂交条方法基因芯片方法流式荧光微珠第19页，

5、共34页。芯片的工作原理将HLA基因的PCR产物固定在基片上荧光标记的序列特异性探针杂交探针 1探针 2探针 3探针 n .杂交图谱汇总每条探针数据得到所有样品的分型结果由计算机自动判读分型结果第20页，共34页。第21页，共34页。第22页，共34页。第23页，共34页。 HLA分型方法比较项目 PCR-SSP PCR-SSO杂交条 PCR-SSO微珠法 PCR-SSO芯片法 DNA测序方法技术要求 低 低 较高 高 高 分 辨 率 中低 中低 中高 中高 高检测通量 低 一般 较高 高 较高使用设备 少 少 较多 多 较多环境污染 EB致癌 轻微 轻微 轻微 轻操作步骤 简单 简单 较复杂

6、 复杂 较复杂检测成本 低 低 较高 高 较高适用范围 临床或小批量 临床、较大批量 中、大批量 大批量 临床、各种批量应用情况 国内临床 国内临床 骨髓库 国家芯片中心 国外常规采用第24页，共34页。高准确性：血清学-分子生物学高通量： SSP-基因芯片、流式高分辨： 低分辨-中分辨-高分辨氨基酸残基配型：血型学-基因-AA残基 （表位）第25页，共34页。免疫应答，T细胞分化器官移植与疾病关联肿瘤关联法医、个体识别、人类学研究第26页，共34页。第27页，共34页。第28页，共34页。骨髓移植（造血干细胞移植）肾移植血小板输注其他血液成分输血第29页，共34页。第30页，共34页。 恶性肿瘤细胞 HLA-类分子表达减少或缺乏，肿瘤细胞逃逸免疫监视。 IFN- 促进肿瘤细胞HLA-类分子表达 增强CD8+CTL细胞的特异性杀伤。第31页，共34页。HLA可以作为亲子鉴定的一个指标刑侦研究种族人群的迁徙第32页