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文档简介
1、华润三九医药股份有限公司出CRSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.第 页/总6页第 页/总6页标题起草Waterse2695型咼效液相色谱仪标准操作程序日期颁发部门:研发事业部页数审核日期分发部门:QA审核日期批准日期生效日期变更记载:变更原因及目的:原文件号批准日期生效日期文件系统修订。1目的:Waterse2695型高效液相色谱仪的一般标准操作程序。2范围:Waterse2695型高效液相色谱仪。3责任人:相关实验人员4设备部件及名称Waterse2695分离单元.2998型二极管阵列检测器.Empower色谱工作站.各部件可独立操作或通过色谱工作站控制
2、,色谱数据处理由色谱工作站完成,其操作系统为WindowsXPProfesionalSP3,工作站软件为色谱管理软件。5标准操作程序5.1开机前准备5.1.1检查桌面是否清洁、整齐。5.1.2检查设备是否清洁,连接管线是否正常,色谱柱是否需要更换。5.1.3检查电源线有无破损。5.1.4接通电源,检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。5.1.5准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。流动相和纯水应用微孔滤膜过滤(纯有机相或含一定比便例有机相的用有机系的滤膜,水相或缓冲盐的用水系滤膜)。一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完,如未使用完也应弃去不用,并重新配制新鲜的流动相。如需使用,应
3、重新过滤。流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。该泵带有真空脱气机,可不超声,但要在泵电源开启后,等脱气机停止工作后(约需5分钟)再进行泵的其它操作。5.1.6准备样品。为延长层析柱使用寿命,建议使用流动相溶解样品,如果不是,一定要做预试验,确保样品在流动相溶液中不出现沉淀。如果样品中成份复杂,特别含有强保留成分,建议过C18小柱预处理。样品在进样前必须经0.45pm的微孔滤膜滤过,根据溶剂性质选择合适的滤膜。过滤完毕华润三九医药股份有限公司出CRSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.第 页/总6页第 页/总6页后,置于样品盘上,记录样品所放的位置号。5.
4、2开机接通稳压电源,待电压稳定在220V时,依次打开下列仪器的电源:高压泵、柱箱、系统控制仪、色谱工作站。接通2695分离单元后,约20s仪器开始自检,约1min后,显示主屏幕,此时继续各部件的初始化,待主屏幕上方标题区出现“Idle”时,仪器进入待命状态。5.3溶剂管理系统的准备5.3.1流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂,按【Menu/Status】,进入“Status(1)”屏幕。5.3.1.1湿启动在“Status(1)”屏幕下,光标选“Compomtion”中欲使用的流动相,输入流动相组成及比例,按【Enter】再用光标选“Degasser”中的“Normal”,按【Enter】。
5、按【DirectFunction】,光标选“WetPrime”,输入流速及时间,按【OK】。5.3.1.2当溶剂的管路是干的或存在较多气泡不易排出时,进行干启动。在“Status(1)”屏幕下,按【DirectFunction】,光标选“DryPrime”,按【Enter】,显示“DryPrime”屏幕,按欲启动的溶剂管路的屏幕键,如【OpenA】,光标选“Duration”,按数字键输入5min,按【Continue】,待限定时间结束后,重复操作,使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。5.4样品管理系统的准备5.4.1冲洗自动进样器在“Status(1)”屏幕下,光标选“Compo
6、sition”,输入流动相的组成。按【DirectFunction】,光标选“Purgeinjector,按【Enter】,显示“PurgeInjector”屏幕,输入“SampleLoopVolumes6.0”,光标下移“CompressionCheck”,按任意数字键,按【OK】。5.4.2冲洗进样针在主屏幕下,按【Diag】,显示“Diagnositcs”屏幕,按【PrimeNdlWash】,显示“PrimeNeedleWash”屏幕,按【Start】,30s内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit】。5.4.3冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下,按【Diag】,显示“Diagn
7、osities”屏幕,按PrimeSealWash,显示“PrimeSealWash”屏幕,按【Start】,待排放口有水流出,按【Halt】、【Close】、【Exit】。5.4.4装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置,打开样品仓门,显示“DoorisOpen”屏幕,装入样品盘,按【Next】,直至所有样品盘装毕,关仓门。5.5Empower色谱工作站操作5.5.1登录点击桌面上Empower图标,出现Empower登录窗口,输入用户名和密码,然后单击“确定”,进入Empowero每次登录前必须输入用户名和密码。注:出厂设置的用户名为system,密码为manager。5.5.2项目管
8、理5.5.2.1新建项目:双击“配置系统”进入,按“新建项目向导”提示建立新项目。注:项目名中不能出现空格。可使用下划线()分隔词。另外,名称不能以数字开头。项目是方法、结果、自定义字段、视图筛选器和原始数据的集合,由用户定义。该集合驻留在Empower数据库中并在“浏览项目”中显示。项目是为了方便用户归类、管理和检索相应的数据,应根据实际情况来决定是否建立,并不是每次开机都要创建。5.5.3数据采集5.5.3.1双击“运行样品”进入,在出现的页面的左框中选择欲存储采集数据的“项目”,在右框中选择所需的色谱系统,然后单击“确定”。5.5.3.2出现“运行样品”窗口后,选择“单一”或“样品”表单
9、画面中的“创建方法组”快捷键,出现新华润三九医药股份有限公司出CRSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.第 页/总6页第 页/总6页方法组一选择仪器方法窗口。可以在现有的仪器方法中选择一个或者单击“新建”来创建新的仪器方法。如果单击了“新建”,会出现仪器方法编辑器。窗口会为所选色谱系统中的每个仪器显示一个图标。选中不同的图标,即可编辑相应的仪器参数。请根据您的实验方法设置相应的每个仪器具体参数。编辑仪器参数完成后单击“文件”“另存为”,出现“保存仪器方法”对话框。输入仪器方法名,单击“保存”,保存该仪器方法。关闭“仪器方法编辑器”窗口。新建的仪器方法出现在仪器
10、方法列表中。选中所要的仪器方法,单击“下一步”。出现“选择缺省方法”页。选择“处理方法”与“报告方法”(如尚未建立合适的方法,则接受默认设置),单击“下一步”,出现“命名方法组”页。输入方法组名(缺省设置成与刚建立的仪器方法名相同),必要时输入注释后,单击“完成”。回到运行样品窗口。5.5.3.3在“方法组”下拉菜单中选择欲使用的方法组,同时在下方的“仪器方法”下拉菜单中,选择欲使用的仪器方法。“监视器”键单击中“监视器”键,观察基线。5.53.4待系统平衡后,即可单击“停止”键,终止观察基线。随后等到系统空闲后,设定采集的参数样品名、功能、样品瓶以及样品体积与运行时间,最后单击“进样”或“运
11、行”,开始采集数据。进样时状态条会做出指示。色谱数据被采集并显示在“实时”图中。注:如果不知道运行时间,第一次进样应设长一些,如填60min,进样确认后,进第二针时再改回适合的时间。注:“方法组”栏中,默认会出现刚刚建立好的方法组的名称,如果需要选择其它已经建立过的适用的采集方法组,则可从此栏的下拉菜单中选中即可。5.5.4数据处理5.5.4.1单击鼠标左键进入“浏览项目”,选择欲浏览数据所在的项目,然后单击“确定”,进入该项目。5.5.4.2在“通道”选项卡中,选中欲修改的标准品和样品信息。注:在Empower进行处理时,只有标样能够生成校正曲线,然后才能对未知样进行定量计算。如果在进样时没
12、有正确设置样品类型,可在此窗口直接进行修改。也可针对具体情况,修改样品名称、样品重量以及稀释倍数。5.5.4.3在“通道”选项卡中选择欲处理的数据,单击(查看)打开。出现“查看一主窗口”。单击(处理方法向导),出现“处理方法向导”对话框,选择“新建处理方法”,然后单击“确定”。按向导提示完成处理方法的建立并保存。积分并保存全部结果。5.5.5数据的打印5.5.5.1单击鼠标左键进入“浏览项目”。选择欲打印数据所在的项目,然后单击确定,进入该项目。在“结果”选项卡中选择欲打印的结果,单击(预览出版)。注:如果在非“结果”选项卡(例如通道)中单击预览出版,则无法查看到积分结果。5.5.5.2出现“
13、打开报告方法”对话框,选择“使用对选中的数据适用的报告方法”,或者在“使用以下的报告方法”下拉菜单中选择适当的报告方法,然后单击“确定”。此时若选择“峰综合报告”格式,可计算峰面积/保留时间的重现性等统计信息。如果只需要峰面积等信息,则可选择“缺省单个报告”。5.5.5.3在屏幕上即出现报告预览窗口,如预览后无误,单击(打印),打印报告。如果想批处理打印,可以在“项目”窗口中,点击“结果”标签,用“键盘Ctrl+鼠标左键”选黑要出报告的样品,单击(打印)在随后出现的“后台处理及生成报告”页面中(见下图),确认“打印”方框中打勾,“处理”和“导出”方框中为空。选中使用指定的报告方法,在其下拉菜单
14、中选择所需的报告方法,点击确定即可。5.6关机5.6.1数据采集完毕后,关闭检测器电源开关。华润三九医药股份有限公司出CRSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.第 页/总6页第 页/总6页562使用完毕,按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫,确保2695分离单元已彻底冲洗干净后,关闭电源开关。5.6.3处理数据并打印报告后,关闭计算机和打印机电源开关,并做使用登记。6注意事项6.1更换溶剂时,若液体流路中有气泡,可用注射器抽吸,彻底排除气泡6.2流动相禁止使用氯仿、三氯(代)苯、亚甲基氯、四氢咲喃、甲苯等;慎重使用四氯化碳、
15、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等,以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。6.3柱温箱一旦发生报警,一定要及时找到原因。若实验室湿度太高,则需采取相应的除湿措实。若柱温箱中发生漏液现象,则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液,长时间的漏液极易损坏柱温箱中的传感器。6.4紫外检测器要“晚开、早关”在流通池有溶液连续流动几分钟后方可开启。若不需要做样,可设置一个较低的流速(如0.05ml/min)。如果流动池中有气泡,则会提示漂移过大无法通过自检和校正。7维护保养规程7.1检查HPLC的日常操作条件:7.1.1检查温度:1030C;7.1.2检查相对湿度:V80%7.1.3检查稳压电源是否正常工作;7.1.4检查线路连接
16、是否正常;7.2泵的保养:7.2.1泵的排气:先拧松排气阀,用注射器将气泡抽出,反复进行直到气泡完全排出。7.2.2应尽量避免泵在很高的压力下长时间操作。7.2.2.1当泵出现压力明显高于正常值的情况,应先拆卸掉在线过滤器再连接好流路,观察泵压读数,若泵压读数依然很高,则在线过滤器没有堵塞。预柱、分析柱同样处理。发现哪个部件有堵塞则拆卸掉超声清洗20min,再连接好流路。7.222当泵压力不稳定时,需要将单向阀拆卸掉用异丙醇超声清洗20min。7.2.3溶剂过滤头要经常超声、清洗;每星期一次。7.2.4泵本身没有在线自清洗功能,需要将注射器吸满10%甲醇并连在泵的软管上对泵进行多次清洗。每星期
17、清洗一次。7.3柱的保养:7.3.1新柱子在使用前一定要写上启用日期。7.3.2分析测定结束后,要用适当的溶剂来清洗柱。7.3.2.1若流动相中不含盐、酸和碱则用纯甲醇冲柱30min。7.3.2.2有盐、酸和碱则先用10%甲醇至少冲30min,再用纯甲醇冲30min。7.3.3在线过滤器要定时拆卸超声清洗,每月清洗一次。7.3.4预柱(保护柱)应拆卸超声清洗,也可在纯甲醇为流动相下低流速的反冲,一个月清洗一次。7.3.5长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭;C18柱用纯甲醇保存并封闭。7.4检测器(UV)的保养:7.4.1流通池要保养,经常用甲醇冲洗。华润三九医药股份有限公司出CRSanji
18、uMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.第 页/总6页第 页/总6页华润三九医药股份有限公司TinCRSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.75其它:751每两周要清洁一次仪器。仪器长期不用时,应用甲醇冲洗各流路。7.5.2柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动。7.5.3防止过滤头滋生细菌和微生物。定期更换溶剂瓶中的溶剂。7.5.4不要将排气阀拧得过紧。7.5.5应定期对水相及含水相流动相瓶进行清洗,每周一次。7.5.6每年要检查一次仪器接地状况。7.6仪器维护保养项目周期表维护项目维护内容维护周期1.日常操作条件检查是否符合2.记录检查是否齐全3
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