国家大学生创新试验计划

1、逆境处理下大豆抗坏血酸含量及其合成相关基因表达测试 小组成员：孙雷 薛冬 王藩 指导老师：邢邯研究背景抗坏血酸与植物抵抗非生物胁迫有着紧密的关系GMP基因编码的GDP-甘露糖焦磷酸化酶是植物体内合成抗坏血酸的关键酶在模式植物和部分作物上，GMP基因表达提高而有助于植物抵抗多种逆境胁迫的现象已有报道而大豆作为重要的作物之一，其GMP基因与抵抗逆境的相互关系尚不明确。研究内容本项目主要针对生产中常见的4种逆境胁迫(高温、低温、盐碱和干旱)进行试验通过抗坏血酸含量测定和GMP基因荧光定量PCR检测，以寻求大豆中该基因与4种逆境胁迫的相互关系，为培育大豆抗逆品种提供理论基础研究目标获得大豆开花期GMP

2、1基因表达和抗坏血酸含量关联情况获得在高温，低温，盐碱和干旱4种逆境处理下，不同时间大豆GMP1基因表达和抗坏血酸含量的关联情况可行性分析 大豆是我国重要的作物之一，种植面积广泛。大豆喜温，江苏地区的气候等条件宜于种植大豆。我校国家大豆改良中心在有关大豆研究的方面具有雄厚的实力与丰富的经验，已经多次完成类似研究。此外，本实验依靠国家大豆改良中心的实验条件，拥有全套实验测试仪器，人工气候箱能模拟445的高低温环境条件。研究基础本实验室已经成功克隆获得大豆GMP1基因，且完成该基因在大豆组织上表达分析 逆境处理方面，本实验室已经完成其他基因对干旱等胁迫的表达分析 本实验室应用2，6-二氯酚靛酚钠法

3、已经完成100多份豆芽的抗坏血酸的测定工作本实验室已经完成多个其他基因的RNA提取及荧光定量PCR表达分析实验 项目方案流程图种植大豆开花时挂牌移入培养液高温低温盐胁迫干旱抗坏血酸测定提取RNA，荧光定量PCR检测四个时间段分别采取根茎叶六个时间段分别采取根茎叶创新之处现状： “三多三少” 研究抗坏血酸在人体中作用的多，在植物体内作用的相对少 研究抗坏血酸在其他植物的多，研究大豆的相对较少 从大分子水平研究大豆抗坏血酸的多，与基因表达相联系的较少 我们将应用荧光定量PCR等技术针对4种逆境胁迫条件下大豆GMP1基因表达，同时结合抗坏血酸的含量，对三者的关联性做进一步检测分析研究计划及预期进展

4、2010.32010.4 完成项目申请和文献查询 2010.52010.8 完成大豆种植工作和各材料采集工作，完成材料的抗坏血酸测定工作 2010.92011.1 完成各材料RNA提取，荧光定量PCR分析 2011.22011.4 数据整理，结题报告完成 预期成果获得大豆开花期GMP1基因表达和抗坏血酸含量关联情况获得在4种逆境（高温、低温、盐胁迫、干旱）不同处理时间下，大豆GMP1基因表达和抗坏血酸含量的关联情况，证明大豆内GMP1基因表达，抗坏血酸含量和抵抗非生物胁迫的相关性撰写结题书，并制作PPT汇报争取发表研究论文1篇经费预算支出科目金额（元）计算根据及理由直接费用29500元研钵500元200个冻容管1000元500个抗坏血酸测定 8000元 400份样，包括抗坏血酸还原酶等药品 RNA提取试剂盒 5000元 200份 RNA反转试剂盒 5000元 200份 荧光定量MIX 5000元 200份 设备费 2000元 仪器租借