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文档简介
1、真空冷冻干燥保藏菌种11、安瓿管准备 选取规格约直径为8mm,高100mm的中性玻璃安瓿管,先用2%盐酸浸泡810h,再经自来水冲洗多次,用蒸馏水涮洗23次,烘干;在每管内放入打好菌号及日期的标签,字面朝向管壁,管口塞好脱脂棉塞,121下高压灭菌20分钟,备用。 2、保护剂的选择和准备 选取新鲜牛奶作为保护剂,牛奶要先脱脂,用离心方法去除上层油脂, 115下高压蒸汽灭菌25min,备用。 23、冻干样品的准备菌种准备及分装 菌种要求为生长良好的纯种,菌龄以处于稳定期为好,孢子是新鲜的。每支长好的斜面加23ml保护剂,用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基),制成菌悬液。如用液体培养的菌种,则
2、需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞,收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。悬液中菌数要求达到1081010个/ml为宜。悬液制备完成尽快分装和冻结。分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部,每管分装量约0.10.2毫升,分装安瓿管时间尽量要短,最好在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。4、预冻-80冰箱预冻12小时。 35、冷冻干燥 将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内,开始冷冻干燥,时间一般为8-20小时。终止干燥时间应根据下列情况判断:安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状;真空度接近空载时的最高值;选用1-2支对照管,其水份与菌悬液同量,视为干燥完结。6、真空封口将安瓿管颈部棉塞以下处用强火焰拉细进行熔封。7、保藏安瓿管保藏在-20冰箱里。8、活化 如果要从中取出菌种恢复培养,可先用75%酒精将管的外壁消毒,用镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端,使管子破裂,在安瓿管中加入0.51ml液体培养基,慢慢旋转安瓿
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