菊花茎段快繁技术生物技术及应用

1、江苏农林职业技术学院毕业论文设计.PAGE 12第12页，共13页：.；PAGE 13第13页，共13页 江苏农林职业技术学院 毕 业 设 计论 文SNL/QR7.5.4-3 菊花茎段快繁技术专 业 生物技术及运用 学生姓名 朱 杰 班 级 06生物技术及运用2班 学 号 061401205 指点教师 宋 刚 完成日期 2021-6-4 附1：成果评议学号061401205姓名 朱 杰 标题 菊花茎段快繁技术 指点教师建议成果： 评阅教师建议成果： 争辩小组建议成果： 院争辩委员会评阅意见及评定成果：争辩委员会主任签字盖章： 年 月 日附2：毕业设计论文义务书姓名朱杰学号061401205班级

2、06生物技术及运用2班标题菊花茎段快繁技术设计(论文)主要内容初代培育：如何选择适当的培育基、如何添加适当比例的激素、及如何选择适宜的外植体(茎段)、外植体生长情况丛生芽；继代/生根培育：如何选择适当的培育基、如何添加适当比例的激素、丛生芽生长情况生根成苗等；3. 初代/继代/生根培育过程中，能否染菌、死亡、褐变等并如何处置及分析。重点研讨问题1. 培育基配方比例；2. 培育时，初代、继代培育数据统计及其结果分析；3. 染菌、褐变等处置分析主要技术目的植体处置达标、培育基灭菌彻底、确保无菌接种操作、合理的培育环境其它要阐明的问题指点教师意见 指点教师签字： 年 月 日附3：指点教师意见 对论文

3、的简短评价：1.指出论文存在的问题及错误2.对发明性任务评价3.建议成果 优 良 中 及格 不及格 指点教师签字 年 月 日评阅教师意见 对论文的简短评价：1.指出论文存在的问题及错误2.对发明性任务评价3.建议成果 优 良 中 及格 不及格 评阅教师签字 年 月 日附4：争辩小组评议意见学号姓名 标题 争辩小组意见： 1、对论文的评价2.建议成果等级 优 良 中 及格 不及格3.需求阐明的问题 争辩小组长签字 年 月 日朱杰 菊花茎段快繁技术菊花茎段快繁技术摘要：以菊花茎段作为外植体，在初代丛生芽诱导培育基、继代培育基、生根培育基上先后诱导产生愈伤组织、丛生芽、根，最后完成植株再生。同时并对

4、每个环节存在问题进展研讨分析、整理，从而总结出适宜菊花茎段快繁的最正确方法。关键词：菊花；外植体；快速繁衍； Abstract: As a chrysanthemum stem explants, the early generation of problems in the bud induction medium, subculture medium, the rooting medium has induced callus, multiple shoot clumps, roots, and finally the completion of plant regeneration. A

5、t the same time there are problems that each and every aspect of the analysis, sorting, and to summarize for the rapid propagation of chrysanthemum stem the best way.Key words: Chrysanthemum; Explant; Rapid Propagation目录1.资料与方法91.1 资料及预培育91.1.1 资料91.1.2 预培育91.2实验设计和处置方法91.2.1培育基的制造与装瓶灭菌91.2.2接种室、器械及

6、超净任务台灭菌91.2.3外植体的选择与灭菌101.2.4 接种101.2.4初代丛生芽诱导培育101.2.5继代培育101.2.6生根培育101.2.7试管苗的移栽102.结果与分析112.1初代、继代培育结果处置112.2结论分析112.2.1继代培育扩展增殖方法112.2.2细菌、真菌污染及防治112.2.3褐变及其防治122.2.4玻璃化及其防治123.讨论124.小结13参考文献13致谢13 朱杰 菊花茎段快繁技术 第13页菊花Chrysanthemum morifolium Ramat.是菊科菊属的多年生宿根草本植物。株高20200cm，通常3090。茎色嫩绿或褐色，除悬崖菊外多为

7、直立分枝，基部半木质化。单叶互生，卵圆至长圆形，边缘有缺刻及锯齿。头状花序顶生或腋生，一朵或数朵簇生。舌状花为雌花，筒状花为两性花。舌状花分为下、匙管、畸四类，颜色丰富，有红、黄、白、墨、紫、绿、橙、粉、棕、雪青、淡绿等。筒状花开展成为具各种颜色的托桂瓣，花样有红、黄、白、紫、绿、粉红、复色、间色等色系。花序大小和外形各有不同，有单瓣，有重瓣；有扁形，有球形；有长絮，有短絮，有平絮和卷絮；有空心和实心；有挺直的和下垂的，式样繁多，种类复杂。在我国有着悠久的栽培历史2 。菊花主要靠扦插繁衍,也可进展嫁接繁衍。但扦插和嫁接繁衍均需较多的母株资料,且受季节和外界环境条件的限制,繁衍速度较慢,对于一些

8、名贵菊花种类和母株来源缺乏的种类,更不能及时满足消费和市场的需求。研讨和利用组织培育方法来繁衍菊花，可以在短期内大量繁衍，使得工厂化育苗成为能够，且利于新种类选育、脱毒复壮、种质资源保管等。菊花利用植物组培技术，可以运用菊花的茎尖、茎段和侧芽作为主选外植体,在不同激素程度的培育基上诱导产生愈伤组织、丛生芽和根,完成植株再生。本文以在脱毒实验中胜利移栽上盆且长势强壮的普通欣赏菊花的带腋芽茎段为研讨资料，从菊花丛生芽诱导、继代、生根培育着手研讨，以期寻求低本钱、高效、稳定的菊花茎段增殖方法，提高其商品化消费效率，满足菊花种苗商品化消费的要求9。1.资料与方法1.1 资料及预培育1.1.1 资料：供

9、试资料为脱毒实验中胜利移栽上盆且长势强壮的普通欣赏菊花。1.1.2 预培育：将供试盆栽菊花移至室内阳光充足处正常恒温培育57天。1.2实验设计和处置方法1.2.1培育基的制造与装瓶灭菌均以MS培育基为根本培育基，附加不同生长激素等配置而成。根据实践要求，培育基制造7见下表：表-1 培育基制造配比培育基配比蔗糖琼脂pH丛生芽诱导MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L3%0.7%5.8继代培育MS+6-BA3.5mg/L+NAA0.5mg/L3%0.7%5.8生根培育1/2MS+NAA0.2mg/L3%0.7%5.8将已配好的培育基，趁热分装在培育瓶中每瓶3550ml，用公用透性膜封好

10、后放入高压灭菌锅中灭菌、待用。1.2.2接种室、器械及超净任务台灭菌6接种室的地面、墙壁要擦洗干净，接种前用甲醛或高锰酸钾稀溶液熏蒸，也可以采用紫外灯灭菌。所需器械先用70%酒精浸泡，待接种前在酒精灯下用火灼烧到变红，冷却待用。超净任务台启动前，先用70%酒精擦拭台面，再翻开紫外灯照射20min,同时翻开风机。接种前封锁紫外灯，翻开日光灯。1.2.3外植体的选择与灭菌选用菊花的带腋芽茎段作为外植体。选取生长强壮的嫩茎先用洗衣粉水冲洗2次，再用自来水冲洗2次，以洗去外表泥土杂质为规范。然后移至超净任务台上, 用 75 %酒精处置 2030 秒, 再用无菌水冲洗 35 次, 转入 0.1 %升汞溶

11、液浸泡 810 分钟, 再用无菌水冲洗 46 次, 用滤纸吸干水分，最后将资料放入无菌的锥形瓶中封口待用。1.2.4 接种在超净任务台内，点燃酒精灯,并在酒精灯旁边任务,留意手和衣袖与酒精灯坚持适当的间隔 ,以免烧伤。在酒精灯上将操作器具烧红,待温度降至常温时进展操作。将选取用的外殖体资料切成0.51厘米左右带有腋芽的小段。用镊子夹取切好的外殖体资料,按极性方向直立迅速接种到锥形瓶的培育基中,深约23mm,留意培育瓶口一直在火焰下方,尽量使切口接触培育基。每个锥形瓶可接种34 块外殖体。接种时锥形瓶应坚持倾斜,接种后要迅速将瓶口在酒精灯上转动灼烧一遍进展消毒,然后迅速盖上公用透性膜封好。最后在

12、瓶壁上上标签,注明接种资料的称号、编号和接种日期。1.2.4初代丛生芽诱导培育接种完成后即转入培育室，即进展初代丛生芽诱导培育。培育温度22281.2.5继代培育当丛生芽长至1厘米长时，在超净任务台上将芽从中的小芽切割开，分别转入一样的新颖培育基上继代增值，每一个小芽又会以同样的繁衍系数产生芽从。培育温度22251.2.6生根培育3当丛生芽长成的小苗达23厘米时，在超净任务台上将其切下转入生根培育基中诱导生根。培育温度22251.2.7试管苗的移栽芽苗生根后已在生根培育基上长至 5 cm 左右，可将瓶塞翻开，让其由无菌环境转至有菌且湿度较低的环境之中约35天后，便可进展移栽，移栽初期留意遮光

13、。大规模的室外移栽需求在苗床上进展 ,包括整地、 移栽、管理等环节。2.结果与分析本文实验因时间限制，初步完成了菊花茎段从初代到继代的培育过程，并对生根培育进展了实际分析，同时对初代、继代培育的实验数据进展了完善的统计。2.1初代、继代培育结果处置：表-2 初代培育记录表：次数接种量真菌污染细菌污染褐变玻璃化正常成活率160127623355%2601013812847%360910203965%460119313660%统计：240423919457%表-3 继代培育记录表：次数接种量真菌污染细菌污染褐变玻璃化正常成活率1992130304545%2841527004250%31171833

14、036354%41082433304844%统计：408781236319849%成活率=正常/接种量1002.2结论分析：2.2.1初代、继代培育结果统计表-4 初代、继代培育数据统计培育类型7天生长情况14天生长情况21天生长情况28天生长情况初代培育茎段变粗，切口出现少量嫩绿色愈伤组织腋芽开场萌动，部分已有丛生芽构成丛生芽大量构成，部分已长成苗从苗从长势良好，可以做继代培育继代培育基部构成愈伤组织，丛生芽逐渐增长、增厚新的丛生芽逐渐增多，且速度加快丛生芽构成新的苗从，部分可以继续继代培育苗从根本长势良好，可继代培育或部分进展生根培育从外植体培育到长出丛生芽需求相当长的时间。但这一任务是一

15、劳永逸的,由于大量的扩展繁衍是在丛生芽产生以后。菊花的继代培育扩展增殖可以在两个时期进展。其一是在丛生芽生长以后,把长有丛生芽的愈伤组织块分别,分散的组织块在细胞分裂素程度较高的培育基上培育,让其分化出更多的芽。本实验采用的就是这种方法，本方法效率较高，缺陷是接种较繁琐。其二是在长成较高的无根苗以后,把无根苗切成段,用类似扦插的方法在生根培育基上培育，使其直接发育成完好幼苗。这种方法较为简单，但效率低，不建议采用。2.2.2细菌、真菌污染及防治4表-5 初代、继代培育中的污染统计培育类型污染分类污染率染菌表现初代真菌污染18%外植体周围有白色绒毛状菌丝，培育基出现绿、白菌斑细菌污染16%培育基

16、表层呈水渍状污染，外植体周围滴形云雾状污染继代真菌污染19%培育基表层出现黄、白色油滴状菌斑细菌污染30%培育基表层有粉红色如水渍状分布的菌斑污染率=污染统计总数/接种统计总数100%普通情况下，染菌的试管苗很难生根，即使能生根，根褐化景象明显。假设条件允许，可以在菊花培育基中附加50150mg/L的氨苄青霉素和50mg/L的硫酸丁胺卡那霉素，可以很好地抑制细菌的生长，而且氨苄青霉素会对菊花生根有促进作用， 而硫酸丁胺卡那霉素那么会抑制生根。本文实验中，外植体预处置相当重要，需严防外植体带菌，而且在本文实验中，普通在一周时间内可以发现染菌情况，凡细菌细微污染的，可以采取补救措施，详细如下：染菌

17、的已接外植体或丛生芽采用75%的酒精浸洗35分钟，然后再用无菌水冲洗23次，接入相应培育基即可，然后每隔23天察看下能否还有染菌景象。2.2.3褐变及其防治培育资料会向培育基中释放褐色物质，即酚类物质在多酚氧化酶的作用下，氧化构成褐色的醌类物质，导致植株中蛋白量变性、酶失活，而使培育基和培育资料逐渐变褐而死亡的景象。从表-2可以看出，第1、2次褐变较严重！为了防治褐变，本文菊花实验中，采用0.1%Vc溶液作为抗氧化剂，效果较佳。方法如下：已做灭菌处置的外植体即带腋芽茎段，放入0.1%Vc溶液中浸泡5分钟，不需无菌水冲洗，略微在无菌滤纸上滤干，将资料放入无菌的锥形瓶中封口待用。为验证运用0.1%

18、Vc溶液能抑制褐变的可行性，做了对比接种实验，同时在表-2中第3、4次明显可以看出，运用过0.1%Vc溶液浸泡过的茎段褐变率将明显低于未运用Vc溶液浸泡的茎段。表-6 0.1%Vc溶液对比接种实验次数0.1%Vc溶液总数褐变数褐变率1浸泡3013%未浸泡30413%2浸泡3000%未浸泡30620%3浸泡3000%未浸泡30517%褐变率=褐变数/总数100%2.2.4玻璃化及其防治由于试管苗发生生理失调，而构成发育不正常的组培苗。玻璃苗外观显示的共同特点是呈半透明状，并且可分为外观形状明显异常与根本无异常两种类型。玻璃苗的出现是植物组培技术运用于工厂化育苗的极大妨碍,因此试管苗的玻璃化是植物

19、组培过程中亟待处理的问题。本文菊花实验过程中，从表-2、表-3明显看出初代培育的玻璃化程度高于继代培育，为了防止玻璃化，继代培育采取加强光照及降低每瓶接种量来防止玻璃化景象，结果效果显著。3.讨论本文实验采用带腋芽茎段作为外植体，相对纯粹单一运用茎尖或茎段或侧芽要简单的多，且在技术操作上更加容易上手。从实际上讲,植物的任何部位均能在适宜的条件下胜利地进展培育，但实践上不同的植物部位,其分化和形状发生才干各不一样。菊花能作为外植体的部位很多，除本实验采用的带侧芽茎段外，尖、叶、花序梗、花序轴、花瓣和根等都能作为外植体。经过对菊花的组织培育技术的研讨,可以看出在以MS为根本培育基的条件下,菊花的生

20、长依托生长调理物质来控制。经过调理生长素与细胞分裂素的浓度比例可以有效的控制菊花芽的分化、生长及生根。这一新的组培技术的运用,将对引进的菊花优良种类的迅速扩繁、减少退化、节约本钱、提高劳动消费率以及实施工厂化育苗发扬积极的促进作用。4.小结本文结合实验数据，以科学严谨的方式对菊花茎段快繁的整体过程做了系统的论述和分析。主要从六个层次即培育基的制造、各项灭菌任务、初代丛生芽培育、继代培育、生根培育、试管苗的移栽着手，对每一步的操作过程进展细致论述。同时结合实验数据，对容易产生问题的方面做了全面的分析，并提出了合理的处理方案。参考文献：1 刘鹏，刘金，赵艳红，刘庆秀，张卫国.菊花的组织培育、脱毒与快繁技术研讨.内蒙古名族大学学报自然科学版，2005，204：4104132 周瑞玲，吴雨龙.菊花的组织培育及