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文档简介
1、食品中叶绿素含量的测定分光光度法一、实验原理、叶绿素含量的多少对植物源食品的色泽有重要的影响,例如绿茶的外形色泽就与叶绿 素含量有密切的关系。叶绿素在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体,当细胞死亡后,叶绿 体即被解离,随之叶绿素游离出来。游离的叶绿色很不稳定,对光、热都较敏感,在酸性 条件下很快生成褐色的脱镁叶绿素,加热可使该反应加速。但在弱碱条件下,叶绿素会被 水解为叶绿酸盐、叶绿醇及甲醇等。叶绿酸盐呈鲜绿色,这是一些果蔬产品加工时常用弱 碱处理的原因。高等植物体内叶绿素有a、b两种。两种都易容于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素a、 b分别对663nm和645nm波长的光有最大吸收,且两吸收曲线相
2、交于652nm处。因此,将 食品中叶绿素经适当提取,然后在645nm、652nm和663nm处测其吸光度,从而求得叶绿 素含量。二、试剂和器材豌豆尖、黄瓜。丙酮、石英砂。容量瓶100ml。滴管,玻璃棒,玻璃漏斗,研钵,可见分光光度计。三、实验步骤样品处理均匀称取豌豆尖或黄瓜样品5g于研钵中,加入少许石英砂(0.5一1g)和冷丙酮,充 分研磨后倒入100ml容量瓶中,然后用丙酮分次洗涤研钵并倒入容量瓶中,最后用丙酮定 容至100ml。准确称取洗净、擦十(去叶片中脉)的菠菜叶片5g于研钵中加少于CaCO研磨成匀浆,3用80%丙酮浸提。将上清液过滤(滤纸先用80%的丙酮湿润),用滴管吸取80%丙酮分
3、次把 研钵中叶绿素浸提液和残渣洗净,然后再用丙酮逐滴把滤纸上的叶绿素溶液洗净,全部转 移到具塞刻度试管。定容至15ml。测定充分摇匀后用滤纸过滤。取滤液分别在645nm、652nm和663nm处测其吸光度,以95 的丙酮做空白调零。结果计算按下式分别计算叶绿素a和叶绿素b的含量以及叶绿素总量(单位均为mg/g鲜重):叶绿素 a 含量二(12.71X*2.59X%)XVX100m叶绿素 b 含量=(22.88XA645-4.67XA663)XVX100叶绿素含量二(2.9X%+8.4XL)XVX1O m叶绿素含量二A XVX100% X34.5式中A663, A652 , A645表示在所指定波长下,叶绿素提取液的吸光度值;V叶绿素丙酮提取液的最终体积,mL;m所用果蔬鲜重,g。四、注意事项研磨时最好在较低的温度条件下,充分研碎样品组织,并以较快的速度完全测定。叶绿素在样品各组织中的分布是不均已的,因此取样时要相对一
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