药品质量标准中安全性项目的设定

1、药品质量标准中安全性检查项目的确定主要内容 安全性检查项目及其设定原则 细菌内毒素检查 热原检查 异常毒性检查 降压物质检查 过敏反应检查 溶血与凝聚试验安全性检查项目及其设定原则一、安全性检查项目包括：细菌内毒素检查 热原检查异常毒性检查 降压物质检查过敏反应检查 溶血与凝聚试验目的： 控制药品中存在的、可对生物体产生特殊的生理作用并影响到用药安全的某些痕量杂质。安全性检查项目及其设定原则杂质来源： 原料药（包括制备中间体、副反应产物等） 辅料及试剂 生产工艺 降解产物杂质特点： 化学结构不清楚 没有合适的理化检测方法 对生物体可产生特殊的生理作用 影响到用药的安全安全性检查项目及其设定原则

2、二、设定原则应体现： 安全有效 技术先进 针对性强 规范合理应根据： 药物的特性 制备工艺 药物的稳定性 安全性检查项目及其设定原则一般步骤：设定的必要性 要设定哪些项目？为什么要设定？不设定可不可以？限度的确定 临床前安全性研究结果、临床用药情况、实验动物情况方法学研究 可行性、可靠性、重现性、耐用性验证试验 至少三批样品安全性检查项目及其设定原则注意点：标准只是控制质量的有效措施之一，药品质量还要靠实施GMP加以保证。只有将标准的终点控制和生产的过程控制结合起来，才能全面有效地控制药品的质量。质量标准是药品质量控制内在需求的外在表现，药品质量与该药品的生产工艺、处方等因素紧密相关，因此同一

3、药品的质量标准存在差别是正常的和合理的。限度的规定，要在保证药品质量的前提下，根据生产所能达到的实际水平来制订。 细菌内毒素检查一、方法： 系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 在GMP条件下，无内毒素即无热原，控制内毒素就是控制热原，这是用细菌内毒素检查法代替热原检查法的依据。 两种方法：凝胶法和光度测定法凝胶法为限量测定方法，光度测定法为定量测定方法细菌内毒素检查凝胶法分为：限量试验和半定量试验； 光度测定法包括：动态浊度法、终点浊度法、 动态显色法、终点显色法两种方法可任选一种进行内毒素的检测当测定结果有争议时，除有

4、另有规定外，以凝胶法结果为准标准品：国家标准品标定、复核、仲裁 工作标准品复核、阳性对照细菌内毒素检查二、适用品种： 制剂：静脉注射、鞘内注射 原料：无菌分装原料 静脉注射用的抗生素类原料 不可灭菌制剂的原料（如生化药品、生物制品） 制备分装过程无法控制内毒素的注射剂的原料细菌内毒素检查三、限值（L）的确定：L=K/M L：供试品内毒素限值 K：人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量 K=5、2.5或0.2EU/（kg*h） M：人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量 人用最大剂量参考说明书有关规定 人均体重按60kg计，人均体表面积按1.55m2计 注射时间小于1小时的，按1小时计细菌内毒

5、素检查确定限值时注意点： 对于抗生素、抗肿瘤和治疗心血管疾病的药物，限值可在计算出的限值基础上适当严格； 大输液类，规格100ml的限值可按0.5EU/ml计； 规格 100ml或既有100ml规格又有 100ml规格的品种，限值应按说 明书规定的有效成分的最大用量计算； 可参考国外药典规定的限值，并与计算出的限值比较，以严 格者计。 如遇特殊情况，可根据生产和临床用药实际情况做必要调 整，但需说明理由。细菌内毒素检查四、方法学研究：原理： 即干扰试验，通过比较鲎试剂在已知含量内毒素水溶液中的反应和在相同内毒素含量的样品溶液中的反应，观察样品是否对鲎试剂存在干扰作用，从而判断样品是否适宜进行细

6、菌内毒素检查。 通过干扰试验，可确定样品对鲎试剂和内毒素的反应不存在干扰的稀释倍数（MVD）或浓度，该稀释倍数（MVD）或浓度可用于日常检验中。细菌内毒素检查适用情况： 当进行新药的细菌内毒素检查试验前，或无细菌内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时，须进行干扰试验; 当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。 细菌内毒素检查一般步骤：收集样品的有关信息 临床用法用量、国内外限值规定 物理化学特性（如溶解性、水溶液pH值、是否具有酶活 性、是否含有纤维素等干扰物质）确定细菌内毒素限值（L）和最大有效稀释倍数（MVD） L=K/M M

7、VD=cL/预试验 主要目的是确定不出现干扰的第一个样品稀释度，也就是不干扰浓度,从而为后续实验选择适当的稀释度（或浓度）。正式试验 照药典方法进行。细菌内毒素检查注意点：要求每个品种至少检测两个生产厂家的各三批样品，同时使用两个鲎试剂厂家的鲎试剂进行干扰试验。使用的鲎试剂过于灵敏，如样品本身内毒素偏高，则容易产生阳性，故在进行干扰试验时，一般使用较低灵敏度的鲎试剂。对于只能使用高灵敏度鲎试剂才能排除干扰进行检测的品种，说明方法的粗放度不够，耐用性不好，需慎重考虑。中药注射剂成分比较复杂，干扰因素也多，进行内毒素检查要慎重，也许用热原检查可能更合适。干扰试验与鲎试剂灵敏度无关，理论上某一浓度无

8、干扰，则对各种灵敏度的鲎试剂都没有干扰。细菌内毒素检查注意点：最大有效稀释倍数是指供试品溶液被允许稀释的最大倍数，它和具体选用的鲎试剂的灵敏度有关。由于不同厂商生产的鲎试剂其生产工艺、配方、质量参数等存在一定的差异，鲎试剂其抗干扰能力存在差别，因此应重视对鲎试剂的选择，或对鲎试剂灵敏度的考察。 五、验证试验 至少三批样品，按确定的限值和方法进行试验。热原检查一、方法 系将一定剂量的供试品溶液, 静脉注射家兔体内, 在规定的时间内, 观察家兔体温升高的情况, 以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。 热原检查是一种限度试验，反映了热原质引起哺乳动物复杂的升温反应过程，具有直观、代表性好的优点，

9、是一种成熟方法，各国药典均有收载。热原检查二、适用品种 主要用于生物制品、抗生素、生化药品类注射剂及在生产过程中容易被微生物污染或适宜微生物繁殖化学药品的注射剂； 做静脉注射的注射液，尤其是剂量较大的静脉滴注药，更要注意热原检查。 某些抗生素、抗肿瘤药品、放射性药品等影响家兔正常体温, 因此不适宜采用热原检查法。 目前存在着细菌内毒素检查逐步替代热原检查的趋势。热原检查三、剂量限值的确定一般为人临床每公斤体重每小时最大剂量的3-5倍；注射给药体积不超过10ml/kg；如果供试品溶液浓度太低，给药体积需超过10ml/kg才能保证制剂安全性的，一建议改用细菌内毒素检查；对大容量注射剂，应考虑供试品

10、溶液的等渗、pH值等，必要时需进行调整。 热原检查四、方法研究与验证目前尚未见进行方法研究的具体规定；一般情况下，确定给药剂量与给药体积后，取至少三批样品进行验证，若家兔未出现明显的毒副反应，体温波动正常，既认为该样品适宜采用热原检查法；有文献报道，在样品中外加定量的细菌内毒素（剂量一般为510EU/kg），然后按确定的剂量与体积给家兔静脉注射，若观察到明显的升温过程，可认为该样品适宜采用热原检查法。异常毒性检查一、方法 系将一定剂量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药, 在规定的时间内观察小鼠出现的死亡情况, 以判定供试品中是否符合规定的一种方法。 异常毒性是检查药品在生产制造过程中外来引入的

11、异物或药物降解产生的不正常毒性反应，主要与生产工艺水平有关，而不是检查药物本身毒性。异常毒性检查二、适用品种生化药注射剂(如肽、蛋白质、酶及辅酶、多糖、脂质等)及抗生素类注射剂；某些中药注射剂；在药品生产工艺进行较大改变后，特别是改变提炼、精制工艺时，需要在生产过程中追踪检查各工艺段的半成品及成品的毒性试验。异常毒性检查三、剂量限值的确定首先测定样品小鼠单次静脉给药的半数致死量（LD50）和最小致死量（LD5），并了解其毒性反应症状；异常毒性检查剂量应低于样品正常毒性剂量（LD5），并应高于人临床最大用药剂量；对于未测出LD50的注射液，以每只小鼠0.8ml的剂量按常规速度（3-5秒）静脉注射

12、，仍未见死亡或毒性反应，可以该剂量作为异常毒性检查限值。 异常毒性检查四、方法研究与验证可从半数致死量的测定中判断方法是否适宜；应首选静脉注射给药法；确定方法时应考虑实验室之间的差异、动物反应性的差异（如不同品系动物之间）和制剂的差异，应将药品本身的毒性反应与异常毒性反应区分开来；确定方法时应控制注射速度，注射速度太快会导致动物死亡时应把注射速度纳入标准中； 取至少三批样品进行验证。异常毒性检查五、相关进展目前异常毒性检查法仅中国药典和英国药典有收载；国外药典中，对大多数生物提取的生化药或由现代生物技术得到的组份单一、结构明确的产品,一般不设定异常毒性检查项；WHO 生物测定专家委员会在199

13、7年曾开会讨论异常毒性检查的必要性问题，认为其缺乏专属性和科学性，在实施GMP条件下生产的药品应当取消该项检查。降压物质检查一、方法 系比较组胺对照品与供试品引起麻醉猫血压下降的程 度，以判定供试品中所含降压物质的限度是否符合规定。 降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂 质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。 降压物质检查二、适用品种有可能产生类组织胺样急性降血压反应的静脉注射剂，如生化药注射剂(肽、蛋白质、酶及辅酶、多糖、脂质等)及抗生素注射剂；在用动物脏器或组织为原料制备生化药物的过程中，正常组织内存在的组胺及部分氨基酸脱羧形成的组胺、酪胺等胺类物质，均为这类杂质的来源。

14、 降压物质检查三、剂量限值的确定小剂量注射液一般根据临床用药剂量或不低于临床用量来估算剂量限值；大剂量注射剂如果按静脉注射原液2ml/kg剂量未见降压反应，该剂量可以作为给药限值。 降压物质检查四、方法研究与验证目前尚未见进行方法研究的具体规定；一般情况下，确定给药剂量与给药体积后，取至少三批样品进行验证，若动物未出现明显的毒副反应，血压波动正常，既认为该样品适宜采用降压物质检查法；降压物质检查中要重视动物的灵敏度测试，每一批样品在检测前都应进行动物的灵敏度测试，确定动物处于正常状态，并排除之前受试药品对动物血压产生的后续影响，保证结果的可信度。试验中应还注意控制实验室温度，室温波动太大会影响

15、结果。 降压物质检查五、相关进展随着生产工艺的提高，在已实施GMP 及理化检测手段发达的时代，测定组胺含量完全可用化学分析方法代替动物实验；现在仅中国药典和英国药典有收载，BP(2004 版) 仅附录有方法，具体品种都没有降压物质检查；ChP2005 版二部已有30 个品种(组份和杂质明确的) 删除了降压物质检查。在我国的药品质量标准中降压物质检查剂量设定存在一定问题，剂量多数设定较小。过敏反应检查一、方法 系将一定量的供试品溶液注入豚鼠体内, 间隔一定时间后静脉注射供试品进行攻击，观察动物出现过敏反应的情况，以判定供试品是否引起动物全身过敏反应。 过敏反应检查是观察动物接触受试物后所产生的全

16、身性反应，一般是指型又称速发过敏性反应。 过敏反应检查二、适用品种有可能含有异性蛋白（如原料药来源于动物组织、天然提取或发酵药物），或在临床应用中曾出现过敏反应的注射剂；过敏试验是检查异性蛋白的试验。药物中若夹杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种过敏反应，如皮肤红斑或丘疹，窒息、血管神经性水肿、血压下降，甚至休克和死亡。过敏反应检查三、剂量限值的确定剂量设置应首先观测供试品对豚鼠腹腔注射（或皮下注射）和静脉给药急性毒性反应，根据豚鼠毒性反应剂量和临床使用剂量来确定豚鼠致敏剂量和攻击剂量；一般致敏以腹腔注射为主，攻击以静脉注射为主，攻击剂量应大于致敏剂量，两种剂量均应小于急性毒性最小反应剂量

17、；一般致敏剂量应为人临床剂量（按公斤体重计）的10倍以上，攻击剂量应在20倍以上，但应不出现急性毒性反应。 过敏反应检查四、方法研究与验证首先进行预试验，应取至少9只豚鼠，分3组，三次致敏后，在首次致敏日后14日、21日、28日进行攻击以确定攻击最佳反应时间；必要时，预试验采用半成品进行致敏和攻击研究，以确定该注射剂成分和工艺有无致敏的可能性；取至少三批样品进行验证。过敏反应检查五、相关进展因为试验周期长，环境因素和动物质量对结果影响大，应注意采用SPF级豚鼠，在符合规定的设施条件下完成，同时设阳性对照组和空白对照组；药物过敏反应并不都是型,还有II 型细胞毒或溶细胞型, III 型免疫复合物

18、型或血管炎型, IV 型迟发型或结核菌素型,因此豚鼠过敏反应检查有一定局限性。尽管豚鼠是进行过敏反应检查最敏感动物，但因与人类存在较大的种属差异，存在着过敏反应的高阴性率与临床反应的高阳性率的差异，即相关性较差，并不能完全反映人的情况。 溶血与凝聚试验一、方法 系将一定量供试品与2%的兔（或羊）红细胞混悬液混合，温育一定时间后，观察其对红细胞状态是否产生影响的一种方法。 通常采用常规的体外试管法，观察受试物对红细胞状态是否产生影响。 溶血性是指药物制剂引起的溶血和红细胞凝聚等反应。溶血性反应包括免疫性溶血与非免疫性溶血。 溶血与凝聚试验 免疫性溶血是药物通过免疫反应产生抗体而引起的溶血，为型和型过敏反应；非免疫性溶血包括药物为诱发因素导致的氧化性溶血和药物制剂引起血液稳态的改变而出现的溶血和红细胞凝聚等。 溶血与凝聚的发生原因可能由于药物表面活性剂性能、药物成分或药物中存在的杂质，以及药液较大不等渗等引起的。溶血与凝聚试验二、适用品种中药注射剂，特别是用于静脉注射的大容量中药注射剂；已上市产品说明书不良反应项中已记载有溶血反应的有关品种。 溶血与凝聚试验三、剂量限值的确定注射液一般应为原液及其系列稀释液；粉针剂应用氯化钠注射液