免疫实验课：实验一 静脉采血法

1、实验一 静脉采血法目的：掌握静脉采血的方法和无菌操作技术。原理：使用注射器和针或真空采血器刺入浅静脉，用负压吸取所需的血量。器材：1.消毒棉签。 2.止血带。 3.针头及注射器或一次性真空采血 装置。试剂：碘伏标本：静脉血操作： 1.准备器具及标记试管 2.消毒双手 采血前，操作人员应清洁和消毒双手。 3.选择静脉 常用肘前静脉。 4.检查注射器 将针头和针筒紧密连接，并使针头斜面对准针筒刻度，抽拉针栓检查有无阻塞和漏气。最后排尽注射器中的空气，备用。 5.扎止血带 在采血部位上端约6cm处扎止血带。要求患者握紧和放松拳头几次，使静脉隆起。 6.选择进针部位 采用左手食指触摸进针部位的静脉。

2、7.消毒皮肤 用棉签蘸取碘伏自所选静脉穿刺处从内向外，顺时针方向消毒皮肤，待碘伏挥发后，再用75%乙醇棉签以同样方式拭去碘剂，待干。 8.穿刺皮肤 左手拇指固定静脉穿刺部位下端，右手持注射器，食指固定针头下座。保持针头斜面和针筒刻度向上，沿静脉走向使针头与皮肤呈30角斜行快速刺入皮肤，然后呈5角向前穿破静脉壁进入静脉腔。确认穿刺入静脉中心位置，并沿静脉走向将针头推入10-15mm。 9.抽血 右手固定注射器，左手缓缓向后拉注射器针栓，见少量回血后松开止血带，然后向后拉针栓到达采血量刻度。 10.止血 嘱受检者松拳，用消毒棉签压住进针部位。迅速拔出针头。 11.放血 从注射器上取下针头，将血液沿

3、试管壁缓缓注入到达标记处。含抗凝剂试管需迅速颠倒混匀几次。注意事项： 1.选择静脉 若肥胖患者静脉暴露不明显，可以 用消毒后的左手食指在采血部位触摸，发现静脉走向后凭手感试探性穿刺。 2.扎止血带 止血带压迫时间不能过长、绑扎不能过紧，以免淤血和血液浓缩，最好不要超过1min。 3.穿刺 不能从静脉侧面进针。针头进入皮肤有一定阻力，静脉壁阻力小更富弹性。 4.抽血 抽血时针栓只能向外抽不能向内推，以免造成空气栓塞。 5.止血 不能弯曲手臂，以免形成血肿。 6.放血 血液注入容器时最好取下针头后再注入，防止溶血，颠倒混匀几次，切忌用力振荡。 实验二 血细胞比容的测定温氏法目的：掌握血细胞比容温氏

4、测定法的原理及操作。原理：将定量的抗凝血液在一定的速度和时间离心后，血液中的各种不同成分互相分离，计算压实红细胞占全血的比值即为血细胞比容。器材： 1.温氏管 2.细长毛细滴管 3.离心机标本：EDTA-K2或肝素抗凝静脉血操作： 1.加标本 用细长毛细滴管吸取混匀的抗凝血插入温氏管底部，将血液缓慢注入到刻度“10”处，并用小橡皮塞塞紧管口。2.离心 将加好标本的温氏管置于离心机，以相对离心力RCF为2664g离心30min，读取压实红细胞层柱高的毫米数，然后再以同样的速度离心10min，至红细胞层高度不再下降为止。3.读数 以还原红细胞层表面为准，读取红细胞层柱高的毫米数，乘以0.01，即为

5、HCT值。4.报告方式 0. L/L参考值： 1.男 0.380-0.508 2.女 0.335-0.450注意事项 1.采血 同红细胞计数，但穿刺应稍深，使血液自动流出，取第二滴血检验。静脉采血时以空腹采血为好，采血应顺利。 2.加标本 抗凝血加入温氏管前应反复轻微振荡，使血红蛋白与氧充分接触，注入温氏管时避免产生气泡。 3.离心 要确保离心条件，以相对离心力RCF为2664g离心30min。 RCF（g）=1.118有效离心半径（cm） 转速2（r/min）。本实验所用离心机有效离心半径为10cm。4.读数 离心后血液分为5层：自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞层和有核红细胞层、还原红

6、细胞层（紫黑红色）、氧合红细胞层（鲜红色）。读数以还原红细胞层表面为准。5.报告结果 上层血浆如有黄疸及溶血现象应予注明。实验三 红细胞平均值计算RBCHbHCTMCVMCHMCHC1红细胞平均体积（MCV）含义：平均每个红细胞的体积， 以fl为单位。1L=1015fl 计算：MCV=HCT（LL）/RBC （个L）1015fl 2. 红细胞平均血红蛋白含量（MCH）含义：平均每个红细胞所含血红 蛋白的量，以pg为单位。 1g=1012pg计算：MCH=Hb（gL）/RBC（个L ） 1012 pg 3平均RBC血红蛋白浓度(MCHC)含义：平均每升红细胞所含血红 蛋白的量，以g/L表示 计算

7、： MCHC=Hb（gL）/HCT（L L ）4参考值、临床意义：用于贫血的形态学分类及病因分析MCV：（8292）fl 92：大cell性贫血； 360：高色素性贫血； 92 31 正常正常cell性贫血 正常 正常 正常 单纯小cell性贫血 82 27 正常 贫血形态学分类实验四 网织红细胞计数 【目的】 掌握网织红细胞试管法的原理及操作方法。 【原理】 网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体和核糖核酸(RNA)等嗜碱性物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后呈蓝色网织状或点粒状，可与完全成熟的红细胞区别。试管法：器材 1.显微镜。 2.香柏油、擦镜纸、清洁液。 3.试管、试管架。 4.玻片

8、。 试剂 1. 10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液 2. 新亚甲蓝N溶液标本 新鲜全血操作 1.加染液 于试管中加入染液2滴。 2.加血 在加入染液的试管中注入新鲜全血2滴，立即混匀，室温下放置15-20min。 3.制备涂片 取混匀染色血1滴制成薄涂片，自然干燥。 4.观察 低倍镜下观察红细胞的分布和染色情况，并选择红细胞分布均匀、着色好的部位。 5.计数 在油镜下对所选择部位计数至少1000个红细胞中的网织红细胞。 6.计算 网织红细胞百分数=计数的网织红细胞数/1000 网织红细胞绝对值=红细胞数网织红细胞百分数7.报告方式 网织红细胞百分数：0. 网织红细胞绝对值： 109参考值 成人：0

9、.005-0.015；新生儿：0.03-0.06；儿童：0.005-0.015注意事项 1.染液质量直接影响网织红细胞计数的准确性。煌焦油蓝染液长期普遍应用，但溶解度低，易形成沉渣吸附于红细胞表面；新亚甲蓝对Ret染色力强且稳定，是WHO推荐使用的染液。试剂应定期配制，以免变质沉淀。瑞氏1染液质量直接影响网织红细胞计数的准确性。煌焦油蓝染液长期普遍应用，但溶解度低，易形成沉渣吸附于红细胞表面；新亚甲蓝对Ret染色力强且稳定，是WHO推荐使用的染液。试剂应定期配制，以免变质沉淀。瑞氏染液复染可使网织红细胞数值偏低。 2染色时间不能过短，室温低时，可放置37 温箱或适当延长染色时间。染液与血液的比

10、例以11为宜。 3因网织红细胞在体外仍继续成熟，其数量随着保存时间的延长而递减，所以标本采集后应及时处理；标本染色后也应及时测定，因染料吸附可人为增高网织红细胞计数值。 4选择红细胞分布均匀、网织红细胞着色好的部位计数。由于网织红细胞体积较大，故应兼顾血片边缘和尾部。实验五 红细胞沉降率测定魏氏法【目的】掌握魏氏法测定血沉的方法及操作方法。【原理】 将一定量的枸橼酸钠抗凝全血置于特制血沉管中，直立于血沉架上。由于红细胞比重大于血浆，在离体抗凝血中能克服血浆阻力而下沉。1h后读取上层血浆高度的毫米数值，即为红细胞沉降率。 器材1.血沉管长300mm，内径2.5mm的厚壁玻璃管，自上而下有0mm200mm刻度2.血沉架使血沉管垂直放置，应置于稳固的工作台上，注意防震3.试管、吸耳球、注射器等【标本】 新鲜全血【操作】1.静脉采血 采静脉血1.6 ml ，加入含枸橼酸钠抗凝剂的试管中，混匀。3.吸血 混匀全血吸入血沉管内至刻度“0”处，拭去管外残留余血。4.立血沉管 将血沉管直立于血沉架上。5.读数 1h末准确读取红细胞下沉后暴露出的