积雪草提取物编制说明

1、国际商务标准积雪草提取物编制说明一、任务来源本标准的制定工作，是由中国医药保健品进出口商会提出而进行的，国际商务标准植物提取物编号为 WM。本标准由桂林莱茵生物科技股份有限公司、中国医药保健品进出口商会等单位负责起草。二、标准制定的意义积雪草提取物在国际市场上主要用于保健品及化妆品，国际上几家大保健品公司及化妆品公司均有 用到此产品。用到积雪草提取物的保健品上1000种，广泛应用于医药、食品、饮料、化妆品等工业。 每年国内该产品的出口额上千万美金，市场前景十分看好。目前该提取物，在国内没有相应的国家和行 业标准，因此无法对产品中有效成份积雪草苷、总苷的含量及污染物限量进行有效控制，各生产企业只

2、 能依靠自己制定的企业标准进行检测及质量控制，由于不同企业的提取工艺和质量控制水平不同，产品 质量差异较大，又无统一标准，导致积雪草提取物在国内外销售市场很容易出现质量纠纷，并存在食品 安全隐患，严重制约了积雪草深加工产业的发展，因此迫切需要制定积雪草提取物的出口商务标准。制 定本标准将使积雪草提取物的质量控制符合食品安全要求，同时能更好地满足国内外市场的质量控制要 求，有助于提高积雪草提取物生产企业的质量控制水平和产品的市场竞争力，促进积雪草产业的发展。三、标准编写规则本标准遵循GB/T1.1-2000标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写规则；GB/T20001.2-2001 标准化工

3、作指南 第2部分：采用国际标准的规则和GB/T20001.4-2001标准编写规则第4部分： 化学分析方法1康规则编写。还参照相关国家标准编写指南的要求。四、标准的制(修)订与起草原则1、积雪草提取物广泛应用于食品、化妆品、药品等领域，由于没有现行的积雪草提取物质量标准， 本标准在制定过程中，仅参照和引用了国内外相关食品、药用植物等标准。2、积雪草提取物应用广泛，规格也较多，本标准中选取最常规的25%积雪草总苷制定标准。3、本标准的重点放在安全性指标：重金属、微生物等。4、积雪草总苷的成分在中国药典含积雪草苷、和羟基积雪草苷；欧洲药典中包括了积雪草苷、积雪 草酸，羟基积雪草苷、羟基积雪草酸4种

4、，这两种归类都与实际情况有差异，在日常贸易中也存在争论。 需要根据实际情况重新确定积雪草总苷的成分。5、现在测试方法用的最多的是中国药典和欧洲药典上规定的方法，两者各有差异，需要根据两种方 法的优缺点，在两者的基础上重新建立新方法。五、标准编制依据和主要内容1、积雪草提取物广泛应用于食品、化妆品、药品等领域，由于没有现行的积雪草提取物质量标准， 本标准在制定过程中，仅参照和引用了国内外相关食品、药用植物等标准。2、现在测试方法用的最多的是中国药典2010版一部P389积雪草总苷4和European pharmacopoeia 7.0 (01/2008:1498) corrected 6.05中

5、的方法。本标准中的测试方法参照中国药典方法，为了使羟基积雪草酸和积雪草酸获得更好的峰形和分离度，进行了以下的改进：用磷酸调节了环糊精溶液的pH至4， 采用梯度洗脱条件，20分钟前流动相比例与中国药典方法无差异，20分钟-60分钟乙腈比例由24%变化至 45%，等度保持15分钟。按E.P7.0中规定以积雪草苷为标准品乘以不同的校正因子，来计算羟基积雪草 苷、积雪草苷、积雪草酸、羟基积雪草酸的含量，欧洲药典中羟基积雪草苷的校正因子为1.017、羟基 积雪草酸的校正因子为0.526、积雪草酸的校正因子为0.509。3、本标准设立了粒度的测定，并引用了中国药典2010版中规定粒度的测定方法67。4、本

6、标准设立了总重金属、砷、铅、镉、汞、铜的限量指标，这六项指标，是目前国内外食品中比 较常用的重金属项目。其限量标准，参照并严于WM-T2-2004药用植物及制剂外经贸绿色行业标准罔，测 试方法采用GB/T 5009.74-20039测定总重金属;采用GB 5009.12-2010测定铅含量、GB/T 5009.15-2003 测定镉含量11、中国药典2010版一部附录IXB铅、镉、砷、汞、铜测定法测定砷、汞的含量12，并参 考了GB/T5009.11-2003、GB/T 5009.17-20033- 14。5、 本标准设立了水分不大于5%指标，参照了 GB7101-2003固体饮料卫生标准 3

7、。引用了 GB 5009.3-2010食品中水分的测定U6作为检测方法。6、本标准设立了灰分不大于3%的指标，该指标抽查多批25%积雪草总苷确立的。引用了 GB5009.4-2010 食品中灰分的测定切。7、本标准参考了 GB7101-2003固体饮料卫生标准19中普通型及其他产品要求，综合考虑，细菌指标 定为小于1000cfu/g,霉菌和酵母定为小于100cfu/g,大肠菌群为小于30MPN/100g，沙门氏菌、金黄色葡萄 球菌、大肠杆菌均为不得检出。微生物检测方法分别采用了 GB4789.2-2010食品安全国家标准食品微 生物学检验 菌落总数测定，GB4789.15-2010食品安全国家

8、标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数， GB4789.3-2010食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数，GB4789.4-2010食品安全国家标 准食品微生物学检验沙门氏菌检验，GB4789.10-2010食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色 葡萄球菌检验，GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数20- 25。8、积雪草总苷为积雪草提取物中特定的成分，因此本标准中没有设立鉴别的标准。本标准为推荐性国家标准。表1技术指标及编制依据项目指标参考标准粒度（80目筛通过率），%399%参考客户要求及提取物特性重金属（以Pb计）/（mg/kg）W10参照并严于

9、WM-T2-2004药用植物及制剂 外经贸绿色行业标准（20mg/kg）的指标铅(Pb) / (mg/kg)W3.0参照并严于WM-T2-2004药用植物及制剂 外经贸绿色行业标准（5.0mg/kg）的指标镉(Cd) / (mg/kg)W0.3参照WM-T2-2004药用植物及制剂外经贸 绿色行业标准（0.3mg/kg）的指标砷(As) / (mg/kg)W1.0参照并严于WM-T2-2004药用植物及制剂 外经贸绿色行业标准（2.0mg/kg）的指标汞(Hg) / (mg/kg)W0.1参照并严于WM-T2-2004药用植物及制剂 外经贸绿色行业标准（0.2mg/kg）的指标铜(Cu) /

10、(mg/kg)W5.0参照并严于WM-T2-2004药用植物及制剂 外经贸绿色行业标准（20.0mg/kg）的指标水分，%W5.0参考客户要求并严于中国药典2010版积雪草总苷(干燥失重10.0%)的指标灰分，%W3.0参考客户要求及提取物特性积雪草总苷w/%325参考客户要求及提取物特性细菌总数/ (cfu/g)W1000综合参照中国药典微生物限度标准中不 含药材原粉的制剂(1000 cfu/g)和含药 材原粉的制剂(10000 cfu/g)霉菌及酵母菌数/ (cfu/g)W100参照中国药典微生物限度标准(100 cfu/g)大肠菌群/ (MPN/100g)W30参照并严于GB7101-2

11、003固体饮料卫生标准(40MPN/100g)大肠杆菌不得检出参照GB7101-2003固体饮料卫生标准沙门氏菌不得检出参照GB7101-2003固体饮料卫生标准金黄色葡萄球菌不得检出参照GB7101-2003固体饮料卫生标准六、名称、分子式、相对分子质量及CAS编号1、中文名称：积雪草提取物。2、英文名称:Gotu Kola P.E3、分子式、结构式、分子量：积雪草提取物中积雪草总苷有4种组分。其结构式、分子量及分子式如 表2所示。R4表2积雪草总苷各组分组分R1R2R3R4分子量积雪草苷 AsiaticosideHHCH3Rha (1-4) -glc(1-6) -glc959.13羟基积雪

12、草苷 MadecassosideOHCH3HRha (1-4) -glc (1-6) -glc975.13积雪草酸 Asiatic acidHHCH3H488.70羟基积雪草酸Madecassic acidOHCH3HH504.70七、产品技术要求1、性状描述：积雪草提取物为黄棕色，有积雪草的特殊气味。2、积雪草提取物指标成分含量范围：积雪草总苷325%。3、技术要求：积雪草提取物的技术要求见表3。表3积雪草提取物技术要求项目指标检验方法粒度（80目筛通过率），%399%附录A中A.2（参照国药典2010版一部附录XI B第二法）重金属（以Pb计）/（mg/kg）W10GB/T5009.74铅

13、(Pb) / (mg/kg)W3.0GB5009.12镉(Cd) / (mg/kg)W1.0GB/T5009.15砷(As) / (mg/kg)W1.0GB 5009.11汞(Hg) / (mg/kg)W0.1GB/T5009.17铜(Cu) / (mg/kg)W5.0GB/T5009.13水分，%W5.0GB 5009.3灰分，%W3.0GB5009.43积雪草总苷w/%25附录A.3（检测方法参照中国药典2010版一 部P389,等度变更为梯度；系数计算参照 欧洲药典7.0）细菌总数/ (cfu/g)V1000GB 4789.2霉菌及酵母菌数/ （cfu/g）V100GB 4789.15大

14、肠菌群/ (MPN/100g)V30GB 4789.3大肠杆菌不得检出GB 4789.38沙门氏菌不得检出GB4789.4金黄色葡萄球菌不得检出GB4789.10八、方法验证8.1 HPLC 检测8.1.1仪器8.1.1.1分析天平，感量为0.01mg。8.1.1.2超声波清洗仪；8.1.1.3高效液相色谱仪（附紫外DAD检测器）。8.1.2试剂和溶液8.1.2.1甲醇，色谱纯。8.1.2.2乙月青，色谱纯。8.1.2.3磷酸，分析纯。8.1.2.4超纯水。8.1.2.5 2mmolp环糊精（pH=4）：称取2.27gp -环糊精，加入1000ml超纯水超声溶解后，用磷酸调节 溶液至pH=4.

15、超声混合均匀后经0.45网滤膜过滤，即可。8.1.2.6标准品：积雪草苷（中国食品药品检定研究院）8.1.3色谱条件及系统适用性8.1.3.1色谱条件a） 色谱柱：Luna C18,250mmX 4.6mm, 5pmb）流动相：乙青:2mmol/Lg环糊精（磷酸调节pH=4） =24： 76 （V/V）梯度条件:TimeB% （乙腈）A%（P环糊精缓冲液）0.0024.0076.0020.0024.0076.0060.0045.0055.0075.0045.0055.0076.0024.0076.00c）检测波长：205nm。d）流速：0.8mL/mine）进样量：5以18.1.3.2系统适用

16、性理论塔板数按积雪草苷峰计算应不低于4000。8.1.4操作方法8.1.4.1对照品溶液的制备精密称取积雪草苷适量，用甲醇配制成浓度约为0.8mg/ml的溶液，备用。8.1.4.2供试品溶液的制备称取积雪草提取物（约含积雪草总苷30%）约150mg，置25ml容量瓶中，甲醇超声溶解，冷却至室 温，甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45p m滤膜，待测。8.1.4.2.1试验结果6次试验，供试品溶液与对照品溶液的图谱见附录1。8.2粒度的测定8.2.1仪器8.2.1.1天平：感量为0.1 mg。8.2.1.2分析筛。8.2.2操作步骤取接收盒，将分样筛放在接收盒上，称取约40g提取物粉末（mg）置于分

17、样筛内，将筛盖盖好。将分样筛保持水平状态，左右往返轻轻筛动5min，称量接收盒内的提取物粉末质量（m2，g）。8.2.3验证试验结果10次平行测定结果及相对标准偏差见表5。产品技术要求80目99%以上通过。表5 10次平行粒度测定结果样品样品重量接收盒内样品重量80目通过率编号gG%140.025039.708899.21240.284040.022299.35342.102941.850399.40441.121840.817599.26540.804740.523199.31642.506342.183399.24742.302142.006099.30840.210239.948899.

18、35941.216140.923599.291041.510641.232599.33X99.30S0.00057CV%0.0578.2.4精密度要求取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。两次平行测定结果的绝对差值，不大于算术平均值 的 0.5%。8.3重金属测定检验方法采用GB/T5009.74-2003食品添加剂中重金属限量试验8.3.1仪器8.3.1.1天平：感量为0.1mg8.3.1.2马弗炉8.3.2操作步骤准确称取5g样品，精确至0.0001 g，按GB/T5009.74-2003食品添加剂中重金属限量试验 干法消 解进行测定。表6重金属添加试验结果8.3.3验证试验结果样品编

19、号样品10mg/kg 铅含 量标准液10mg/kg铅含量标准液+ 样品20mg/kg铅含量标 准液+ 样品1暗色不明显2暗色不明显3暗色不明显验证结果见表6。4暗色不明显5暗色不明显6暗色不明显7暗色8暗色9暗色10暗色11暗色12暗色13与10mg/kg铅标准液颜色 相当14与10mg/kg铅标准液颜色 相当15与10mg/kg铅标准液颜色 相当16与10mg/kg铅标准液颜色 相当17与10mg/kg铅标准液颜色 相当18与10mg/kg铅标准液颜色 相当19暗色加深20暗色加深21暗色加深22暗色加深23暗色加深24暗色加深8.4铅、镉、汞、砷、铜的测定铅的检验方法采用GB/T5009.

20、12-2003食品中铅的测定（第一法）石墨炉原子吸收光谱法；镉的 检测方法采用GB/T5009.15-2003食品中镉的测定（第一法）石墨炉原子吸收光谱法；碑、汞、铜的 检测方法采用中华人民共和国药典2010版一部附录IXB铅、镉、砷、汞、铜的测定。8.4.1仪器8.4.1.1天平：感量为0.1mg。8.4.1.2原子吸收光谱仪（石墨炉、火焰、氢化物发生器）。8.4.2操作步骤准确称取适量样品，依据国标及药典方法进行各个项目的测定。8.4.3验证试验结果验证结果见表7。表7铅、镉、汞、神、铜试验结果样品 编号铅结果mg/kg镉结果mg/kg汞结果mg/kg神结果mg/kg铜结果mg/kg10.

21、220.31-0.231.8220.190.29-0.221.8530.230.28-0.201.7940.200.30-0.211.7550.180.30-0.211.8460.200.29-0.231.7570.220.32-0.211.8680.190.28-0.221.7690.210.30-0.241.81100.220.31-0.201.87X0.210.300.221.81S0.0170.0130.0130.046CV%8.104.335.912.548.4.4精密度要求取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。两次平行测定结果的绝对差值，铅应不大于算术平 均值的20%，镉应不大

22、于算术平均值的10%，砷应不大于算术平均值的15%，汞应不大于算术平均值的 20%，铜应不大于算术平均值的10%。8.5水分的测定检验方法采用GB/T5009.3-2010食品中水分的测定（第一法）直接干燥法。8.5.1仪器8.5.1.1天平：感量为0.1mg。8.5.1.2电热恒温干燥箱8.5.2操作步骤准确称取2g样品，精确至0.0001 g，按GB/T5009.3-2010食品中水分的测定（第一法）直接干燥法 测定。表8干燥失重10平行样品测定结果8.5.3验证试验结果样品编号称量瓶重量G样品重量g称量瓶+样品干燥至恒 重重量g干燥失重%132.59622.078034.63082.09

23、234.49242.058236.50632.15335.82602.034937.82002.01验证结果见表8。433.61092.077435.64452.11531.07412.069133.10022.08638.01552.070240.04162.13736.49512.064538.51732.05835.02702.058837.04322.07936.13372.077638.16772.101034.04742.058636.06242.12X2.09S0.041CV%1.968.5.4精密度要求取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。两次平行测定结果的绝对差值，应不大

24、于算术平均值的5%。8.6灰分的测定检验方法采用GB/T5009.4-2010食品中灰分的测定。8.6.1仪器8.6.1.1天平：感量为0.1mg。8.6.1.2马弗炉8.6.2操作步骤准确称取3g样品，精确至0.0001 g，按GB/T5009.4-2010食品中灰分的测定8.6.3验证试验结果验证结果见表9。表9灰分10次平行样测定结果样品编号坩埚重量G样品重量g坩埚+样品灼烧至恒重 重量g灰分%154.13753.040254.17161.12259.04643.004159.07911.09354.44633.053554.48021.11454.27703.091054.31071.

25、09557.16083.064857.19451.10656.66223.020156.69601.12755.51553.068455.54891.09855.30743.002655.34071.11954.44403.039554.47681.081054.85853.040254.89191.10X1.10S0.014CV%1.278.6.4精密度要求取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。两次平行测定结果的绝对差值，不大于算术平均值 的 15%。8.7积雪草苷及积雪草总苷的测定8.7.1仪器和用具8.7.1.1分析天平，感量为0.01mg。8.71.2超声波清洗仪。8.7.1.3高

26、效液相色谱仪（紫外检测器或二极管阵列检测器）。8.7.2试剂和溶液8.7.2.1甲醇，分析纯。8.7.2.2乙月青，色谱纯。8.7.2.3磷酸（分析纯8.7.2.4超纯水。8.7.2.5 2mmol/Lp环糊精缓冲液：称取2.27gp -环糊精，加入1000ml超纯水超生溶解后，用磷酸调节溶 液至PH=4.超声混合均匀后过0.45网膜滤过，即可。8.7.2.6标准品：积雪草苷对照品单体（购自中国食品药品检定研究院）。积雪草提取物定性对照品（供总苷含量测定时定性用，含羟基积雪草苷、积雪草苷、羟基积雪草酸、积 雪草酸4种成分）8.7.3色谱条件及系统适用性8.7.4色谱条件a）色谱柱：Luna C

27、 250mmX4.6mm, 5旦mb）流动相：乙青:2mmol/L8环糊精（磷酸调节PH=4） =24： 76 （V/V）TimeB% （乙青）A%（P环糊精缓冲液）0.0024.0076.0020.0024.0076.0060.0045.0055.00C）流速：0.8ml/mind）检测波长：205nme）进样量：5p lf）柱温：25C8.7.4.1系统适用性理论塔板数按积雪草苷峰计算应不低于4000。8.7.5操作方法8.7.5.1先用10%的乙月青，90%的水以1ml/min的流速冲洗柱子30min，然后再调出方法。8.7.5.2标准品溶液的制备：积雪草苷对照品溶液的制备：精密称取积雪

28、草苷适量，用甲醇溶解，配制成 浓度约为0.6 mg/mL的标准使用溶液，备用。8.7.5.3定性对照品溶液的制备：精密称取积雪草提取物定性对照品适量，用甲醇超声溶解，定容，备用。8.7.5.4样品溶液的制备：精密称取积雪草提取物（约含积雪草苷10%） 150 mg，置25 mL容量瓶中，甲 醇超声溶解，冷却至室温，甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45 gm有机滤膜，待测。8.7.5.5依次注射空白溶液、对照品溶液、定性对照品溶液、样品溶液进行检测，外标法定量。8.7.5.6测完后用10%的乙青，90%的水1ml/min的流速冲柱子30min，再用乙青冲柱子。8.7.5.7结果计算总皂苷含量以质量分

29、数W计，数值以表示，按式（A1）计算：Wi = Ia +（BX1.017）+（CX0.526）+（Dx0.509）xc x VxP 乂的。 （A1）A x m式中：A样品中积雪草苷的峰面积；B样品中羟基积雪草苷的峰面积；C样品中羟基积雪草酸的峰面积；D样品中积雪草酸的峰面积；c.一积雪草苷对照品的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V一样品的定容体积，单位为毫升（mL）；P积雪草苷对照品的纯度，%；A.一积雪草苷对照品的峰面积；m样品的称样量，单位为毫克（mg）；1.017羟基积雪草苷的校正因子0.526一羟基积雪草酸的校正因子0.509积雪草酸的校正因子羟基积雪草苷、积雪草苷、羟基积雪草酸

30、、积雪草酸的校正因子，按表11计，样品液相图谱如附录2。表11名称羟基积雪草苷积雪草苷羟基积雪草 酸积雪草酸分子量975.13959.13504.70488.70校正因子F1.0171.0000.5260.509保留时间：T羟基积雪草苷VT积雪草苷VT羟基积雪草酸VT积雪草酸。8.7.6验证实验结果验证结果见表12,图谱见附录2。表12积雪草苷6次平行测定结果编号称样量（mg）积雪草昔 峰面积积雪草昔 含量（）积雪草总昔 峰面积积雪草总昔含量（）1221.131585.5421111.265453.5465535.712222.411601.3542411.315662.4550935.653

31、249.601800.1150511.326137.5300035.664251.001805.5613811.296139.1111335.695222.681604.3510311.305664.0134235.606220.741586.0430911.285454.6531635.82X11.2935.69S0.0220.075CV%0.190.218.7.7色谱系统稳定性试验取积雪草苷标准品溶液，连续进样6针1）重复性：6次测试值的峰面积及保留时间的RSD值，以积雪草苷计，峰面积的RSD值应不高于1.0%，保留时间的RSD值应不高于2.0%。2）拖尾因子，以4个积雪草苷组分中拖尾因子

32、最大的计，应不高于2.0。3）理论塔板数，以4个积雪草苷组分中理论塔板数最小的计，应不低于4000。结果见表13、表14，图谱见附录3。表13重复性试验结果编号积雪草保留时间积雪草峰面积129.7433370.84741229.7393375.26099329.6773380.94019429.7043374.34717529.6913377.26929629.7773388.88184X29.7223377.9240S0.0386.320.130.19CV%表14色谱系统稳定性试验结果编号项目结果15次测试峰面积的RSD值0.19%25次测试保留时间的RSD值0.13%3拖尾因子1.154理

33、论塔板数608898.7.8线性积雪草苷标准品溶液曲线的制备精密称取积雪草苷312.93mg，置于50mL容量瓶中，加入甲醇溶液超声溶解，放置至室温，甲醇定 容至刻度，摇匀后做储备液使用。用移液管移取适量，甲醇定容至刻度，依次逐级稀释制备其俪个不 同浓度的溶液，将以上制备好的7个不同的标准品溶液各5以1分别注入HPLC仪，制备积雪草苷标准溶 液曲线，结果如表15、表16表15积雪草苷曲线的制备样品 编号积雪草昔浓度mg/ml积雪草昔峰面积线性方程相关系数R210.0160221.2486520.0801108.07154Y=1272.48287X+22.65222630.4006538.558

34、59R2=0.9999641.00141329.3168952.50343248.6311065.00696412.5078176.25867950.19727表16积雪草苷的标准曲线8.7.9稳定性考察取积雪草苷溶液，每1.5h进样一次，连续进样11针，前10针峰面积显示样品溶液峰面积变化不大，在11针时样品溶液峰面积显著增大。实验说明积雪草苷样品溶液在15小时内稳定。结果如表17编号峰面积峰面积RSD12714.8781222717.6642432723.7342042721.7650252723.951110.31%62725.0594572732.9843482733.97082927

35、41.80933102734.27918112813.201598.7.10回收率试验取已知含量的积雪草提取物加入一定量的积雪草苷标准品，配制成适宜的浓度，每个浓度配制3份， 进行HPLC分析。积雪草苷回收率结果应在98%-102%之间。回收率结果见表18表18积雪草苷回收率试验结果样品 编号积雪草昔结果mg积雪草昔本底mg积雪草昔结果-本 底mg积雪草昔加入值mg回收率%143.9918.6125.3825.15100.91243.1317.9625.1825.15100.12348.1822.7425.4425.15101.16458.0430.9927.0526.86100.70560.

36、7433.6827.0526.86100.70668.5141.5826.9326.86100.26九、标准起草过程2012.6第四届植物提取物分会理事会第一次会议，植物提取物标准会员会成立，接受积雪草提取 物标准制定任务。2012.7 成立标准起草小组。开展制标文献调研，完成资料搜集和整理工作。按照要求，确定本标准 的技术指标和检验方法，同时完成实验材料的采购和准备。开展前期验证试验工作。2012.82012.9完成技术指标和分析方法的确定工作。对样品各项技术指标的检测方法进行了方法 验证。按照GB/T1.1-2000、GB/T20001.2-2001和GB/T20001.4-2001的要求，编制标准文本初稿和编制 说明初稿。2012.92012.10修改整理上