PCR试验室报批细节、注意事项、常见问题问答

1、时间：二O二一年七月二十九日报批细节之答禄夫天创作时间：二O二一年七月二十九日1、技术档案：技术人员简历表、培训档案、要求有实质性文件如每人的学历证书、上岗证、科研功效（课题）、技术文章、获奖证书等的复印件2、仪器档案：实验室所有仪器的购买、使用、校正、放置地址、出厂编号、说明书复印件等实验室所有仪器维护校正记录如：加样器、温度计、温湿度计需出具计量局校正陈说文件（可每种只校正一套作为标准）.扩增仪需有仪器厂家专业技术人员维护校正陈说，和校正后的参数.加样器的出厂编号、使用时间、校正记录.5700维护后验证记录一用同一公司或校准试剂或用自制质控血清并记录数值3、其他细节：垃圾处置：按生物污染性

2、制品，交医院统一处置.仪器简单把持流程标识表记标帜笔、枪头盒等一些小物品都要标明分区时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日仪器的申请、推销、使用、验证法式样本收集（针对临床医护人员）、运输、收集法式样品的唯一编号原则一应区分开分歧天、分歧种类的标本标本的保管法式一包括处置前、刚处置后、陈说发放后的原 始标本（原则上至少保管一周）应有专人负责 .检测结果的保管、备份记录、质控记录保管 ，除电脑记录外 应有相应的手抄记录（类似于基因日检测统计表类型的）.埋怨记录一应有时间、事件（项目）、接待人、处置方法、处置结果、处置人签字确认注意事项1、回答任何问题都应与自己写的SOP文件相一

3、致,写你所做的，做你所写的”.2、SOP文件不能写的太虚，无法做到的工具不要写，比如公司版的SOP文件里的加样器的校准一般实验室就做不到.模棱两可也不要写，比如消毒时间一到两小时不能这样写，几多就是几多.3、处置标本要在生物平安柜内，而加样则在柜外.4、各区门口要贴有各区的工作制度 ，限入标识表记标帜.还要准备 两个挂号本，一个来记录紫外消毒，一个来记录工作人员收支.区 内还要有一个工作记录本，用来记录各区每天的工作内容，便于 监测每天的工作全过程.5、每把枪的用途要清楚，不能弄乱.比如稀释阳模的枪和处置标本 的枪不成混用.时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日6、普通离心机

4、处置分泌物标本时应在离心后静置20分钟才华开盖.（许斌这样认为）7、所有仪器、设备都要有档案卡.8、所有的清洁消毒要在实验结束后马上进行，尤其是仪器、设备.像扩增仪，每天都要清洁，做完的反应管决对不能留在样品梢内.9、各区的拖把、抹布不得混用，标识表记标帜清楚.10、生物防护意识要强，手套要随时更换.生物防护平安的保证要 从三个方面：制度、硬件、意识.11、爆管如何处置：立即停止实验，水浴里的水要倒失落，冲刷.所 有可能污染的处所要用消毒液擦洗，紫外照射，通风排风.12、各区应有日常工作核查表，做为每天工作记录的弥补.13、各区要有泡有消毒液的生物污物桶，用来处置生物垃圾.14、验收组带来的标

5、本要按平时看待临床标本一样处置，要有接收记录，结果挂号等.15、拒绝德律风或代领等非正常方式发放陈说单.16、寄存标本的冰箱要上锁，钥匙及电脑资料的密码要由本科室人 员专人保管.17、陈说单上要注明试剂的检测下限，不能写成参考范围.除有把持者，还要有核校者，且两者姓名除电子打印还要用手签.定量结果不能有阴阳性提示，只能报数值.18、SOPt件中PE5700的温湿度要求应该为温度1530C、湿度为 80%.时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日19、SOP中医院申报实验室注意事项专家组观赏实验室回答的问题1, “你们的冰箱的铁链我可以从底下抽上来，实验室能做好保密性吗？可以的，

6、你们能做到就行，注意保密！2,实验室需要配置冷冻离心机，生物平安柜，如果做HCV日1注意重 新添置新实验室.3,生物防护中是否有锐器的防护注意事项？4,实验室的温湿度计的放置位置？最好放在实验室内.5,实验室中如何做好离心管抑制物的检测？而非爆管、裂管的检测！6,在做HCV时规定从抽血化验到送达实验室要几个小时要有明规定！3小时左右！7,溶血标本有何具体的判断标准？脂血呢？实验室末次会议的提问1,你们单元（达安）试齐1J ，当我们新鲜标本做 HBVt,提取中40微 升+40微升提取液处置，待放置过夜后，第二天加样时，有的标本特 难取样，有何处置法子？2,实验室中垃圾你们如何处置的？时间：二O二

7、一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日3,实验室中阴性标准检测后酿成阳性你怎么办？（我们实验室一 共有三管阴性阴性对比，第一个阴性检测管是试剂什么都不加，直接上机，第二个阴性检测管是试剂中加入在实验开始时翻开盖的离 心管带有蒸储水的，第三个阴性检测管是与实验一起提取的阴性血 清.）4,实验中如果阳性质控，阳性梯度，标本呈阴性请分别解释？5,实验室必需配置生物平安柜，高速离心机！临床基因扩增检验实验室技术验收现场问卷 （口试和/或口试）一.现有一个患者向你提出：“我在你们医院检测 HBV DNA 为阳性，但在另一家医院检测为阴性，你们医院是怎么做的检测？”，此时，你怎么办？（该题主要是考实

8、验室人员是否知道并遵守所制定的埋怨处 置法式）二.现有一个临床年夜夫拿着几张HBV DNA定量PCR检验陈说单找到PCR实验室，说：“你们的PCR结果究竟准禁绝，我这个 病人刚开始检测,HBV DNA是5X 107拷贝数/ml,用了拉米味咤治疗 后二周，再检测结果为 3X 107拷贝数/ml,降了很多，但再过二周检 测，又酿成了 6X 107拷贝数/ml,升高很多，这究竟是怎么回事？ ”，如果这个年夜夫刚好问的是你 ，你怎么办？并如何解释其提出的问 题？（该题除考实验室人员是否知道并遵守所制定的埋怨处置法式时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日外，还要求其对特定PCR佥验的批

9、间变异有充沛的认识 ) 回答思路：这两题分别对应患者和临床医生提出的埋怨 .考点为你是否依 照所制定的法式来处置：无论是患者还是医生提出埋怨，我们都应 该“依照”法式先记录埋怨人姓名、埋怨内容等 ，然后等问题解决 后记录处置结果等，最后记录反馈意见等.注意：一般问题中呈现“此时，你怎么办？” ，其考核的重点 均为“形式”而非“内容”.所以题目中无论病人埋怨的是服务态 度欠好还是结果陈说禁绝，医生埋怨的是检测结果和临床诊断不符 还是陈说发放不及时,回答的方向都应该是：“我们接待他们后，先在挂号表上记录埋怨的什么什么相关信息，做相应处置，解决后记录处置结果，最后填反馈表，归档总结，跟着以后改进等等

10、等等” 对各种具体问题的处置就依照实际情况来回答就行.如果题目中呈现要你具体“解释某某提出的问题”时，这时是具体考察某一 “内容细节” 了 .第二题中看你对 PCR检验的批间变 异有否充沛的认识：一般PCR检测试剂盒存在着一定的批间甚至批内不同，而且PCR检测前处置也存在着一定的误差 ，分析软件相 关参数的选择也会使定量结果发生变动，这是方法学造成的不成防 止的事实.同一把持人、同一仪器、同一批号试剂、同一份标本同 时做多份平行管，获得的结果城市不尽相同.所以我们城市允许结 果存在一定范围的偏差，一般为一个数量级的拷贝数 .5 x 107、3X 107和6X107均在允许的误差范围内，排除各种

11、影响因素后，呈现这时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日种情况很正常，这说明了该病人用药效果欠安.若定量结果有12 个数量级甚至更年夜的变动才华反映用药疗效三.现有一人打德律风到科室，说：“我孩子在你们医院做了 一项丙肝的PCR检测，名字叫XXX,请你告诉我检测结果好吗？”.如果是你刚好接了这个德律风，你会怎样去做？（该题考的是实验室人员在患者要求以电子邮件、德律风、传真等方式传递陈说时,是否能按相应的法式去做）回答思路：也是考形式.“对这种非正常的陈说发放形式，我们依照法式 是这样这样处置的.”因为各个医院实际情况分歧 ，所以无论你怎 样处置，只要法式中体现了对患者结果的保

12、密原则 ，具体细节不会 太要求.在法式中按以下几个方式写都是可以的：1、我们均不以任何非正常形式发放陈说.（最干脆！就是有点通情达理，不外对我们来说省事）2、实在有特殊情况，可以德律风查结果，其它发放形式不成.但必需确认身份，包括核对其所查询的患者姓名、性别、年龄、检测项目、送检医生、送检日期、病区床号等情况，并提供患者ID号.3、可以通过德律风、图文传真、电子邮件等形式传送结果，和上面一样，需要核实身份.（最宽松了，不外麻烦了很多）时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日要注意的是：这些情况均应明确告知查询者 ，这几种非正常 形式发放的陈说均仅为临床提供参考 ，实验的最终结果

13、以正式检测陈说单为准.特殊情况陈说发放后需详细挂号 ，签署陈 说人姓名，实验室负责人签字.“陈说的正确发放”为考核重点 ，一般可能还会引申出“你 们是如何发放检测结果陈说？ ”之类的问题 ，依照法式中写的实际 情况回答就行的了 .只要遵循保密原则就 OK.最简单的无非把事情都推给医院：说门诊患者陈说单送至服 务台门诊陈说发放处，由那里的医生确认身份后发放.（具体她们是怎么确认、确不确认这已经不关我们的事了）若写病人到科室领陈说也行，只是“我们怎么确认病人身份”要在法式中体现：询问相关信息、根据收费单或病历唯一条 形码（若医院采纳计算机网络系统）确认等等.四.现有你科室同事，拿了一份血清标本给你

14、，说：“这是我 一个熟人的标本，他要做HCV RNA检测，刚好他还做生化和免疫检 测，我从生化标天职了一些出来，给你做HCV RNA.”你觉得这样行 吗？为什么？（该题主要是考实验室人员对有关标本的收集法式是否清楚并遵守）回答思路：问到了 “为什么？”暗示具体考到细节了.依照我们的收集法式，做PCR尤其是RNA项目需要自力取血，不能从其它检测的标本时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日中分出一些来做.而且对RNA标本的收集、保管、运输都有严格的 要求.一般验收组会对这类问题加以引申.问你每天标本在哪儿收集？采血的人员有否经过专门培训？收集的标本如何保管？还可以顺便问你结果发放

15、后的标本如何保管、保管在哪儿？ 保管多久？甚至要你把这多久多久前的标本拿出来给他们看五.某一天，你在做HBV DN阳光定量PCR佥测（方法的定量 测定范围为103107拷贝数/ml ）中，发现有1份标本的测定Ct值 超越方法的测定上限，此时你怎么办？对没有特异扩增曲线的标本 你又怎么陈说结果？回答思路： TOC o 1-5 h z 此为具体问题：题目已经假设了方法的定量测定范围为103107拷贝数/ml,我们就依照这个假设来考虑.先看是否为特异扩增的曲线（即看曲线是否为标准的S形曲线），若为标准S形曲线暗示简直为阳性标本，Ct值超越检测上限，暗示未知标本 HBV DNA农 渡过年夜，不在检测线

16、性范围内，应该进行浓度梯度稀释（1/10、 1/100、1/1000）,重做实验，看哪个梯度处于线性范围内，获得原始浓度乘以相应稀释倍数即得.若不是特异扩增的曲线（也就是罕见的那种前面翘、与阈值 线有交点的阴性曲线，计算机不会具体分析，见有交点就给 Ct值, 而且Ct值还很小，小于测定上限的Cycle数），按阴性报.六.在PCR检测的核酸提取离心中，如发现有一管离心管呈现时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日破裂，此时你怎么办？（该题是考实验室人员对其制定的实验室及仪器设备消毒清洁法式是否知道并遵守）回答思路：依照离心机的消毒清洁法式：必需先停止实验，将破裂管密封放入生物垃圾

17、桶，再用75%酉精擦拭离心室消毒，用移动紫外灯照射 3060分钟 后才华开始实验.可以引申出：离心管破裂，可能质量有问题，为防止以后同类 事情的发生，依照耗材质检法式进行离心管质检实验 ，若分歧格停 止使用，重新购买并进行质检，合格的耗材才华使用.七.有一个 PC在验室的荧光定量 PCRdffl ABI 7000因某种 原因挪动转移到了另一个实验台面 ，实验室只是将仪器外概况擦了 擦，即用于惯例扩增检测工作，你觉得该实验室做得对吗？为什么？（该题是考实验室人员对其制定的PCR仪校准法式是否知道并遵守）回答思路：考核实验室人员对其制定的PCR仪校准法式是否知道并遵守.仪器移动应该依照法式进行校准后才华重新用于惯例扩增检测工 作，以保证实验结果.7000型核酸扩增荧光检测仪为复杂精密仪器，其校准工作需由时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日专业工程师进行.实验室