流式细胞术实验技巧以及数据分析

1、关于流式细胞术实验技巧及数据分析第一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月BD公司不同型号流式细胞仪FACSCaliburLSRIIFACSAriaFACSCountFACSVantage&DiVaFACSCanto第二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月一 流式细胞仪的基本原理 *稳定流动 *激发光斑 *荧光补偿 *荧光素选择二 数据分析及开窗第三张，PPT共五十二页，创作于2022年6月FCM原理示意图第四张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 层流是液体稳定流动的必要条件,管道中层流 的形成要满足雷诺数 dV Re = 2300， 式中、分别为液体的密度和粘滞系数，d和V分

2、别为管道的直径和液体的平均流速。FCM利用层流技术,使细胞流动稳定,并具有自聚焦作用,为细胞分析分选提供技术保证. 层流技术第五张，PPT共五十二页，创作于2022年6月液流驱动系统（示意图） 流速与压力的关系服从Bernoulli方程，即 P=(1/2)V2 (忽略高度的变化)。改变气压,就可获得不同的流速。 第六张，PPT共五十二页，创作于2022年6月第七张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 低速 高速不同样本速率形成的样本流第八张，PPT共五十二页，创作于2022年6月激发光源与光束成形系统第九张，PPT共五十二页，创作于2022年6月.20um64um32um 0 32um聚焦

3、距离激光束聚焦透镜强度光束成形与细胞受照方式这种椭圆形光斑的检测区保证每个细胞分别受到光照且受检时受到一致的光照 FCM的单细胞照明技术第十张，PPT共五十二页，创作于2022年6月第十一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月荧光光谱重叠 FITC和PE荧光光谱重叠第十二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月Uncompensated vs CompensatedFL1FL2 利用电子技术或计算机软件等方法将串入相邻荧光通道的信号加以扣除的方法称“荧光补偿”荧光补偿第十三张，PPT共五十二页，创作于2022年6月荧光补偿第十四张，PPT共五十二页，创作于2022年6月Mean值判断补偿

4、第十五张，PPT共五十二页，创作于2022年6月双或多参数荧光抗体的组合标记FITC+PE 488 525 、575 绿色、橙色FITC+T red 488 525 绿色 568 615 红色FITC+PeCy5 488 525、 675 绿色、 红色FITC+ ECD 488 525、 625 绿色、橙红色F+P +PeCy5 488 525、575、675 绿、橙、红色F+ ECD +PeCy5 488 525、575、675 绿、橙红色、红色F+P +PeCy5 +APC 488 525 、 575 绿色、橙色 633 670 红色 荧光染料 激发波长（nm) 发射波长（nm) 颜色第十

5、六张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 用化学法将两种不同激发波长的染料结合在一起，在488nm波长激发光激发后产生的发射波长激发另一荧光染料产生的荧光信号。LaserCY7755PEECD620CY5670488nm能量传递染料：第十七张，PPT共五十二页，创作于2022年6月流式细胞术操作流程：培养细胞新鲜组织石蜡包埋单细胞悬液制备荧光抗体标记上机检测表型测定细胞分选继续培养FISHPCR统计学分析第十八张，PPT共五十二页，创作于2022年6月单分散细胞第十九张，PPT共五十二页，创作于2022年6月FSCFSC信号的强弱与细胞的大小和活力相关第二十张，PPT共五十二页，创作于20

6、22年6月SSCSSC信号的强弱与细胞内颗粒多少相关第二十一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月细胞散色光信号第二十二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月细胞荧光测量细胞的自发荧光 未经染色的样品细胞 在激发光的照射下可测到有微弱的荧 光信号.细胞的特异性荧光 经过各种特异染色的 细胞在激发光的照射下可测到较强的荧光 信号.第二十三张，PPT共五十二页，创作于2022年6月自发荧光信号与特异染色的荧光信号分析图自发荧光信号第二十四张，PPT共五十二页，创作于2022年6月特异染色的荧光信号第二十五张，PPT共五十二页，创作于2022年6月DNA分析比较第二十六张，PPT共五十二页，

7、创作于2022年6月排除双联体细胞第二十七张，PPT共五十二页，创作于2022年6月细胞阻滞在G2M期第二十八张，PPT共五十二页，创作于2022年6月双克隆细胞周期分析第二十九张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 溴脱氧尿嘧啶核苷( Bromodeoxyuridine， BrdUrd )是胸苷的一种类似物。它可以替代胸腺嘧啶掺入到细胞新合成的DNA分子中，成为S期细胞的一种标记物。流式细胞术采用抗BrdUrd单克隆抗体免疫荧光和PI双参数检测细胞，不仅可检测一个细胞群体的动力学参数和DNA含量，同时可以了解不同细胞的DNA合成能力高低。 BrdUrd和DNA双标记染色第三十张，PPT共

8、五十二页，创作于2022年6月第三十一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月BrdUrd与PI检测第三十二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月BrdUrd与PI检测第三十三张，PPT共五十二页，创作于2022年6月BrdUrd与PI检测第三十四张，PPT共五十二页，创作于2022年6月细胞三色荧光检测第三十五张，PPT共五十二页，创作于2022年6月细胞因子测定*检测T细胞(CD69)活化第三十六张，PPT共五十二页，创作于2022年6月G6=R1*R5第三十七张，PPT共五十二页，创作于2022年6月*CD4抗原分子结构引起CD4荧光强度下调第三十八张，PPT共五十二页，创作于20

9、22年6月细胞因子分析图*过敏性鼻息肉与鼻息肉细胞因子比较第三十九张，PPT共五十二页，创作于2022年6月纯化单核细胞第四十张，PPT共五十二页，创作于2022年6月调节性T细胞检测第四十一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月第四十二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月G3=R1*R3G4=R1*R4第四十三张，PPT共五十二页，创作于2022年6月凋亡细胞测定第四十四张，PPT共五十二页，创作于2022年6月凋亡细胞测定第四十五张，PPT共五十二页，创作于2022年6月细胞凋亡检测第四十六张，PPT共五十二页，创作于2022年6月阴性的设置第四十七张，PPT共五十二页，创作于2022年6月血小板检测第四十