作业指导书-生物负载检测方法的确认

1、XXX有限公司文件编号XXXPage 1 of 7工作指引名称:生物负载检测方法的确认1适用范围适用于运用重复性回收的方法对生物负载检测方法进行确认.2参考文件ISO11737-1 Sterilization of medical devices -Microbiological methods-Part 1: Determination of a population of microorganisms on productsWI.XXX产品生物负载检测操作指引3定义生物负载：产品或无菌阻隔系统上的存活微生物的总数.CF修正系数Correction Factor(CF):用于补偿无法从产品或

2、培养基中完全除去微生 物的数值;样品份额Sample item portion(SIP):从产品上取的用于测试的规定部分.4职责实验员:具备微生物方面知识，熟悉测试操作，负责产品的测试及报告.实验工程师：熟悉测试，指导实验员测试，检查测试报告.质量主管/经理:负责审批测试报告.5确认程序本方法的基础原理是生物负载测定方法应重复进行，直到回收的微生物累计数量没 有明显增加.每重复一次，都将洗脱液从产品或产品部份上完全回收并计数，比较连 续回收得到的累计结果.测定产品生物负载后，应将该技术再次应用于同一产品份额上研究微生物是否进一 步移除，应用于同一产品份额的该过程可在规定次数的场合下重复进行；样

3、品的选择，被测试样品必须具有代表性，可以体现产品的真实生物负载的情况；测试样品份额(SIP)的选择，若验证生物负载在产品上是均匀分布的,SIP可以是该产 品的任何部份，否则样品应包含能代表所制产品的每种相应材质而随机选取的产品 部位.若已知生物负载分布，可以从认为对灭菌工艺最有挑战性的产品部份选取SIP.可在长度，质量，体积或表面积基础上计算SIP:制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件编号XXXPage 2 of 7工作指引名称:生物负载检测方法的确认SIP的类型产品类型表面积植入类（无渗透吸收型）质量粉尘类衣服类植入类（可渗透吸收型）长度管道类（管径T）体积

4、液体奥5.5生物负载测定方法的选择，可参考以下图表Use vortex mixing or shaking followed by flltration/platlngIf none of the above is possibleSwbblng/contad pladng制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件编号XXXPage 3 of 7工作指引名称:生物负载检测方法的确认5.6测试准备检测设备A.洁净工作台B.细菌过滤器C.超声清洗机D.恒温培养箱E.高压蒸汽灭菌锅检测用品A.洗脱液，稀释液:0.02%吐温80,0.9%NaCl,PH7.0氯化钠-蛋白冻缓

5、冲液；B.营养琼脂培养基或胰蛋白陈大豆琼脂培养基；C.剪刀银子，微孔滤膜（0.45叩）；D.酒精灯,75%酒精，培养皿；根据检测需要，按规定要求配制好培养基和洗脱液，稀释液；将配制好的培养基和洗脱液，稀释液分装到三角瓶中密封并用白纸包住封口，微孔滤膜用水润湿放入培养皿中，剪刀，银子，培养皿，细菌过滤器不锈钢杯用白 纸包好，所有物品经121c高压蒸气灭菌30min；超声清洗机和细菌过滤器用75%酒精擦洗干净；实验前两小时打开洁净工作台，微生物限度室，更衣室的紫外灯进行环境消毒 30min,在开启紫外灯时人员必须远离，以免灼伤眼睛和皮肤造成人身伤害；所有检测用品，样品由传递窗递入微生物限度室.5.

6、7操作步骤将样品包装去除，用灭菌银子将样品放入超声清洗机中，如样品过大而无法放 入可将样品进行适当拆分；将样品浸入含有适量洗脱液的超声清洗机中，加入适量的稀释液，以洗脱液浸 满样品表面为准；打开超声清洗机，清洗5min,超声清洗频率不应过高，以免造成微生物死亡；清洗结束后将样品取出，洗脱液在细菌过滤器上进行过滤，应注意滤膜在使用 前后的完整性；洗脱液经薄膜过滤后，可用PH7.0气化钠-蛋白冻缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜每 次冲洗量为100ml；制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件编号XXXPage 4 of 7工作指引名称:生物负载检测方法的确认过滤完成取出滤膜，

7、菌面朝上贴于培养基表面上培养，计数，作为第一次移除的 菌落数，表示为在菌落全部计数量中的百分率；将每个样品按照以上方法进行移除清洗5次,分别培养计数，每次移除的菌落数作为计算CF的证据；修正系数CF的计算举例如下：Table C.1 Colony counts determined from repetitive treatment fot replicale of a medical dtviceTreatment12Product item3461605 口705545210125233102004D1001Agar overlay212101 出 al cd any count73647

8、A5849CNN f-rom the daq in Table C.l .ttie proponions remoweti can be calculaled ms follows.Numbfir removed by first Treatment6050705545Tolaf number recouefed7364795849Removal by firsl treatment82%78 %09%55%92%Average Recovery by first treatmerit -87,2%Range -：78 % to 95 %Colony countE derivec from 合

9、四overlay have been included m he calculations The nalure of certain medical devices may preclude ihe usd of 的ar overlay.C23 Using average recovery Dy furst treatmerH, the correction factor for recovery efficiency would bt;(C.1)出5587.2in some applications: it may be decided to use the lowest value of

10、 ttie range af percentage removals in orOer to reflect the worst case. This decision will be influenced by the use I。be made ofthE data制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件编号XXXPage 5 of 7工作指引名称:生物负载检测方法的确认计算得到的CF值即为该样品的修正系数值,在日后该样品的生物负载检测中可用第一次移除菌落数X该修正系数作为该产品的生物负载结果.检测报告编号规则：CF-YY-XXXYY:测试年份XXX:产品项目

11、号6文件保存期限：相关检测报告保存10年.7附录7.1 Repetitive Recovery Testing Report制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件编号XXXPage 6 of 7工作指引名称:生物负载检测方法的确认附录 7.1 Repetitive Recovery Testing ReportRepetitive Recovery Testing Report(RGf: ISO 11737-1)Report No:SaTple Infctmatioin.Pruducton Lot NdSample Qty.:SIP：Samplirg Date:

12、Testing Environ Tent (PR.1MediarJedia Lot No.：Incubator Temperature ;Incubation PericxJ :okal Aetbic Count(We(:overed CFWDevi回Mo1st1旭atm白nt2ndf neatrrert3rd1伯电m4;h1 ralrTi/t5ih1 咕三 tiYCntTotal co Io)/ cuntRenxval l1st什自3164M123A5Avenge Remoai by * si treatmentCorrective Factor (CF)NOTE： Removal bv 1 引 treatment = 1 st ireaitme ntTata I colony oountCF = 1 - Average Removal b/ trsatmeni1 e&ted:Checked：Approved ：Date:Date:Date:制定:XXX :日