ATCC菌种保藏与使用课件

1、ATCC标准菌种复苏与使用指南第1页，共49页。“KWIK-STIK Microorganisms”产品的使用说明防范与限制 Precaution and Limitation这类产品仅适用于体外实验。 这些设备以及后来在培养基上生长出的微生物属生物危害材料这些设备含具有活性的微生物，在一定的环境下可能致病。需使用适当的技术避免任何微生物的暴露和接触。 Company Logo第2页，共49页。微生物实验室需有相关实验装备，且有可接收、处理、储存、丢弃生物危害材料的设备。 使用这类设备的微生物实验室工作人员必须在生物危害材料的操作过程，维护，储存，丢弃等方面接受过培训，具备一定经验，能熟练示范

2、。 相关机构和法规对生物危害材料的处理作了规定。各实验室需了解并遵守该生物危害 材料处理规定。Company Logo第3页，共49页。储存与有效期 Storage and expiration在原装密封瓶或含干燥剂的袋中的KWIK-STIKTM应存放在28。冻干的微生物制剂在有效期内将保持其规格和性能，有效期在设备标签上标明。若出现以下情况则不能使用：储存不正确;有过度暴露在湿热环境中的迹象;己过有效期。Company Logo第4页，共49页。Microorganisms公司产品Company Logo第5页，共49页。Kwik-Stik 操作流程Company Logo第6页，共49页。

3、注:请严格按照操作流程”、“推荐生长条件”和“推推荐培养方法”活化标准菌株，不建议使用实验室自己的方法及文献方法活化标准菌株，否则菌种供应商不保证菌株的质量且不提供相应的售后服务。Company Logo第7页，共49页。LYFO DISK 操作流程Company Logo第8页，共49页。Kwik-Stik & Lyfo Disk 推荐生长条件如何选择最适合的菌种生长条件1.最初的生长最好是在非选择性琼脂培养基上。除非特殊情况或特别推荐，最初的生长一般不考虑液体培养基。这是由于在液体培养基中获得冻干菌株的纯种比较困难，污染所带来的杂菌可能会过度生长，影响得到目标菌株的纯种。2、以下列出可供选

4、择的琼脂培养基和相应的生长条件，供各实验室培养菌种时参考。Company Logo第9页，共49页。方法1胰蛋白胨大豆琼脂，非选择性羊血琼脂，标准计数平板，或营养琼脂35,正常环境，24-48小时。方法2非选择性羊血琼脂35，正常环境，2448小时。在培养链球菌属和隐秘杆菌属时，CO2环境可提高其生长。推荐使用5%CO2环境来培养肺炎链球菌和其他甲型溶血性链球菌。方法3巧克力琼脂35，5%10%的CO2环境，24-48小时。Company Logo第10页，共49页。方法4厌氧血琼脂35，厌氧环境，48-72小时；部分专性厌氧菌可能需要57天，才能充分生长；对于梭菌，以下新鲜配制的平板也可选用

5、：营养琼脂，胰蛋白胨大豆琼脂和标准平板计数琼脂(标准方法琼脂)；只是需额外培养24小时。方法5沙保氏葡萄糖 Emmons琼脂25，正常 环 境 ，27天； 非选择性羊血琼脂也可选用 ； 以下培养基也可选用：营养琼脂，胰蛋白胨大豆琼脂， 马铃薯 葡萄糖琼脂和标准平板计数琼脂 ，只是需额外培养24小时。Company Logo第11页，共49页。方法6巧克力琼脂35，微需氧环境，48-72小时。方法7Lowenstein Jensen琼脂或Middlebrook琼脂35，5%10%CO2环境或正常环境，7天。M. fortuitum subsp. fortuitum, M. peregrium 和

6、M. smcgmatis也可以选用胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)和Lowenstein Jensen琼脂或Middlebrook琼脂一样，只是需额外培养一些时间。Company Logo第12页，共49页。方法8缓冲活性炭酵母提取物琼脂35，正常环境，3-5天。方法9V琼脂或巧克力琼脂35，5%10%，CO2环境，48小时。Company Logo第13页，共49页。方法10菌种水解可选用无菌脑心浸出液肉汤，胰蛋白胨大豆肉汤，或0.85%生理盐水。无菌水水解可能会导致活力下降或不复苏。在KWIK-STIK包装中自带的培养基使得菌种很好的复苏。在胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)上生长35，正常环境，24-

7、48小时。Vibro SP.也可在Marine琼脂上生长Company Logo第14页，共49页。方法11先接种于MRS肉汤中35，正常环境，48小时;然后接入含羊血的哥伦比亚CNA培养基中35，5-10%CO2环境，48小时。方法12马铃薯葡萄糖琼脂55,正常环境，48小时。Company Logo第15页，共49页。Company Logo第16页，共49页。Company Logo第17页，共49页。Company Logo第18页，共49页。Company Logo第19页，共49页。Company Logo第20页，共49页。Company Logo第21页，共49页。各类菌种推荐

8、培养方法Company Logo第22页，共49页。Company Logo第23页，共49页。Company Logo第24页，共49页。Company Logo第25页，共49页。Company Logo第26页，共49页。Company Logo第27页，共49页。Company Logo第28页，共49页。Company Logo第29页，共49页。Company Logo第30页，共49页。Company Logo第31页，共49页。Company Logo第32页，共49页。Company Logo第33页，共49页。Company Logo第34页，共49页。Company Lo

9、go第35页，共49页。Company Logo第36页，共49页。Company Logo第37页，共49页。Company Logo第38页，共49页。Company Logo第39页，共49页。Company Logo第40页，共49页。Company Logo第41页，共49页。加拿大PROLAB microbank 菌种保藏管 简介与说明：微生物的长期保存是一个挑战，生物需要低温贮存并尽量提供最少干扰的可能性。然而，Microbank提供了一种保存液来应对对这个问题。用途：标记颜色的25 个小珠被包装容纳在包含保存剂的保存管里，小珠被冲洗和吸附细菌在上面，之后保存管在贮存期内保持在-

10、70C，当需要培养，单个小珠很简单的移出保存管，并直接划线在微生物培养基上。Company Logo第42页，共49页。操作步骤A准备1使用一个准备的标签，管上条码，每管接种一个生物。（也可以看步骤6）。2在无菌的条件下打开小管的盖。3将纯培养的小菌落（18-24h 培养）挑取3-4 个麦氏管缓冲液接种到液体保存剂中。4盖好瓶盖并颠倒4-5 次以吸附微生物，不要旋涡。5、此时微生物将被吸附到小珠，这缓冲液需倒掉使接种小珠尽可能无液体，盖上瓶盖。6、在瓶上提供的培养条码做下记录或其它的记录。7、贮存接种的冻存管在-70为了最好长期效果。Company Logo第43页，共49页。B.复苏1、在无

11、菌的条件下，打开瓶盖并使用灭菌的接种棒或镊子移出一个小珠，盖好瓶盖并尽快放回低温保存。过度改变温度会减少生物生存能力。2、小珠能被直接使用接种在固体培养基或可滴入在合适的液体培养基。3、当作推存使用，每个保存管大概保存25 次相同可能培养数。Company Logo第44页，共49页。Company Logo第45页，共49页。局限性1、Microbank为生物长期保存可能完全提供一种方法。2、在使用中，无菌技术必须熟练以继续保证微生物的完整3、Microbank在接种之前以下条件不能被使用：a.管显示任何泄漏的迹象（冻存管破损）。b.冻存管存在污染。c.已经超出标记的有效期。4、无论如何小珠移出后不能放回冻存管。5、Microbank提供了不同的颜色，这些颜色提供颜色识别便利并没有意味产品功能的任何改变。Company Logo第46页，共49页。安全预防1当操控危害的培养物需使用一个生物安全柜。2当抛弃使用或部分使用冻存管注意生物危害预防。3当保存Microbank在液氮里。以下需注意：a.保证保存管盖正常旋紧：过于绷紧可扭曲帽里面硅树脂橡胶密封件引起泄漏。b.保证保存管在盖之前螺纹与盖是完全干燥的：液滴在液氮将损害封口。c.所有Microbank 保存管需经常保存在气相，在液氮上面。如浸入，当回到室温时他们可以发展裂缝或破碎。d.