T-VEC资料翻译20180515

1、Scientific discussio科学论述介绍黑色素瘤是常见的恶性月中瘤，在男性和女性中 发病率分别排名第六和第七位：在欧洲2012年一 年中，男性发病率为39.6%,女性为42.5%,男性死亡率约为8.8%,女性死亡率为6.9%,平均年龄为 59岁。黑色素瘤有以下几种类型：浅表播散性黑色素瘤、恶性雀斑痣样黑色素瘤、肢端黑色素瘤和结 节性黑色素瘤等。临床上根据黑色素瘤表征进行分类，通常以 ABCD规则界定，其中人=不对称， B=边界，C=颜色，口=直径以及大小、颜色和深度的病变进展。黑色素瘤病变的典型特征包括：非 对称，边缘不规则，颜色改变，大于等于5mm直径呈结节生长。黑色素瘤的病理分

2、期是基于 AJCC分期系统，包括前哨淋巴结分期。AJCC分期提供有关病变厚度（布雷斯洛）、有丝分裂率和溃疡的信 息、所涉及的淋巴结数目以及病变退变或进展到局部部位（皮下浸润、淋巴结）或远处病变是否存在血清LDH升高的现象。黑色素瘤患者的临床分期主要依据体检、影像学检查和活检（检查原发肿 瘤的位置和大小、淋巴结浸润程度以及转移月中瘤的所在位置来判定。根据月中瘤的病理特点，临床可 分为0期、I期（A、B）、II期（A、B、C）、III期（A、B、C）和IV期（表2）。I和II期主要局限于原发 月中瘤的部位，第三阶段涉及区域淋巴结扩散，第四阶段涉及远端扩散，其中M1A定义远离皮肤向皮下或淋巴结的转移

3、，M1B转移到肺，M1c转移到任何的其他内脏部位或远端部位并伴有血清LDH升高现象（表1）。90%的黑色素瘤被诊断为没有任何转移的原发月中瘤，并且此类月中瘤患者75-85%的能特异性10年生存。10年生存期中30-70%的伴有区域淋巴结微转移，30-50%伴有卫星（定义为距原 发月中瘤最大2cm）和在途（位于原发月中瘤2cm以及距离第一个引流淋巴结2cm）转移，20-40%有临床明 显的区域淋巴结转移。在未治疗的患者中，伴有远处转移瘤的平均生存期仅为6-9个月，尽管存在相当大的差异。每当可疑皮肤病灶被去除，都要进行组织学活检来确定病理特征以及月中瘤生长阶段和侵袭的程 度。在某些情况下，手术切除

4、适用于限制性和局部病灶，并结合放疗和IFN-丫治疗。对于全身性转移性疾病（IV期），手术、放疗和全身治疗都适用。目前批准的全身治疗方案包括：? ipilimumab （Yervoy）,这种药物能阻碍CTLA-4的免疫蛋白，被批准用于未经治疗的不可切除 或转移性黑色素瘤成人患者，临床统计已显示，此药与gp10阱目比，显著提高了生存率（overallsurvival , OS） （10.1 月:6.4月;HR: 0.66; p= 0.003）。? nivolumab （Opdivo）, 一种抗PD1单克隆抗体，用于治疗成人晚期（不可切除或转移性）黑色素瘤; 在治疗黑色素瘤中，平均 OS14: 10

5、.84（HR=0.46;（95% CI: 0.31, 0.69; p=0.000085小embrolizumab,本品为抗PD1人源化单克隆抗体，用于治疗成人晚期（不可切除或转移性）黑色素瘤。与 ipilimumab ,平均无进展生存期（progression-free survival, PFS）为 5.5: 2.8 个月，（HR=0.58;95%CI: 0.46, 0.72; p0.00001)和 4.1: 2.8个月(HR=0.58; 95%CI: 0.47, 0.72; p7 irnim:TlLOI-2.0dL AJlIkUtf! LlkcFJlkll.l b wth bJucnitM

6、jETJ1.01 -4.1.a. nklwnS Likertkiti. h rathmlzemtkH：11讨力el widlou： ukerdanhH wit.Ii ml；e-Eit we，匚】 皿 二rHnnNo. tlf EFtUdJtU： HldniXcidj.1 mcrutadc nas;KUDNJA国山1 sdea： 一口*口1：439* h? tiuTrirrrkii乩ml skn, sdxxitanrCDiUi 心口 rmdnJ khIzljIwis忤 omulMlhI wel|；MmfllMl工A11 ntiwr-nrtidljsp-i;hrfirmalA nr d棺忸a rn

7、rr j ricKFlmlPtlBUpriciicJ. wish pcniiiiiw. Msrun &*正01幅104总协 Al mLzn却hJ,ran4.D： du1iLi?cd-atl tr JKnBind nixJc biopr nd ciuriFLdlijin Lrp-lwi Jciwcic eif I i： ajrioi cut I.lM KForrcUrfetci qx Itrinoi m JrtetUbls rwiiJ rptf-urtoBM cnqiiratdK Shcnpeutic E ph*jtniEiYn odjl iiKtaip* 弋金/设 q%AJCT,AwrlcaH

8、 |ntn。Gini1aMFP.ii Umkct：苴.iwH 11HI I i-h. 11 iar9Hu4.T分期厚度（mm）溃疡/有丝分裂T1a尢溃疡启丝分裂率 1/mm2T21.012.0无溃疡八 一,一b.有溃疡T32.014.0a无溃疡T44b.有溃疡a无溃疡 b.有溃疡N分期转移淋巴结数目N00N/AN11a病理诊断sb临床诊断t2-3 N2a病理诊断s）4个或者移行转移灶、卫星灶、转移结节等b1i名床诊断tN3c移行转移灶/无转移结节的卫星灶M分期部位1lLDH情况M0无转移N/AM1a远处皮肤、皮下或结节状转移正常M1b肺转移正常其他内脏转移正常M1c任何远处转移升高(linkd

9、l Edging3Patholo9k Stdgingt1THHOMO0nsNOMOSUgelAIlaNOMO1ATiaNOMOSUgelBI1bNOMOIBTibNOMOT2aNOMO口NOMOSt邓 IIAT2bNOMQIIAfT2bNOMOBaNOMQT3aNO阑SugellBT3bNOMQIIBT弥NOMOI4a阑MQ珈NOMOStage IK14bMQIKT4bNOMOSu9elllAnyT.上阳MOIIIAT14aNldMOT14dNaMOIIIBT14bNh阑T14bMOT14aN1bMOT14aN2bMOT14a肋fMIKI TMbNibMDTl-4b侬MO117bN2c阑Any

10、TN3阑Stage VAny!AnyNMlIVA/TAnyNMlTable 2；Staging of melanoma of the skin ( AJCC 7th edition)ANATOMK 5TAE/*ROHO$rK GROUPS刈达卡巴嗪(DTIC)化疗，此药在欧盟国家作为转移性黑色素瘤患者的标准治疗已有很多年。结 果显示，为期3至6个月的化疗，有效率为11%至25%,平均生存期为4.5至6个月。对于筛选和检测出BRAF V 600突变阳性的黑色素瘤月中瘤，系统治疗方案包括：TVemurafenib, BRAF抑制剂，批准用于成人 BRAF V 600突变阳性或转移性黑色素瘤患者，与

11、 DTIC 比较，无进展生存期分别为 6.9: 1.6个月(HR 0.38, 95%CI: 0.32-0.46, p0.0001),平均 OS 13.6: 9.7个月(HR: 0.70, 95%CI: 0.570.87, p0.0001)。Tlabrafenib (达布拉夫尼布)，BRAF激酶抑制齐1J,批准用于成人BRAF V 600突变阳性或转移 性黑色素瘤患者；与达卡巴嗪相比，它的平均 PFSJ 6.9: 2.7个月(HR 0.38, 95%CI: 0.32-0.46, p0.0001), 12个月的 OS分别为 70%: 63% (HR: 0.70, 95%CI: 0.57-0.87,

12、 p0.0001)?trametinib (曲美替尼)，MEK抑制剂，经批准为治疗单药并可与达布拉夫尼布联合使用，治 疗成人不可切除或者BRAF V 600突变阳性黑色素瘤患者，联合使用与单独使用曲美替尼相比，PFS为4.8: 1.5个月；与达卡巴嗪相比平均 OS为15.6 : 11.3个月。Talimogene LaherparepvecH一种源于HSV-1的月中瘤免疫疗法，T-vec行了修饰，使其在月中瘤内 复制，并产生免疫刺激蛋白人GM-CSFo引起月中瘤细胞死亡和月中瘤源抗原的释放。据研究，T-vec与GM-CSF一起促进全身抗月中瘤免疫反应和效应T细胞反应。治疗后原发月中瘤完全消退的

13、小鼠对随后的 月中瘤再攻击具有抵抗力。从野生型HSV-1到T-vec的修饰包括ICP34.用PICP 47的删除。这是由于随着T-vecB染，抗病毒 免疫反应将开始攻击正常细胞，且研究证实月中瘤细胞易被ICP34.5缺陷的HSV-1病毒(包括T-vec)损伤并导致死亡。ICP 47的缺失可以阻止抗原提呈分子的下调，并增加 HSV US 11基因的表达，从而促 进病毒在月中瘤细胞中的复制(SmPC 5.1节)。此外，还插入了人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 （GM-CSF）的编码序列，取代了 ICP34.5。GM-CSF是一种细胞因子，通过其对抗原提呈细胞的作用,参与刺激免疫应答。GM-CSF能激活

14、树突状细胞，增加抗原提呈，增强细胞介导的和体液免疫应答。适应免疫系统激活，月中瘤细胞溶解有助于局 部和全身免疫-调动系统对远端月中瘤的破坏，并可能通过免疫监视形成免疫记忆从而对月中瘤进行长期 监视（图1）0此外，在设计（T-vec）临床试验时，一项单臂第二阶段研究的结果表明，T-vec术后接受GM-CSF治疗的患者OS和DFS明显延长（与配对的以往对照组相比），而且这种治疗对GM-CSF具有良 好的依从性。Figure 1： Proposed Mechanisrrii of Action for Talimogens LaherparepvecSelective virdl replicati

15、onTmmor cdl& r uplure for jnSystemk tumor-tptdFieMath of distant tumoriln tumor tissueoncolytic effectIm munc responsecells.Local effect: SystEmic effect:Tumor Cell LysisTumorpedfic Immune Response申请人申请下列适应症：“-vec适用于治疗具有区域或远处转移性黑色素瘤的成人（见5.1节）”。最后拟议的指示如下：治疗不能切除的区域或远处转移（黑色素瘤的IIIB, IIIC和IVM1a期）的成人患者，没有

16、骨，脑， 肺或其他内脏疾病（见4.4和5.1节）。T-vec的治疗用药应由一位对月中瘤治疗经验丰富的合格医生来发起和监督。药剂学（SmPC section 4.2）Imlygic装在一次使用的小瓶中，每瓶1毫升装量，有两种不同浓度：6? 10 （1 million） PFU/mL -只适用于初次剂量.8? 10 （100 million） PFU/mL -所有后续剂量.每次治疗的总注射量最多可达4mL。当浓度为106（100万）PFU/mL时，初始推荐剂量最高可达 4mL。随后的剂量应以108（1亿）PFU/mL的浓度最多注射4mL的Imlygic。建议的Imlygic给药时间表见 表 1,见

17、 SmPd4.2节。Quality aspect敲量方面Introduction 介绍T-vec是一种来源于野生型HSV-1基因组的月中瘤免疫治疗药物，它是一种修饰后减毒的、非整合的HSV-1,能在月中瘤内有效复制，并产生免疫刺激蛋白GM-CSF0T-vec病灶内注射的治疗策略是通过其在癌细月fi中复制而产生直接的溶瘤作用（oncolytic effect）,结果是月中瘤细胞裂解并局部释放潜在的月中瘤抗原。并通过局部表达人GM-CSF来促进抗原递呈，从 而促进全身抗月中瘤免疫反应。T-vec药品作为一种无菌无防腐剂的溶液注射液，规格浓度为106PFU/mL或者108PFU/mL ,药品每瓶可使

18、用装液量为1.0 mL,在-80C 10 C下储存、运输、供应。106 PFU/mL作为给患者一次的初始剂量，目的是使随后给药前能够血清转换（血清转化现 象：血清试验从阴性转为阳性的变化，表示对感染反应中或对免疫作用反应中形成抗体）。108pfu/mL剂量用于随后的剩余治疗。该产品通过皮下、皮下和结节内的瘤内注射。在任何一种情况下， 建议使用最多4mL的剂量。Active Substanc的效成分General information 总说明总说明详尽地介绍了命名、结构和一般性质。T-vec是在野生型HSV-1基因组两部分区域改造而成的（新分离株JS1）.修饰HSV-1自然天性而 产生表性变化

19、，并呈现T-vec的治疗效果如下：硼除ICP34.5功能基因，从而抑制病毒在正常组织中的复制。?删除ICP 47基因，使US 11基因得以上调，导致ICP34.5缺失的HSV的能继续复制，而不降低它 对月中瘤细胞选择性。硼除ICP47确保MHC I类抗原的展示，使CD8+T细胞能够进行免疫监视（自己查阅： 早期T细 胞必须与表达MHC-I或II类抗原的胸腺上皮细胞接触才能分别分化成 CD8+或CD4+T细胞）?在ICP34.5入人GM-CSF基因，产生并释放具有生物学活性的hGM-CSF,刺激全身细胞毒性 免疫反应，旁杀末端的月中瘤细胞。每个hGM-CSF表达框由巨细胞病毒的主要早期启动子 （

20、CMV）、编码HGM-CSF的cDNA和牛生长 激素多腺喋吟化信号（PA）组成。下面给出了 T-vec基因组的示意图：Figure 2： Schematic representation of talimogene laherparepvec genome仆 人Rl RsU 号RsThe lalimoene laherparep-zec genome is shown with the positions of the ICP34.5 and 1CP47 deletions marked as A34.5 and M?, respectively. The genome is composed

21、 of a unique long region (Ui) flanked by long repeats (R。and a unique short region (U$) flanked by short repeats (Rs), The site of the hGM-CSF cassette insertion is shown in pink and expanced to show the composition of the hGM-CSF expression cassette： the CMV promoter, hGM-CSF gDNA and a pAsignal.Ma

22、nufacture, characterisation and process control造、特征和过程控制Manufacturer生产单位参与生产、检验、储存的地址以及他们的职责详细记录在档案里，并且经 GMP验证Description of manufacturing process and process controfe. 丁芳4口丁 芳梓制1的中曲术生产工艺充分描述了 T-vec的制造过程，包括制造步骤、操作参数和过程控制方面的信息。提交 了关于批公式和批次大小以及流程图的充分信息（图3）。此处没有图。生产工艺可以概括为细胞扩增、病毒转染以及生产（转瓶）、收获、回收以及纯化步骤。

23、纯化 阶段包括：核酸内切酶消化、过滤澄清、超滤 /过滤（UF/DF）,（查阅：UF超滤是以压力为推动力的 膜分离技术之一。以大分子与小分子分离为目的，膜孔径在201000A。之间。DF:深层过滤膜的孔径比微孔滤膜大，通常用作预过滤。），两种色谱柱层析（IEX , ion exchanged子交换，SEC, Size exclusion chromatograph分子排阻层析）和最终的无菌过滤。在药品生产过程中，在这一步之后 没有额外的过滤。所述无菌过滤步骤为所述药物产品提供终端无菌过滤。T-vec生产工艺的规模由单次的预期体积来确定，收货液是从生产滚瓶生产结束时精液中收集来 的，一般为40 L

24、。单批的收获液经纯化以生产单一批次产品。Control of material双 料控制申请方提供了有关T-vec生产工艺中的原材料的详细资料。标准的克隆技术用于构建质粒：1）删除两个拷贝的ICP34.5基因功能,并将hGM-CSF基因插入 ICP34.5位点；2）删除ICP 47基因。经限制性内切酶分析或DNA测序证实质粒结构正确。档案中对克 隆步骤作了充分的详细的细节说明。S1 /34.5-/47-/hGM-CSF T-vec重组病毒初步构建于BHK细胞中。经过了一系列转染和同源重组后, 该细胞系随后被改变为Vero细胞。材料详细描述了最后一代T-vec的产生过程。止匕外，资料中病毒的 特

25、征也有充分的阐述。对于（T-vec）的商业化生产，申请人使用了三个工作细胞库，它们分别来自两个不同的主细胞库（MCB Lot 2003-0049（最初在 BioReliance生产）；MCB Not 5000-00001,它们都来自于同一亲代 WHO 的Vero细胞库。新的和旧的MCB和WCVS者件艮据ICH Q5D和ICH Q5A（R1）指导准则以及Eur.博士专 著和一般案文，进行了足够的表征和检定。比较表征结果表明，新旧细胞库的性质基本相似。在商 业生产期间，最先的生产细胞库将被使用，直到库存耗尽。因此，建立多个细胞库的做法是可以接 受的，尽管这并不完全符合两层细胞库系统的一般预期做法。

26、（个人理解：一般是两个库同时使用）Control of critical steps and intermediates拜步骤禾口中间休的捽,I生产工艺通过关键主要操作参数（输入参数）和关键工艺中实时控制（IPC,输出性能参数）进行控 制。虽然这一分类不符合ICH术语，但对于这一特定产品的控制策略来说，它被认为是可以接受的 基于工艺理解和产品质量考虑，建立了工艺杂质、安全相关和微生物控制以及工艺一致性测试。Process validations 艺验证T-vec商业化制造工艺（工艺C）已在BioVex Inc. , Woburn工厂（AWM）进行了验证。当在规定的操 作参数范围内执行时，该工艺

27、被证明是稳健的，执行一致的，并符合预先确定的性能参数验收标准。Manufacturing process developmefi彷寸程开发在T-vec的开发过程中，主要采用了三种生产工艺。这些生产工艺命名为A、B和C三种工艺。工艺A只生产了三批产品，这些批次用于非临床毒理学研究，以及早期I期研究。工艺B产品被应用于另外的非临床毒理学研究和II期临床研究。商业产业化使用的是 C工艺，与III期临床的工艺相同。使用不同工艺制造的批次之间的可比性已得到充分证明。证明控制方法可控。Characterisation1对于T-vec的表征，申请方已经考虑了病毒结构（大小、密度、SEC纯度）、基因组序列、蛋

28、白质和多糖含量以及生物学特性，并进行了充分的相关研究。Specification范在应用档案中列出了用于保证T-vec质量的试验方法和验收标准。申请方已对检验方法的合理标 准进行评估。基于这一评估，某些特定测试，如与工艺相关的杂质和安全测试，已移向上游，并把 不合格界限列入关键的过程控制。虽然没有采用传统的控制策略，但总体来说，控制策略是可以接 受的。Analytical method野析方法根据商业规范，对每批药品的每一种分析方法进行了总结，给出了满意的方法验证结果。Batch analysis比量分析从商业化生产设备上得来的36批GMP生产药品的批次数据分析来支持临床项目，所有数据用于 建

29、立规范验收标准或用作参考标准，这些数据提交并揭示了批次之间的一致性。Reference materials1目关资料充分阐述了当前和未来参考标准的案例验证，并阐述了相关的试验。Stability稳定性鉴于实际的连续化生产工艺，药品的储存已确定为工艺的保持时间（013,在53C）o因此,在档案中不包括该药品的稳定性数据。Comparability exercise for Active Substan毒的可比性研究如上文关于工艺过程开发的章节所述，在产品开发过程中，三种主要的生产工艺已被用于生产T-veCo对于从工艺A到工艺B的变化，可比性评估的结果是在最初的临床试验申请时提交的，但未包括在最初

30、的MA申请中。然而，这些可比性数据是应要求提交的。充分表述了工艺B和工艺C之间的数据可比性、工艺C仪器设备调整之前和调整之后的可比性、使用不同制造工艺生产的批次之间 的可比性。New Active Substance StatusQuality Aspects勾建新病毒-质量方面Imlygic是一种由野生型单纯疱疹病毒1型（HSV-1）基因组（新分离株JS1; ECAAC登录号01010209） 衍生的抗月中瘤免疫疗法药品。它是一种减毒的、非整合的HSV-1 ,经修饰后可在月中瘤内有效复制，并产生免疫刺激蛋白GM-CSFoImlygic在欧盟可以被认为是一种新的活病毒，因为它以前在该地区或其任

31、何成员国中还没有被批准为一种医疗产品Finished Medicinal Produc缺产品Description of the product and pharmaceutical development产品和药品开发说明Description and composlion of drug produc出品的描述和成分T-ve孤一种用来瘤内注射的、装在小瓶内呈冷冻液状态的、无菌、一次性使用、无防腐剂的药 品。每一小瓶含有1.0mL的可释药量，产品解冻后效价为106pfu/mL或108pfu/mL。T-vec在磷酸钠缓 冲液中配制的，以氯化钠为渗透压调节因子，山梨醇和肌醇为稳定剂。配方中的所有

32、辅料均符合美 国药典（USP）、英国药典（BP）、日本药典（JP）或欧洲药典（PhEur）中规定，如32P.40甫料控制）所示Pharmaceutical developmen制药开发充分描述了药品开发过程，商业化提法的理由是合理的。Manufacturing process developmen制药工艺开发档案中关于使用不同工艺生产的药品批次之间的可比性，从细节层面进行了讨论。并充分证明 了使用不同制造工艺制造的批次之间的可比性。Manufacture of the product and process controls 制造和过程控制Manufacturer牛 产单位参与药品生产、检测和

33、储存的场所及其职责都列于档案并提供GMP证书。Description of manufacturing process and process control制I告工艺和过程控制的苗述药品成品生产工艺前面已充分描述。总之，在瓶装106 pfu/mL和108 pfu/mL药品生产过程中，活病毒是需要提前用稀释缓冲液无菌稀释至目标浓度，使产品解冻后的效力达到106 pfu/mL或108pfu/mL。最终配制的药液进行无菌灌装，然后用塞子和盖子无菌密封。药物经过目视检查和初级贴签后，利用受控冷冻程序进行冷冻后储存在 -80 C10Co为冷冻操作系统已建立温度波动范围，数 据证实这些范围/界限是适用的

34、。Process validation 工序验证根据一项经过批准的协议和预定义的验收标准，这两种规格产品的生产工艺已经在商业生产现 场进行了验证。所有批次也都满足了发布规范的要求。止匕外，对确认批次的装量体积进行装量检查， 确认一致性。Control of excipients 本甫料捽窗I所有辅料均符合Ph.EurM求，是广泛应用于医药制剂中的。Product specification 品技术规格在应用档案中列出了用于控制和放行 T-vec产品的检验方法和验收标准。T-vec药物产品的放行 检验是充足的。为了测试效力，使用了三个单独的检验方法。它们一起评估病毒的关键生物学功能： 对靶细胞白

35、感染、hGM-CSF的表达量和hGM-CSF的生物学活性。药品的质量是通过评估感染性颗粒 与病毒蛋白的比值来控制的。由于已建立了病毒总蛋白与总病毒颗粒之间的相关关系，因此，病毒总蛋白可作为评估病毒总颗粒的替代方法。因此，感染颗粒与总颗粒的比值也通过对感染颗粒与病毒蛋白的比值的评估来替代。作为一个放行控制，申请方正按照Ph.EUR 2.9.20M试可见微粒。Analytical methods 分析方法对用于药品批量放行分析方法进行了充分的描述，并验证了其有效性。Batch analysis量分析提供了临床项目使用批次的批量分析数据和在商业化生产的批次的批量分析数据。59批灌装药物（36比活病毒

36、）中，包括43批108 pfu/mL规格的，16批106 pfu/mL规格的。批次数据显示了批次间的 一致性。Reference material参考材料除了现有参考标准BP1104HA之外，还有将来参考标准的测试和认证也是充分的。Container closure systemfa 材包装容器系统由一个2mL 13毫米环状烯姓聚合物（COP）塑料树脂小瓶、一个13毫米氟聚合物胶 塞、一个交联硅顶和一个可翻转防转灰尘铝盖组成。所有产品包材的制造均符合美国药典（USP）和欧洲药典（PhEur）的要求。Stability of the product 品稳定性所提供的稳定Tt数据支持在SmPC中的

37、保质期。为评估药品的稳定性，申请方利用大量的商业生 产的药品批次进行了实时、真实的稳定性研究。该数据包括42批108 pfu/mL和16批106pfu/mL。从最早的7批108 pfu/mL和最早的3批106 pfu/mL产品中获得了 48个月的稳定性数据。充分讨论了研究中所 用的分析方法的稳定性。根据实时、真实研究的结果，在-80 C长期储存48个月是可以接受的。除了实时的、真实的稳定性研究外，申请人还提供了极限条件下的稳定性数据，这些数据来自于在加速和极限温度储存条件，以及光暴露、解冻温度和解冻后5的储存研究。正如预期的那样，在评估的温度下储存的样品白稳定性下降，降解速度106 PFU/m

38、L批次快于108 PFU/mL批次。根据解冻温度研究和5c长期贮藏实验确定了解冻和使用条件：室温解冻最长时间30 min后，108 PFU/mL5C保存不超48小时、106PFU/mL5 C保存不超12小时是可以接受的批准后的稳定项目和质量保证 是充分的。根据欧盟GMP准则，任何已确认的不符合规格的结果或显著的负面结果，均应向调查员 和EMA报告。Comparability exercise for finished medicinal drug prodUCK产品的可比性研究活病毒和产品加工、可分析的、非临床和临床可比性数据已经提交。对药物产品进行了评估，包括 每种可比性研究和相似性的稳定性

39、评估，商业和临床试验配方之间评估，都显示了可比性。Adventitious agentS卜源物Non-viral adventitious agents 病毒外源物T-vec的生产过程包括控制措施，以防止污染和保持微生物控制。安进公司对从工作细胞库和工 作病毒种子库（WVSS）到最终产品生产T-vec的所有原料进行了检验，以确定是否有任何原材料是动 物来源的，还是与动物来源的材料有产品接触。申请人根据 关于尽量减少通过人和兽医药物产品传 播动物海绵状脑病药物风险的指导说明（EMA/410/01中的原则，对传染性海绵状脑病（TSE）风险进 行了评估。根据评估结果，与T-ve讨目关的TSE风险被确

40、定为可以忽略不计。Viral adventitious agents病毒类外源物鉴于病毒的固有特性，通常用于生物纯化过程中的病毒清除步骤会使所需的产品失活或去除掉。 因此，在T-vec制造过程中，病毒安全性的方法是基于多层风险缓解，包括严格控制原料和起始材料， 使用具有经证实安全状况的细胞 （Vero）,适当的cGMP程序和设施设计特征，对细胞库、病毒种子库、 生产产品细胞、生产代次限制下的病毒进行广泛的病毒检测，并在生产工艺关键点进行病毒检测。这种多层次的方法来尽量减少病毒污染的风险，为生产提供安全保证。应要求，申请人已删除在病毒收获阶段进行的病毒污染物体内测试。根据风险评估，申请人将 保持

41、对每一生产批次进行现有的病毒污染物体外检测。这一做法得到认可。总之，对外源性物质的安全性评价进行了适当的探讨和充分的阐述。GMOGMO, T-VEC （JS1/ICP34.5-/ICP4HGM-CSF）是一种非致病的重组单纯疱疹病毒 1型 （HSV-1）。T-vec是通过修饰野生型HSV-1基因组（新分离株JS1）而产生，删除病毒基因组的两个 ICP34.5拷贝和ICP47拷贝，并在ICP34.5区域插入人GM-CSF的表达基因。（见环境风险评估）。Post approval change management protdWl 匕变更管理协议作为MA申请的一部分，Amgen已经提交了一个经过批

42、准的变更管理协议 （PACMP）。PACMP的 目的是扩大t-vec的细胞建造过程。在获得市场授权和 PACMP批准后，协议中所描述的更改将通过 旧 类型的变更申请程序进行介绍。所提议的修改已得到充分的介绍和讨论。申请者已同意所要求的小修改和/或澄清，最后更新的PACMP将按照ECTD的结束顺序提交。Discussion on chemical, pharmaceutical and biological aspeCtS、 药学和生物方面的讨 论质量档案文件充分描述了活病毒和药物产品的特征、生产和控制。所提供的信息表明，该活病 毒和药物产品的连续批量生产达到了一个明确的质量标准。对该产品的非病

43、毒和病毒安全性进行了 正确的评价，并对其安全性进行了论证。Conclusions on the chemical, pharmaceutical and biological aspects、药学和生物方面 的结论根据SMPC中定义的条件，IMLIGIC的质量是可接受的。已经研究了与临床的均一性相关的 物理化学和生物学方面，并以令人满意的方式进行控制。以确保病毒/TSE安全的数据已被提呈。CHMP认可CAT对化学、制药和生物学方面的结论的评价。Recommendation（s） for future quality development 来质量发展的建议鉴于最高行政当局有义务适当考虑技术和科

44、学进步，CAT委员会针对进一步调查提出两点建议。CHM赞同CA倭员会的关于未来的质量发展建议的评估。Non-clinical aspects2.3非临床部分介绍The nonclinical pharmacology and toxicology programs have included studies designed to evaluate the mechanismof action, biodistribution and shedding, general safety of talimogene laherparepvec following single and repeat

45、administration, and effects on embryo-foetal development.In vivo pharmacodynamics studies were performed inin vivonude (xenograft studies) or immunocompetent (syngeneic studies) BALB/c mice. A mouse surrogate HSV-1 vectorencoding the murine GM-CSF (OncoVEX; JS1/34.5-/47-/mGM-CSF) was developed and u

46、sed for themouse studies because of the inability of human GM-CSF to bind to mouse GM-CSF receptor. Such studies includethe analysis of anti-tumour effect of OncoVEXon mice previously exposed to wild type HSV-1. Nonclinicalpharmacokinetic evaluation included studies addressing biodistribution, viral

47、 shedding, and replication oftalimogene laherparepvec. The nonclinical toxicology studies consisted of general toxicity studies up to 12 weeks in mice and an embryo-foetal development study in mice. Additional single dose studies were also conducted in rats and dogs. Pivotal repeat-dose toxicology,

48、biodistribution, and embryo-foetal development studies wereperformed in accordance with Good Laboratory Practice (GLP) regulations.非临床药理学和毒理学项目包括T-vec的作用机制、生物分布和降解非临床药理学和毒理学项目包括评估talimogene laherparepvec 的作用机制、生物分布和脱落、单次和重复给药后的总体安全性以及对胚胎发育的影响。体内药效学研究在裸鼠（异种移植研究）或免疫活性（同源研究）BALB/c小鼠中进行。编码小鼠 GM-CSF （onc

49、omgm-csf;jsr /34.5-/47-/mGM-CSF） 由于人GM-CSF不能与小鼠GM-CSF受体结合。这些研究包括分析致癌烦恼GM-CSF对先前暴露于野生型HSV-1的小鼠的抗肿瘤作用。非临床药代动力学评价包括研究talimogene laherparepvec的生物分布、病毒脱落和复制。非临床毒理学研究包括长达12周的小鼠一般毒性研究和小鼠胚胎发育研究。在大鼠和狗身上也进行了额外的单剂量研究。关键的重复剂量毒理 学、生物分布和胚胎胚胎发育研究是根据良好的实验室实践（GLP）条例进行的.药理学，药物学Primary pharmacodynamic studies药效学研究In v

50、itro体外实验应用细胞病理学效应(CPE)法评价OncoVEX GM-CSF对肿瘤细胞体外裂解作用。观察了 T-vec对一系列的人肿瘤细 胞株(黑色素瘤、结直肠、乳腺、脑、咽、前列腺、鳞状细胞)的体外杀伤作用。在 MOI= 0.1和1感染T-vec条件下,对细胞感染后24、48h分别用台盼蓝染色法进行细胞计数分析其裂解作用(细胞死亡百分比)。选择单个培养时间(24h或48h),对每株细胞死亡率最大的细胞株进行ELISA法测HGM-CSF结果如表3所示，并显示了剂量和时间的依赖性反应。黑色素瘤细胞株(SK-MEL-28)又寸T-vec的感染高度敏感，感染 24h后MOI 0.1和1细胞死亡率分

51、别为48喷口89% ,感染48h后细胞死亡率分别为84噂口100%感染24h后，在MO为0.1和1的条件下，黑色素瘤细胞株(SK-MEL-分别分泌 HGM-CSF 69 ng/mL和 140 ng/mL。Cellular mediated immune response in A20 tumour bearing mice treated with JS1/34.5-/47- (Study 4648-00071)Measurement of CT26-specific cytotoxic T- lymphocytes after intra-tumoral injection of mouse

52、 surrogate into CT26 tumour bearing female BALB/c mice (Study R20130079)These studies investigated the T cell immune response in mice bearing A20 tumors treated with JS1/34.5-/47- (OncoVEX backbone). Immune-response was measuredex vivo by the T-lymphocyte activation as a response toIFN ? release and

53、 by development of specific cytotoxic T-cells using cytotoxic T-lymphocyte assay (CTL). The IFN?release was stimulated most notably in splenocytes isolated from the mice treated with mouse surrogate and incubated with A20 tumour cells (Figure 3). The stimulation of IFN? release was seen at the earli

54、est time pointtested (3 days) and remained high during the study duration (up to 7 days). Moderate levels of IFN? release wasdetected at 5 days insplenocytes isolated from the JS1/34.5-/47- treated mice as a specific response to the A20 tumour cells. Splenocytes were incubated with A20 tumour cells

55、(+A20) or without (-A20).Table 3: In vitro efficiency of talimogene laherparepvec (shown as cancer cell death%)Table 3:In vitro efficiency of talimogene laherparepvec (shown as cancer cell death%)Cell Line24 HR Incubation45 HR incubationMO 1-0 JMOI-1MOI-0.1MOh1% cell 加QThhGM-C8F (ng/mL% cell deathhG

56、M CSF |n 承 niL)% celli deathhGM-CSF1MmL)% cell deathhGM-CSF (ng/mL)FalDu36.421.9ioa2135100nt100ntHT291533.8E8.3176284.6nt100ntSK MEL-2848.3693S4.1140.689.4nt100ntU-87 MG0nt54.4nt47.137.195.241.4MDA-MB-231127nt136nt0153.96442839FaDu: human squamous cell carcinoma (pliai-ynx) cell line HT29: human col

57、orectal cancer cell line/ SK-MEzL-29： human melanonna cell linej U-S7 MG: human gliobllatoma cell line, MDA-MB-231: human breast adenocarcinoma cell line.FaDu :人鳞状细胞癌(咽部)细胞系； HT29:人类结直肠癌；SK-MEL-28:人黑色素瘤细胞；U-87 MG:人类胶质母细胞瘤；MDA-MB-231:人乳腺癌Figure 3: IFN ? release from splenocytes (including T-cells) is

58、olated from JS1/34.5-/47- (OncoVEX backbone, hGM-CSF-deficient talimogene laherparepvec), mouse surrogate (OncoVEX mouseGM-CSF) or vehicle (PBS)-treated mice, or untreated na? ve miceFigure 3:IFNY release from splenocytes (including T-cells) isolated from JS1/34.5-/47-(OncoVEX bckboner hGM-CSF-defic

59、ient talimogene laherparepvecL mouse surrogate (OrcoVEX mouseGM-CSF) or vehicle (PBS) -treated mice, or untreated nafve miceIn vivoEfficacy of Talimogene Laherparepvec in the B16F10- muNectin1 Melanoma Syngeneic Tumour Model in FemaleC57BL/6 Mice ( Study R20150003)Tumours were initiated by SC implan

60、tation of 1 x 105 B16F10/mNectin-1 tumour cells into the right flank ofC57BL/6 mice. After 10 days, animals (n=10) received 3 intratumoural doses of 5 x 106 PFU (50 g L) of talimogenelaherparepvec (or other viral constructs or vehicle) on days 10, 13, and 16. The animals in the control group receive